黃　薇

（天津科技大學生物工程學院工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點實驗室，天津300457）

0　引言

硫酸沃拉帕沙（vorapaxar sulfate）由Merck公司研發(fā)并在2014年5月8日經(jīng)FDA批準上市。硫酸沃拉帕沙的分子式為C29H33FN2O4·H2SO4。硫酸沃拉帕沙主要適用于心臟病患者或腿部動脈堵塞患者，用以進一步降低心臟病發(fā)作、中風、心血管死亡的風險。硫酸沃拉帕沙是一種首創(chuàng)的蛋白酶激活受體1（PAR-1）拮抗劑，可抑制由凝血酶誘導的血小板聚集，從而抑制血凝塊的形成。[[5-（3-氟苯基）-2-吡啶基]甲基]膦酸二乙酯作為合成硫酸沃拉帕沙的中間體之一，其合成研究對硫酸沃拉帕沙的生產(chǎn)具有重要意義。

1　合成路線的確定

1.1　文獻合成路線一

[[5-（3-氟苯基）-2-吡啶基]甲基]膦酸二乙酯的文獻合成路線一如圖1所示。以5-溴-2-甲基吡啶為原料，與3-氟苯硼酸進行偶聯(lián)反應，得到5-（3-氟苯基）-2-甲基砒啶，最后在二異丙基氨基鋰作用下與二乙基磷酰氯反應制得[[5-（3-氟苯基）-2-吡啶基]甲基]膦酸二乙酯，總收率可達29%[1-2]。該合成路線中的溴代物活性較低，反應收率較低，且催化劑使用成本較高，導致原材料成本提高，不適用于放大生產(chǎn)。

1.2　文獻合成路線二

圖1　文獻合成路線一

[[5-（3-氟苯基）-2-吡啶基]甲基]膦酸二乙酯的文獻合成路線二如圖2所示。以5-溴-2-甲基吡啶為原料，經(jīng)間氯過氧苯甲酸（m-CPBA）制得5-溴-2-甲基吡啶-1-氧化物。

5-溴-2-甲基吡啶-1-氧化物與三氟乙酸酐反應后制得5-溴-2-羥甲基吡啶三氟乙酸鹽，再經(jīng)游離、氯代、磷酸酯化得[（5-溴吡啶-2-基）甲基]磷酸二乙酯，再與3-氟苯硼酸進行偶聯(lián)反應制得[[5-（3-氟苯基）-2-吡啶基]甲基]膦酸二乙酯，總收率可達25.5%[3-4]。該合成路線的原料價廉易得，反應條件溫和，但由于反應步驟較多，生產(chǎn)成本相對較高。

1.3　文獻合成路線三

[[5-（3-氟苯基）-2-吡啶基]甲基]膦酸二乙酯的文獻合成路線三如圖3所示。以6-甲基-3-吡啶醇為原料，與三氟甲磺酸酐反應制得化合物2-甲基-5-[（三氟甲基）磺酸基]吡啶，再與3-氟苯硼酸進行偶聯(lián)反應，最后在二異丙基氨基鋰（LDA）作用下與氯磷酸二乙酯反應制得[[5-（3-氟苯基）-2-吡啶基]甲基]膦酸二乙酯[5]。該合成路線總收率可達47.36%。該合成路線需要在-70～-60℃條件下反應，但是相比其他合成路線，該合成路線的反應步驟比較少，且原料易得。故本文參照該合成路線進行研究。

圖2　文獻合成路線二

圖3　文獻合成路線三

2　實驗部分

2.1　反應路線

本實驗反應采用文獻合成路線三的方法。

2.2　儀器與試劑

Brucker Ascend TM 400核磁共振波普儀；1100型安捷倫液相質(zhì)譜聯(lián)用儀；反應中采用的試劑均為化學純試劑。

2.3　工藝流程

整體合成路線的工藝流程如圖4所示。

2.4　2-甲基-5-[（三氟甲基）磺酸基]吡啶的合成

2.4.1實驗用原料

本步驟實驗用原料如表1所示。

2.4.2合成操作實例

在氮氣保護下向反應瓶中加入425 mL二氯甲烷，然后再向體系中加入65 g的6-甲基-3-吡啶醇和75 mL吡啶。將體系溫度降到-5～0℃后，向體系內(nèi)滴加200 g三氟甲磺酸酐。物料投加完畢后，使體系自然回溫至室溫。待反應完全后，將體系倒入350 mL水中，用250 mL二氯甲烷萃取，后用2 mol/L的稀鹽酸洗滌，經(jīng)干燥濃縮后得到122.1 g棕色液體。

2.4.3檢測項目和質(zhì)量標準

本步驟實驗檢測項目和質(zhì)量標準如表2所示。

2.4.4實驗結(jié)果

本步驟實驗結(jié)果如表3所示。

2.4.5實驗小結(jié)

本步驟產(chǎn)品定性的檢測結(jié)果為：（1）1H NMR（400 MHz，CDCl3）：2.52（單重峰，3個H，甲基），7.17～7.19（雙重峰，1個H，次甲基），7.42～7.45（多重峰，1個H，次甲基），8.38～8.39（雙重峰，1個H，次甲基）。（2）質(zhì)譜（質(zhì)子數(shù)/電荷數(shù)）：226。本步驟反應優(yōu)化后的純度和收率能夠達到預期指標。

圖4　整體合成路線工藝流程

表1　實驗用原料

表2　檢測項目和質(zhì)量標準

表3　實驗結(jié)果

2.5　5-（3-氟苯基）-2-甲基吡啶的合成

2.5.1實驗用原料

本步驟實驗用原料如表4所示。

2.5.2合成操作實例

在反應瓶中依次加入500 mL甲苯、86 g的2-甲基-5-（（三氟甲基）磺酸基）吡啶、80 g的3-氟苯硼酸、147.7 g碳酸鉀、250 mL乙醇、5 g四三苯基膦鈀，將體系溫度升至90℃，保溫反應5 h。反應完全后，將體系溫度降至室溫并將體系倒入500 mL水中，用250 mL乙酸乙酯進行萃取，水洗，干燥濃縮得56.7 g棕色液體。

2.5.3檢測項目和質(zhì)量標準

本步驟檢測項目和質(zhì)量標準如表5所示。

2.5.4實驗結(jié)果

本步驟實驗結(jié)果如表6所示。

2.5.5實驗小結(jié)

本步驟產(chǎn)品定性的檢測結(jié)果為：（1）1H NMR（400 MHz，CDCl3）：2.53（單重峰，3個H，甲基），6.98（三重峰，1個H，次甲基），7.14（單重峰，1個H，次甲基），7.15（單重峰，1個H，次甲基），7.24～7.25（雙重峰，1個H，次甲基），7.31～7.35（多重峰，1個H，次甲基），7.67～7.69（多重峰，1個H，次甲基），8.67（單重峰，1個H，次甲基）。（2）質(zhì)譜（質(zhì)子數(shù)/電荷數(shù)）：188。本步驟反應優(yōu)化后的純度和收率能夠達到預期指標，操作相對較為簡單。

表4　實驗用原料

表5　檢測項目和質(zhì)量標準

表6　實驗結(jié)果

2.6　[[5-（3-氟苯基）-2-吡啶基]甲基]膦酸二乙酯的合成

2.6.1實驗用原料

本步驟實驗用原料如表7所示。

2.6.2合成操作實例

在氮氣保護下，將70.7g二異丙基胺加入到350mL四氫呋喃中，在氮氣保護下將體系溫度降溫至在-60～-40℃，再將280 mL正丁基鋰滴加到二異丙基胺的四氫呋喃溶液中，滴加結(jié)束后，在-50～-40℃條件下保溫反應1 h，備用。將42 g的5-（3-氟苯基）-2-甲基吡啶溶于650 mL四氫呋喃溶液中，待溫度降至-60℃，控溫將新制的二異丙基氨基鋰溶液滴加到體系中。滴加完畢，維持-70～-60℃保溫反應1.5 h，將65 g氯磷酸二乙酯控溫在-70～-60℃條件下滴加到體系中，投加完畢后在-40℃條件下保溫2.5 h。反應完全后，將體系倒入1.85 L飽和氯化銨溶液中，用1.5 L乙酸乙酯萃取，水洗，干燥，濃縮得粗品，使用石油醚/乙酸乙酯與二氯甲烷/甲醇作為淋洗液，分階段過硅膠墊得到52.74 g紅棕色液體，收率為76.0%。

2.6.3檢測項目和質(zhì)量標準

本步驟檢測項目和質(zhì)量標準如表8所示。

2.6.4實驗結(jié)果

本步驟實驗結(jié)果如表9所示。

2.6.5實驗小結(jié)

本步驟產(chǎn)品定性的檢測結(jié)果為：（1）1H NMR（400 MHz，CDCl3）：1.18（單重峰，6個H，乙烷），3.08～3.16（多重峰，2個H，亞甲基），3.93～3.98（三重峰，4個H，乙烯），7.13～7.16（多重峰，2個H，乙炔），7.28～7.35（雙重峰，1個H，次甲基），7.45～7.47（雙重峰，1個H，次甲基），7.63～7.69（多重峰，1個H，次甲基），7.87～7.89（雙重峰，1個H，次甲基），8.60～8.62（雙重峰，1個H，次甲基）。（2）質(zhì)譜（質(zhì)子數(shù)/電荷數(shù)）：324。本步驟反應優(yōu)化后的純度和收率能夠達到預期指標，使用新制的二異丙基氨基鋰溶液反應效果會更好，可以制備出合格的產(chǎn)品供后續(xù)反應使用。

表7　實驗用原料

表8　檢測項目和質(zhì)量標準

表9　實驗結(jié)果

3　研究結(jié)果

本實驗結(jié)果顯示，該合成路線反應總收率為54.9%，上述三個步驟的反應收率和純度相對比較穩(wěn)定。通過對比研究文獻發(fā)現(xiàn)，該工藝合成路線是收率較高的一條路線。通過優(yōu)化該路線每一個步驟的處理過程，簡化了各步驟操作，提高了操作簡便性和反應總收率。

4　結(jié)語

本實驗合成路線需要注意以下問題：（1）滴加三氟甲磺酸酐過程中，注意控制溫度，滴加過快，溫度上升明顯，有可能導致副產(chǎn)物產(chǎn)生，滴加過程中需要控溫；（2）正丁基鋰使用過程中要保證無水無氧，滴加時需控制好溫度，必要時在投料前準備好砂土；（3）5-（3-氟苯基）-2-甲基吡啶的合成中，反應結(jié)束淬滅時，乙酸乙酯萃取出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可嘗試過濾后再萃??；（4）最終產(chǎn)品可嘗試用硅膠過柱，純度可達到98%以上。

本文所選路線摒除了其他路線中使用過氧化物的弊端，提高了收率。該反應路線中的磷酯化需要在-70～-60℃條件下反應，盡管反應條件相對苛刻，但反應時間較短，商業(yè)化生產(chǎn)過程中能顯著提高生產(chǎn)效率，有效縮短生產(chǎn)時間，降低生產(chǎn)成本，同時縮短硫酸沃拉帕沙原料藥的生產(chǎn)周期。