★ 易徐航　張鈺琪　袁娟麗（萍鄉(xiāng)市食品藥品檢驗(yàn)所 江西 萍鄉(xiāng) 337000）

鴨腳通顆粒為萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院的醫(yī)院制劑，具有益氣補(bǔ)虛之功效，用于尿路結(jié)石的治療。本品為銀杏樹根經(jīng)加工制成的顆粒。銀杏又稱白果，是我國特有的珍稀樹種。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)銀杏的化學(xué)成分、藥理作用等做了大量的研究工作。研究發(fā)現(xiàn)，其主要成分包括淀粉、蛋白質(zhì)、酚類、黃酮類、萜類、生物堿、多糖類、氨基酸、微量元素等成分，具有鎮(zhèn)咳、平喘、抗菌、抗疲勞、消炎、抗病毒、抗癌等作用［1-2］；其中銀杏樹根中主要含有黃酮類化合物，不含山奈酚、異鼠李素等物質(zhì)［3-4］。目前鴨腳通顆粒收錄于2007年版《江西省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)》，主要質(zhì)控項(xiàng)目?jī)H為性狀、薄層鑒別兩個(gè)項(xiàng)目，尚未有鴨腳通顆粒的含量測(cè)定方法。隨著國家對(duì)醫(yī)院制劑標(biāo)準(zhǔn)的提高和規(guī)范化管理的加強(qiáng)［5］，為了保證制劑質(zhì)量，現(xiàn)建立鴨腳通顆粒中總黃酮的含量測(cè)定方法，本方法以蘆丁為指標(biāo)性成分采用紫外分光光度法測(cè)定鴨腳通顆粒中總黃酮的含量，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確，可用于鴨腳通顆粒的質(zhì)量控制。

1　材料

雙光束紫外可見分光光度計(jì)TU-1901（北京普析通用儀器有限公司）；ME-204（萬分之一天平，梅特勒-托利多國際貿(mào)易（上海）有限公司）；CP225D 電子分析天平（十萬分之一天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。蘆丁對(duì)照品（92.6%，批號(hào)100080-201409，中國食品藥品檢定研究院）；水為娃哈哈水；鴨腳通顆粒由萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院提供；其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1對(duì)照品溶液的制備 取蘆丁對(duì)照品20mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加70%乙醇70mL，超聲處理使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得（每1mL中含蘆丁0.2mg）。

2.2供試品溶液的制備 取10袋本品內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取約2.5g，精密稱定，置25mL量瓶中，加70%乙醇20mL，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）20min，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.3吸收波長(zhǎng)的選擇 取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液3.0mL，分別置25mL量瓶中，加水至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，混勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，同法用70%乙醇作空白。采用紫外分光光度計(jì)在400～700nm對(duì)蘆丁對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶劑進(jìn)行光譜掃描，以確定蘆丁對(duì)照品溶液和樣品溶液的最大吸收波長(zhǎng)，最大吸收波長(zhǎng)為508nm。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL，分 別 置 25mL量 瓶中，加水至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液 1mL，混勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min；以相應(yīng)的溶液為空白。在508nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)（Y）、濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.5測(cè)定方法 取上述供試品溶液適量，4000r/min離心10min，精密量取上清液3mL，置25mL量瓶中，照“2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下的方法，自“加水至6mL”起，依法測(cè)定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算供試品溶液中蘆丁的量，即得。

2.6方法學(xué)考察

2.6.1線性范圍考察 按“2.4”項(xiàng)下制備標(biāo)準(zhǔn)曲線供試品，在508nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)（Y）、濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=74.57339X＋0.32877，r=0.9999。結(jié)果表明蘆丁濃度在7.5300～45.1810μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.6.2精密度試驗(yàn) 取同一標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按“2.5”項(xiàng)下測(cè)定法重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)定蘆丁吸光度的RSD為0.10%。結(jié)果表明該方法具有較好的精密度。

2.6.3重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品共6份，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試液，測(cè)定蘆丁的含量（mg/袋），計(jì)算得蘆丁含量的RSD為0.58%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.6.4穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，室溫保存，按“2.5”項(xiàng)下測(cè)定法測(cè)定，分別于0，5，10，15，20，25，30，40，50min測(cè)定蘆丁的吸光度，測(cè)得蘆丁吸光度的RSD為2.86%，結(jié)果表明供試品溶液在室溫下50min內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.5加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量（14.38mg/袋）的鴨腳通顆粒樣品約1.25g，精密稱定，研細(xì)，置25mL量瓶中，分別加入適量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，按“2.5”項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率（n=6），結(jié)果表明蘆丁的平均回收率為94.24%（RSD%=2.98），符合方法學(xué)要求。見表1。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.7樣品測(cè)定 取不同批號(hào)鴨腳通顆粒樣品，按“2.5”項(xiàng)下測(cè)定法測(cè)定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算供試品溶液中蘆丁的量，結(jié)果見表2。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3） mg/袋

3　討論

紫外分光光度法是常見的總黃酮測(cè)定方法之一［6］，其中以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉法最常用［7］，以蘆丁作為對(duì)照，銀杏樹根中黃酮類化合物與鋁鹽（NaNO2-Al（NO3）3-NaOH）反應(yīng)生成紅色絡(luò)合物，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰，故本試驗(yàn)采用比色法測(cè)定鴨腳通顆粒中總黃酮的含量。

在提取方法的選擇中，比較了以70%乙醇、甲醇、無水乙醇為提取溶劑，結(jié)果表明以70%乙醇提取效率最高，分別超聲處理10，20，30min，最后確定采用70%乙醇超聲（500W，40kHz）處理20min為宜。在做穩(wěn)定性試驗(yàn)考察時(shí)發(fā)現(xiàn)樣品隨著時(shí)間的增加，吸光度會(huì)逐漸的減少，故制備完對(duì)照品、供試品溶液應(yīng)在50min之內(nèi)完成測(cè)定，嚴(yán)格控制測(cè)定的時(shí)間。

從對(duì)5批鴨腳通顆粒中總黃酮的含量測(cè)定結(jié)果來看，總黃酮含量相差較大，提示銀杏樹根原藥材的質(zhì)量存在差別，為避免由原藥材引起中成藥的療效差異，因此有必要對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制。本文建立了鴨腳通顆粒中總黃酮的含量測(cè)定方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法準(zhǔn)確、快速，簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，可用于鴨腳通顆粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)。