余秋鋒，溫麗萍

(廣東省韶關(guān)市婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心生殖醫(yī)學(xué)中心　512026)

伴隨人類生活節(jié)奏，飲食習(xí)慣及生存環(huán)境的變化，不孕不育的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，男性不育患者人數(shù)越來越多，在不孕不育夫婦中，男性因素約為40%[1]。精子形態(tài)和前向運(yùn)動(dòng)精子比例是評(píng)價(jià)男性生育能力的兩個(gè)重要指標(biāo)。有研究提示僅通過精子形態(tài)預(yù)測體外受精-胚胎移植(IVF-ET)的助孕結(jié)局有一定局限性[2]。本研究聯(lián)合精子形態(tài)及前向運(yùn)動(dòng)精子(PR)比例探討其對IVF-ET助孕結(jié)局的影響。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇本中心2015年1月至2017年8月新鮮移植周期行IVF助孕的407對夫婦作為研究對象，以取卵日男方精液處理前情況作為分組標(biāo)準(zhǔn)，以相應(yīng)組別的助孕結(jié)局為研究目標(biāo)。入組標(biāo)準(zhǔn)：女方年齡<38歲，采用長效長方案促排；不孕因素為盆腔及輸卵管因素；基礎(chǔ)促卵泡生長激素(FSH)<12.0 mIU/mL；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)：18.5～24.9 kg/m2；獲卵數(shù)6～24個(gè)；決定日內(nèi)膜厚度≥6.0 mm。排除子宮內(nèi)膜異位癥，輸卵管積水及疤痕憩室等影響胚胎著床的因素。

1.2方法

1.2.1精液分析按照世界衛(wèi)生組織(WHO)《精液質(zhì)量分析(第5版)》[3]標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行精液分析，禁欲2～7 d，于取卵當(dāng)天采集精液，2 h內(nèi)行精液常規(guī)分析(儀器為西班牙SCA全自動(dòng)精液質(zhì)量分析儀，型號(hào)為CX41RF)，為保證分析結(jié)果，每例精液取樣2次分別測定，取平均值作為最終結(jié)果；并于精液分析的同時(shí)使用拉薄技術(shù)制備2份精液涂片。精子形態(tài)分析采用Diff-Quik 快速染色(試劑盒為深圳華康醫(yī)學(xué)生物工程有限公司生產(chǎn))，1 000倍油鏡下分析2組精液涂片，每張涂片計(jì)數(shù)精子總數(shù)不低于200條，取平均值作為最終形態(tài)結(jié)果。

1.2.2資料分組根據(jù)測得的PR比例及計(jì)數(shù)的正常精子形態(tài)(NSM)百分比，將標(biāo)本分為弱畸精組(PR<32%且NSM<4%)、弱精組(PR<32%且NSM≥4%)、畸精組(PR≥32%且NSM<4%)、正常組(PR≥32%且NSM≥4%)。

1.2.3促排方案長效長方案：從黃體中期開始給予促性腺激素釋放激素(GnRH-a)降調(diào)節(jié)，月經(jīng)來潮后根據(jù)降調(diào)節(jié)水平開始促性腺激素(Gn)麗申寶(麗珠，珠海)或果納芬(默克-雪蘭諾，瑞士)促排卵，結(jié)合超聲觀察和血清激素監(jiān)測卵泡發(fā)育情況并調(diào)整Gn用量。當(dāng)至少有一個(gè)卵泡平均徑線達(dá)到18 mm，或至少兩個(gè)卵泡徑線達(dá)到17 mm時(shí)，給予人絨毛膜促性腺激素(HCG) 5 000～10 000 U誘發(fā)卵子成熟。HCG注射后36～38 h行陰道超聲引導(dǎo)下經(jīng)陰道穿刺取卵。

1.2.4胚胎評(píng)分參照以前本中心裂期評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[4]，并結(jié)合目前實(shí)際作修改：其中7～9個(gè)細(xì)胞，一、二級(jí)胚胎為優(yōu)質(zhì)胚胎；4個(gè)細(xì)胞以上，一、二、三級(jí)胚胎為可用胚胎。移植當(dāng)天選取2～3枚最優(yōu)胚胎移植，其余結(jié)合患者意愿選擇性冷凍或部分冷凍后養(yǎng)囊胚。

1.2.5觀察指標(biāo)及計(jì)算方法正常受精率(第1天雙原核數(shù)/獲卵數(shù)×100%)，卵裂率(第3天卵裂胚胎數(shù)/獲卵數(shù)×100%)，優(yōu)質(zhì)胚胎率(第3天優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/正常受精卵裂胚胎數(shù)×100%)，可用胚胎率(第3天可利用胚胎數(shù)/卵裂胚胎數(shù)×100%)，臨床妊娠率(臨床妊娠周期/移植周期×100%)，胚胎種植率(著床胚胎數(shù)/移植胚胎數(shù)×100%)。

2　結(jié)　　果

2.1各組患者一般資料比較所有407例標(biāo)本分為4組：弱畸精組36例，弱精組35例，畸精組121例，正常組215例。4組患者的女方年齡、內(nèi)膜厚度、獲卵數(shù)、移植胚胎數(shù)及BMI比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1　　各組患者女方一般臨床資料比較

表2　　各組患者IVF-ET結(jié)局比較[n/n(%)]

注：與正常組比較，*P<0.05；與弱精組比較，#P<0.05

2.2各組患者IVF-ET結(jié)局比較弱畸精組與弱精組比較各指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；弱畸精組與畸精組比較，正常受精率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；弱精組與畸精組比較，優(yōu)質(zhì)胚胎率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；正常組與其他三組比較，正常受精率、卵裂率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)，且正常組分別與弱畸精組的胚胎種植率、弱精組的優(yōu)質(zhì)胚胎率、畸精組的可用胚胎率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

3　討　　論

精液常規(guī)分析是評(píng)估男性生育能力的最基本的檢查方法，臨床應(yīng)用非常廣泛[5]。其中精子畸形率直接影響精子的功能，是使常規(guī)IVF受精率低下的一個(gè)重要因素；精子的前向運(yùn)動(dòng)與受孕也存在密切關(guān)聯(lián)。王毅文[6]和曹珂[7]的研究均提示精子形態(tài)和活力分析是男性不育診斷的有效參考指標(biāo)。但兩者設(shè)計(jì)方案均為不育男性和已生育男性比較。

本研究直接觀察試管嬰兒周期男性患者取卵當(dāng)天NSM比例及PR比例對正常受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、臨床妊娠率及胚胎種植率的影響。結(jié)果顯示：同是弱精條件下，NSM比例小于4%(弱畸精組)或大于4%(弱精組)并不影響IVF-ET妊娠結(jié)局(P>0.05)；但同是畸精條件下，PR比例正常的患者(畸精組)其正常受精率明顯高于PR比例不正常(弱畸精組)的患者(P<0.05)；而弱精組與畸精組比較，優(yōu)質(zhì)胚胎率存在明顯差異(P<0.05)，提示似乎精子形態(tài)正常與否會(huì)影響優(yōu)質(zhì)胚胎的形成比例，但正常組優(yōu)質(zhì)胚胎率卻明顯低于弱精組(P<0.05)，結(jié)合這兩種情況分析可能是由于弱精組例數(shù)太少造成的，形態(tài)正常與否是否影響優(yōu)質(zhì)胚胎形成尚需要更大數(shù)據(jù)的對比研究；正常組正常受精率、卵裂率與其他3組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且正常組與弱畸精組胚胎種植率存在明顯差異(P<0.05)，與其他兩組雖然差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但正常組仍有增高趨勢，說明精子形態(tài)及PR比例兩者正常與否直接影響配子能否正常受精及卵裂，NSM及PR比例降低將顯著降低胚胎種植潛能。羅開玲等[8]及史軼超等[9]的研究結(jié)果顯示，NSM與IVF-ET的受精率呈正相關(guān)；GHIRELLI-FILHO等[10]的研究則提示精子形態(tài)對IVF-ET結(jié)局無影響。上述研究結(jié)果均與本研究有所差別，本研究中PR比例正常的前提下精子形態(tài)與受精率等呈正相關(guān)，而在弱精子的情況下兩者并無差別，說明單純討論精子形態(tài)對受精的影響存在片面性。

綜上所述，聯(lián)合精子形態(tài)與PR比例能更好預(yù)測IVF-ET妊娠結(jié)局，而單純分析NSM比例存在一定片面性。當(dāng)然這一結(jié)論需要更大樣本進(jìn)一步研究。