張廣平 昌佑澤 李從良 侯紅平 楊依霏 葉祖光

摘要 目的：觀察西沙諾麗的通便和降糖的藥效。方法：ICR小鼠，灌胃給予不同劑量的西沙諾麗凍干粉，觀察對(duì)正常小鼠小腸運(yùn)動(dòng)和對(duì)鹽酸洛哌丁胺導(dǎo)致便秘模型小鼠首粒排便時(shí)間、排便粒數(shù)及糞便重量的影響。觀察西沙諾麗凍干粉對(duì)鏈脲佐菌素導(dǎo)致小鼠糖尿病模型和對(duì)正常大鼠血糖和糖耐量的影響。結(jié)果：西沙諾麗能夠顯著增加正常小鼠小腸推進(jìn)率，可明顯縮短鹽酸洛哌丁胺導(dǎo)致便秘模型動(dòng)物首次排便時(shí)間，能夠顯著增加模型動(dòng)物排便次數(shù)和動(dòng)物糞便重量。西沙諾麗能夠顯著降低鏈脲佐菌素導(dǎo)致糖尿病模型血糖水平，但是對(duì)正常大鼠血糖和糖耐量的沒有明顯影響。結(jié)論：西沙諾麗凍干粉具有通便和降糖作用。

關(guān)鍵詞 西沙諾麗；通便；降糖；藥效作用

Abstract Objective：To observe the defaecation and hypoglycemic effect of Xisha Noni.Methods：The intestine movement in normal mice，and the time for the first defecation，defecation number and soil weight of constipation mouse model induced by loperamide hydrochloride were observed following the treatment with Xisha Noni lyophiled powder at different dose that were orally taken by the normal mice and the constipation mice in order to investigate its defaecation effect.The diabetic mouse model induced by streptozotocin was adopted in the experiment to observe the hypoglycemic action of Noni.Also，its effects on the blood sugar and glucose tolerance in normal rats were studied.Results：Xisha Noni can remarkably increase the small intestine propulsive proportion in the normal mice，shorten the time for the first defecation in constipation mice models induced by loperamide hydrochloride，and increase the defecation number and their soil weight.In addition，Xisha Noni can remarkably decrease blood glucose level in the diabetic mice model induced by streptozotocin，but it had no significant effects on blood glucose and glucose tolerance in normal rats.Conclusion：Xisha Noni lyophiled powder appears to possess the effects of both defaecation and hypoglycemic.

Key Words Xisha Noni； Defaecation； Hypoglycemic； Pharmacodynamic action

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.04.048

諾麗（Noni），為茜草科巴戟天屬植物，學(xué)名海巴戟（Morinda citrifolia L.），為熱帶常綠多年生灌木，其果實(shí)、葉子、枝干、根部均可入藥。諾麗果作為傳統(tǒng)藥食兩用的習(xí)俗已有悠久的歷史，是南太平洋島嶼居民常用的保健食品和藥用植物。西沙諾麗源于我國(guó)西沙群島，于1991年引種海南省種植，近幾年已被大面積推廣種植，目前諾麗果漿在我國(guó)作為新資源食品應(yīng)用，已有普通食品和保健食品批準(zhǔn)上市，如諾麗飲品（諾麗發(fā)酵品和諾麗果汁）、諾麗果粉、諾麗加藍(lán)莓果汁等。人體食用西沙諾麗發(fā)現(xiàn)該品具有很好的通便和降糖作用[1-2]，為挖掘海南西沙諾麗潛在的利用與開發(fā)價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)對(duì)海南西沙諾麗的通便和降血糖藥效學(xué)作用進(jìn)行研究，為諾麗的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 ICR小鼠，SPF級(jí)，18～22 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司許可證號(hào)：SCXK（京）2013-0001。SD大鼠，SPF級(jí)，180～200 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司許可證號(hào)：SCXK（京）2006-0009。

1.1.2 藥物 西沙諾麗（以下簡(jiǎn)稱諾麗）：批號(hào)20150906，100 kg鮮果分選清洗，控干外表水分，密封儲(chǔ)存，榨汁得60 kg果汁，真空冷凍干燥得到3 kg凍干粉，即20 mL果汁/g凍干粉，凍干粉粉碎制成實(shí)驗(yàn)供試品，置4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?；排毒養(yǎng)顏膠囊，云南盤龍?jiān)坪Ｋ幰河邢薰荆?hào)：150217；活性炭（上海興長(zhǎng)活性炭有限公司，批號(hào)：F20110118）。

1.1.3 試劑與儀器

阿拉伯樹膠（上海華藍(lán)化學(xué)科技有限公司，批號(hào)：20141104）；鹽酸洛哌丁胺（西安楊森制藥有限公司，批號(hào)：H10910085）；鏈脲佐菌素（Sigma公司，批號(hào)：V900890-1G），-20 ℃避光保存；鹽酸二甲雙胍片（中美上海施貴寶制藥有限公司，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20023370）；一水合檸檬酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20120119）；二水合檸檬酸三鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：220120522）；生理鹽水（山東華魯制藥有限公司，批號(hào)：B14040605）；pH試紙（上海三愛思試劑有限公司，批號(hào)：Q/GHSC 1571-2012）。

墨汁的配制：準(zhǔn)確稱取阿拉伯樹膠100 g，加水800 mL，煮沸至溶液透明，稱取活性碳（粉狀）50 g加至上述溶液中煮沸3次，待溶液涼后加水定容到1 000 mL，于冰箱中4 ℃保存，用前搖勻。

檸檬酸緩沖液的配置：檸檬酸（FW：210.14）2.1 g加入雙蒸水至100 mL中配成A液；檸檬酸鈉（FW：294.10）2.94 g加入雙蒸水至100 mL中配成B液；用時(shí)將A、B液按1∶1的比例配制，精密pH試紙測(cè)定pH值，調(diào)節(jié)到pH=4.2～4.5，即是所需的STZ檸檬酸緩沖液。

鏈脲佐菌素溶液配置：注射時(shí)用檸檬酸緩沖液以1%的濃度溶解STZ，現(xiàn)配現(xiàn)用，配置后的溶液放置在碎冰，30 min內(nèi)注射完畢。

電子天平：賽多利斯（Sartoruis），型號(hào)：BSA3202S-CW、BSA 323S-CW，產(chǎn)地，德國(guó)賽多利斯公司；血糖儀：羅氏逸動(dòng)型（ACCU-CHEK Mobile）產(chǎn)地：德國(guó)羅氏公司。

1.2 方法

1.2.1 西沙諾麗通便作用試驗(yàn)研究

1.2.1.1 對(duì)正常小鼠小腸推動(dòng)作用 ICR小鼠60只，18～22 g，動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，按照體重隨機(jī)分空白對(duì)照組，排毒養(yǎng)顏膠囊（0.8 g/kg）組、西沙諾麗（以下簡(jiǎn)稱諾麗）低劑量組（0.84 g凍干粉/kg）、中劑量組（2.52 g凍干粉/kg）、高劑量組（7.56 g凍干粉/kg）劑量組，12只/組動(dòng)物，雌雄各半。各給藥組動(dòng)物灌胃給藥，給藥體積20 mL/kg，連續(xù)給藥7 d。對(duì)照組給予同體積純凈水。末次給藥后，各給藥組灌胃給予含有受試藥品的墨汁（以墨汁為溶媒配置受試藥物），空白對(duì)照組灌胃給予同體積墨汁，給受試物25 min后立即脫頸椎處死小鼠，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測(cè)量腸管長(zhǎng)度為“小腸總長(zhǎng)度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度”。計(jì)算墨汁推進(jìn)率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，組間比較采用單因素方差分析t檢驗(yàn)[3]。

碳墨推進(jìn)率（%）=墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度（cm）小腸總長(zhǎng)度（cm）×100%

1.2.1.2 對(duì)鹽酸洛哌丁胺導(dǎo)致的小鼠便秘模型的影響 72只ICR小鼠，18～22 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，動(dòng)物分組給藥同實(shí)驗(yàn)1.2.1.1。給藥第6天，各組小鼠禁食不禁水12 h。第7天除空白對(duì)照組外，各組灌胃給予鹽酸洛哌丁胺（4 mg/kg），給藥0.5 h后各組小鼠灌胃給予含有受試藥品的墨汁（以墨汁為溶媒配置受試藥物）?？瞻讓?duì)照組和模型對(duì)照組小鼠灌胃純凈水配置墨汁，灌胃后小鼠放置于串籠中，記錄首次排黑便時(shí)間，計(jì)算6 h內(nèi)小鼠排黑便的次數(shù)，稱量排黑便的重量[4-6]。

1.2.2 西沙諾麗降糖作用實(shí)驗(yàn)研究

1.2.2.1 諾麗對(duì)鏈脲佐菌素導(dǎo)致糖尿病模型的影響 80只SPF級(jí)ICR雄性小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，小鼠禁食不禁水12 h，隨機(jī)取10只小鼠為空白對(duì)照組，其余70只腹腔注射給予鏈脲佐菌素（STZ）140 mg/kg，注射體積10 mL/kg體重。72 h后禁食2 h后剪尾尖取血，羅氏血糖儀測(cè)量血糖，選擇血糖11.7 mmol/L≤血糖值≤25 mmol/L為高血糖模型成功動(dòng)物。選擇造模成功的小鼠按血糖水平隨機(jī)分組：諾麗低劑量組（0.84 g凍干粉/kg）、中劑量組（2.52 g凍干粉/kg）、高劑量組（7.56 g凍干粉/kg）、陽(yáng)性對(duì)照組（鹽酸二甲雙胍0.56 g/kg）、模型對(duì)照組，10只/組（各組小鼠給藥前各組動(dòng)物血糖組間差距≤1.1 mmol/L），各給藥組動(dòng)物灌胃給予相應(yīng)受試藥，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組給同體積的純凈水，給藥體積20 mL/kg體重，1次/d，連續(xù)30 d。每周稱量一次體重，禁食2 h，末次給藥1 h后尾尖采血，測(cè)定血糖。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果用（±SD）表示，組間比較采用單因素方差分析檢驗(yàn)[7-8]。

1.2.2.2 諾麗對(duì)正常SD大鼠血糖的影響 SD大鼠，180～200 g，40只，適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d，按體重隨機(jī)分空白對(duì)照組和諾麗高（4.5 g凍干粉/kg）、中（1.5 g凍干粉/kg）、低（0.5 g凍干粉/kg）3個(gè)劑量組，每組10只，雌雄各半。給藥組灌胃給藥，連續(xù)給藥7 d，給藥體積10 mL/kg?？瞻讓?duì)照組給予同體積的純凈水，末次給藥前禁食4 h，給藥1 h后尾尖取血血糖儀測(cè)定血糖。

1.2.2.3 諾麗對(duì)正常SD大鼠糖耐量的影響 動(dòng)物分組同實(shí)驗(yàn)1.2.2.2。大鼠禁食4 h后尾尖取血測(cè)量血糖（此時(shí)標(biāo)記為零時(shí)），測(cè)完后按10 mL/kg各劑量組灌胃給予諾麗凍干粉，空白組給予同體積純凈水。各組動(dòng)物給藥后即口服給予葡萄糖2.5 g/kg（25%葡萄糖溶液），然后分別于口服葡萄糖后0.5 h、1 h、2 h從尾尖取血，血糖儀測(cè)定血糖。計(jì)算模型對(duì)照組與諾麗低、中、高3個(gè)劑量組給葡萄糖各時(shí)間點(diǎn)血糖和血糖曲線下面積的變化[9]。

曲線下面積=1/2×（0 h血糖值+0.5 h血糖值）×0.5+1/2×（2 h血糖值+0.5 h血糖值）×1.5=0.25×（0 h血糖值+40.5 h血糖值+32 h血糖值）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 西沙諾麗通便作用試驗(yàn)研究

2.1.1 對(duì)正常小鼠小腸推動(dòng)作用 與空白對(duì)照組比較，諾麗低、中、高劑量組能夠明顯促進(jìn)正常小鼠碳墨推進(jìn)率，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（低劑量組P<0.05，中、高劑量組P<0.01），此外，其推進(jìn)率增強(qiáng)作用呈劑量依賴型。提示西沙諾麗能夠促進(jìn)正常動(dòng)物小腸蠕動(dòng)。見表1。

2.1.2 對(duì)鹽酸洛哌丁胺導(dǎo)致的小鼠便秘模型的影響 與空白對(duì)照組比較，便秘模型組小鼠首粒黑便的排出時(shí)間顯著延長(zhǎng)，6 h內(nèi)的排便次數(shù)和重量顯著減少（P<0.05或P<0.01），提示造模成功。與便秘模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照藥和諾麗低、中、高劑量組小鼠首粒黑便的排出時(shí)間顯著縮短，6 h內(nèi)的排便重量和次數(shù)明顯增多（P<0.05或P<0.01）。提示西沙諾麗對(duì)鹽酸洛哌丁胺導(dǎo)致的小鼠便秘具有一定的治療作用。見表2。

2.2 西沙諾麗降糖作用實(shí)驗(yàn)研究

2.2.1 對(duì)鏈脲佐菌素導(dǎo)致糖尿病模型的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：鏈脲佐菌素造模后血糖顯著升高，與空白對(duì)照組比較P<0.01，提示造模成功。給藥30 d后，與模型對(duì)照組組比較，陽(yáng)性對(duì)照藥二甲雙胍組血糖值明顯降低（P<0.01）。同樣，諾麗中、高劑量組血糖顯著降低（P<0.05或者P<0.01），但低劑量組作用不明顯。見表3。同對(duì)照組比較，模型組動(dòng)物在給藥弟2、3、4周動(dòng)物體重顯著降低（P<0.01）。與模型對(duì)照組比較，諾麗中劑量組給藥第3周體重顯著升高（P<0.05），給藥1、2、4周有體重有升高的趨勢(shì)（同對(duì)照組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。高劑量組給藥第2、3、4周體重顯著升高（P<0.05）。見表4。

2.2.2 對(duì)正常大鼠糖耐量的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：給予葡萄糖后大鼠出現(xiàn)血糖升高，與正常組比較諾麗高、中、低3個(gè)劑量組在給藥后0.5、1、2 h血糖和血糖曲線下面積比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表5。

2.2.3 對(duì)正常大鼠血糖的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：同正常組比較，諾麗3個(gè)劑量組大鼠血糖值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表6。

3 討論

諾麗具有很高的臨床藥用價(jià)值。目前在我國(guó)海南、云南等熱帶地區(qū)的引種種植已獲成功，諾麗果作為傳統(tǒng)藥食兩用的習(xí)俗已有悠久的歷史。臨床用于治療關(guān)節(jié)炎、糖尿病、高血壓、肌肉疼痛、月經(jīng)不調(diào)、頭痛、心臟病、艾滋病、腫瘤、消化道潰瘍、各種扭傷、抑郁、衰老、消化不良、動(dòng)脈硬化等方面問題[10-12]。諾麗中含有多種必需氨基酸、維生素、微量元素及其他有效營(yíng)養(yǎng)或藥用成分，主要包括抗氧化劑和生物類黃酮，如萜烯類化合物，植物甾醇類，脂肪酸，甙類，環(huán)烯醚萜苷類，黃酮甙類，β-谷甾醇、熊果酸、植物固醇、蛋白質(zhì)、糖苷和蒽醌[13]等。現(xiàn)代研究證實(shí)其具有抑菌、抗病毒、抗癌、增強(qiáng)免疫力、抗疲勞、保肝等功效[14-15]。本實(shí)驗(yàn)觀察了諾麗降糖和通便的藥效作用，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

洛哌丁胺是常用的止瀉劑，主要通過抑制腸道水分泌[16]和結(jié)腸蠕動(dòng)[17]，使腸內(nèi)容物通過延遲，致使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)排便減少或難排便、糞便豆樣圓珠狀表現(xiàn)。采用鹽酸洛哌丁胺導(dǎo)致小鼠便秘模型和小鼠小腸推動(dòng)實(shí)驗(yàn)2種方法，觀察諾麗的通便作用，結(jié)果顯示，西沙諾麗低、中、高3個(gè)劑量組均能夠顯著增加正常小鼠小腸推進(jìn)率，且具有一定的量效關(guān)系。3個(gè)劑量可明顯縮短鹽酸洛哌丁胺導(dǎo)致便秘模型動(dòng)物首次排便時(shí)間，能夠顯著增加模型動(dòng)物排便次數(shù)和動(dòng)物糞便重量。2種藥效學(xué)方法的試驗(yàn)結(jié)果均提示，西沙諾麗凍干粉具有較好的通便作用。但有研究報(bào)道諾麗發(fā)酵果汁沒有明顯通便作用，本實(shí)驗(yàn)樣品是諾麗果汁的凍干粉，而上述文獻(xiàn)報(bào)道的實(shí)驗(yàn)所使用的是經(jīng)3個(gè)月發(fā)酵的樣品，可能經(jīng)過長(zhǎng)期發(fā)酵其中成分發(fā)生了改變[18]，從而影響了其藥效作用[19]。

鏈脲佐菌素（STZ）對(duì)一定種屬動(dòng)物的胰島β細(xì)胞有選擇性破壞作用，常被用來誘發(fā)I型糖尿病模型。通過觀察西沙諾麗凍干粉對(duì)鏈脲佐菌素導(dǎo)致小鼠糖尿病模型和對(duì)正常大鼠糖耐量和血糖的影響，實(shí)驗(yàn)研究諾麗的降糖作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，諾麗能夠顯著降低鏈脲佐菌素導(dǎo)致糖尿病模型血糖水平，抑制病理模型動(dòng)物體重降低，但西沙諾麗對(duì)正常大鼠血糖和糖耐量沒有明顯影響。結(jié)果提示，該品對(duì)高血糖的病理狀態(tài)的動(dòng)物模型具有一定的降血糖作用，但是對(duì)正常動(dòng)物的血糖卻沒有降低的不良反應(yīng)，這種降血糖的藥效學(xué)特點(diǎn)將有益于該類產(chǎn)品的安全使用?？傊疚膶?shí)驗(yàn)證明了西沙諾麗果汁的通便和降血糖的藥效學(xué)作用，但其作用機(jī)理以及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]王壓.諾麗果與葉營(yíng)養(yǎng)和功能評(píng)價(jià)及其產(chǎn)品研發(fā)[D].?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)，2010.

[2]張偉敏，魏靜，師萱，等.諾麗葉降血壓降血糖和抗氧化活性的研究[J].食品研究與開發(fā)，2013，34（19）：66-70.

[3]徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社出版，1991：1137.

[4]黃小麗，胡榮，卜平，等.3種便秘模型的比較研究，四川動(dòng)物[J].2015，34（1）：111-116.

[5]劉曉梅，彭芝榕，倪學(xué)勤，等.低聚果糖、乳酸桿菌對(duì)便秘模型大鼠的通便功能影響[J].食品科學(xué)，2013，34（11）：296-299.

[6]錢伯初，使紅，鄭曉亮.正常和便秘模型動(dòng)物排便實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].中藥臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2007，12（12）：1339-1442.

[7]張遠(yuǎn)遠(yuǎn)，楊志偉，嚙齒類動(dòng)物糖尿病模型，中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)[J].2011，19（3）：269-272.

[8]楊潤(rùn)軍，李青旺，趙蕊，四氧啥吮與鏈腮佐菌素誘導(dǎo)小鼠糖尿病模型的效果比較[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006，34（2）：17-20.

[9]安紅，陸世廣.超細(xì)大豆皮膳食纖維對(duì)糖尿病模型小鼠糖耐量的影響[J].食品科學(xué)，2011，31（21）：329-331.

[10]Wang MY，West BJ，Jensen CJ，et al.Morindacitrifolia（Noni）：a literature review and recent advances in Noni research[J].ActaPharmacol Sin，2002，23（12）：1127-1141.

[11]許國(guó)平.諾麗作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究生報(bào)，2007，20（9）：974-977.

[12]彭勇，肖偉，劉勇，等.世界藥用植物新寵——海巴戟果[J].國(guó)外醫(yī)藥.植物藥分冊(cè)，2007，22（3）：93-96.

[13]李法營(yíng)，藍(lán)增全，劉昌芬，等.諾麗研究進(jìn)展（一）——國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（32）：15819-15821.

[14]于純淼，李煦照，于棟華，等.海巴戟果實(shí)諾麗生理功能研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2011，32（12）：573-780.

[15]劉印忠，馬德祿，高建華，等.諾麗果汁對(duì)四氯化碳引起肝損傷小鼠的肝保護(hù)作用[J].天津藥學(xué)，2008，20（2）：6-8.

[16]HUGHES S，HIGGS N B，TURNBERG L A.Loperamide has antisecretory activity in the human jejunum in vivo[J].Gut，1984，25（9）：931-935.

[17]SOHJI Y，KAWASHIMA K，SHIMIZU M.Pharmacological studies of loperamide，an anti-diarrheal agent[J].Folia Pharmacol Japanese，1978，74（1）：155-163.

[18]龔敏，符文英，周靜，等.諾麗鮮果與諾麗發(fā)酵汁的揮發(fā)性成分的對(duì)比研究[J].食品科技，2009，34（9）：33-35.

[19]龔敏，蘇奎，鄧世明.諾麗鮮果與諾麗發(fā)酵汁的抗氧化及抑菌活性的對(duì)比研究[J].食品科技，2010，35（10）：92-94.