牛 睿,方歡樂,韓寧娟,申瑞洋,羅艷香,劉利兵

(西安培華學(xué)院醫(yī)學(xué)院,陜西西安 710125)

神仙草(Mesonachinesis),又名涼粉草、仙草,為唇形科仙草屬一年生草本植物。神仙草在我國(guó)有廣泛分布,常見于江西、廣東、福建、廣西、陜西等地,為我國(guó)民間常用特產(chǎn)中藥材,性涼,味甘[1]。《本草綱目》中記載,仙草主治“小兒醡瘡,頭小而硬者,煮湯浴,并搗敷。丹毒入腹者必危,可飲冷藥,及用此洗之,又攉汁滴目,明目去翳”[2]。本屬植物中多含有多糖、黃酮、萜類、酚類、有機(jī)酸及揮發(fā)性成分等種物質(zhì),因具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、降血脂、降血糖及改善動(dòng)脈粥樣硬化等功效,而被廣泛關(guān)注[3]。

現(xiàn)代研究表明,神仙草的多糖成分具有提高巨噬細(xì)胞活性,增強(qiáng)機(jī)體免疫功能,黃酮類的成分具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)和雌激素的作用,酚類成分具有顯著的抗氧化功能和預(yù)防心腦血管疾病的作用,而果酸類成分能夠起到抗炎抗菌[3-4]。此外,神仙草還具有清除超氧陰離子自由基的能力,對(duì)活性氧叔丁基過氧化氫誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷有保護(hù)作用[4],但是有關(guān)于降低血脂和對(duì)血流變學(xué)的影響等方面的研究還未進(jìn)行深入研究。

本實(shí)驗(yàn)所用神仙草采摘于秦嶺北麓關(guān)中平原東部的藍(lán)田縣地界,在當(dāng)?shù)乇恢谱鞒缮裣煞塾米髑鍩峤馐钪哑?且資源豐富、價(jià)格低廉、有廣闊的產(chǎn)品開發(fā)前景[5]。本文旨在研究不同含量的神仙草提取物在對(duì)高脂大鼠調(diào)節(jié)血脂水平,血液流變學(xué)改變以及肝損傷等方面的影響,為神仙草的開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù),也為后續(xù)的基礎(chǔ)研究奠定一定的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

神仙草 經(jīng)西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院生藥鑒定專業(yè)徐文友教授鑒定為正品藥材,于6月份采自陜西省藍(lán)田縣并晾干;雄性SD大鼠 體重170～230 g,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(軍)2012-0008,由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;大鼠常規(guī)飼養(yǎng)飼料 西安交通大學(xué)動(dòng)物中心;維生素D(批號(hào):20160101)、膽酸鹽(批號(hào):110728)、膽固醇(批號(hào):111028)、辛伐他汀片(批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字H20010750)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)試劑盒(批號(hào):20160211)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒(批號(hào)為:20160207)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)試劑盒(批號(hào)為:20160207) 南京建成生物工程研究所。

TGL-16G型臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;URIT-660型全自動(dòng)酶標(biāo)儀 桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司;LBYN6型血液流變儀 北京普利生儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 神仙草溶液的制備 神仙草經(jīng)除雜,清洗,于日光下晾曬至脫水干燥后備用。準(zhǔn)確稱取神仙草適量,加20倍雙蒸水浸泡過夜,煎煮2 h,6層紗布過濾,濃縮為1 g/mL的生藥浸膏,4 ℃冷藏備用[6]。

1.2.2 高脂模型的建立與動(dòng)物給藥方法 將50只雄性SD大鼠,隨機(jī)分組,分為空白對(duì)照組、模型組、辛伐他汀組、神仙草高、低劑量組,每組10只。所有大鼠以基礎(chǔ)飼料預(yù)喂養(yǎng)7 d(1周)后,空白對(duì)照組繼續(xù)給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),其余各組大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)。

高脂飼料配方如下:3.5%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、12%豬油、78.8%基礎(chǔ)飼料,參考文獻(xiàn)[5]方法自制高脂飼料,建立高脂大鼠模型。

實(shí)驗(yàn)開始時(shí),空白組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng),其余各組均給予高脂飼料喂養(yǎng)持續(xù)喂養(yǎng)8周。于實(shí)驗(yàn)初期,除空白對(duì)照組以外,其余大鼠一次性腹腔注射維生素D360萬IU/kg。高脂飼料喂養(yǎng)第4周開始,空白對(duì)照組和模型組大鼠每天給予一定體積生理鹽水灌胃給藥,辛伐他汀組每天以5.5 mg/kg辛伐他汀灌胃給藥,神仙草低、高劑量組灌胃給藥量分別為1.25、2.5 g/kg,每天灌胃給藥一次,同時(shí)給予高脂飼料持續(xù)喂養(yǎng)。

1.2.3 指標(biāo)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)大鼠末期給藥結(jié)束后,禁食禁水12 h后,用20%烏拉坦(0.5 mL/100 g)腹腔注射麻醉大鼠。打開腹腔,腹主動(dòng)脈取血。4500r/min離心10 min,收取上清液,用酶學(xué)法檢測(cè)血脂指標(biāo)TC、TG、HDC-C、LDL-C,抗氧化指標(biāo)SOD、MDA,肝損傷指標(biāo)GOT、GPT;用血液流變儀分別測(cè)定全血低切、中切、高切黏度及血漿黏度等。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 神仙草對(duì)大鼠體重的影響

按照上述實(shí)驗(yàn)方法飼養(yǎng)大鼠8周,每周稱重一次,對(duì)實(shí)驗(yàn)前后大鼠體重增量進(jìn)行分析,考察不同實(shí)驗(yàn)條件對(duì)大鼠體重增量的影響,結(jié)果見表1。由表1可知,實(shí)驗(yàn)前后,與空白對(duì)照組相比,模型組體重增加顯著(p<0.05);與模型組相比,藥物組體重增加顯著降低(p<0.05)。由此可得,神仙草能夠顯著降低高脂喂養(yǎng)大鼠體重。

表1 各組大鼠實(shí)驗(yàn)前后體重變化Table 1 Changes in body weight of rats before and after intervention

2.2 神仙草對(duì)大鼠血脂的影響

由表2可知,與空白對(duì)照組相比,模型組TC、TG、LDL-C均顯著升高(p<0.05),HDL-C指標(biāo)明顯下降(p<0.05),說明高脂飲食導(dǎo)致高脂血癥模型建立成功;與模型組相比較,神仙草高劑量組TC值顯著降低(p<0.05),低劑量組TC值有所降低,但差異不顯著;神仙草低劑量組TG值和LDL-C值顯著降低(p<0.05),高劑量組極顯著降低(p<0.01);神仙草低、高劑量組HDL-C值均極顯著升高(p<0.01);與模型組相比,神仙草低、高劑量組與辛伐他汀組的大鼠血清LDL-C顯著降低(p<0.05),HDL-C顯著升高(p<0.05),但神仙草高劑量組對(duì)兩者的作用最明顯(p<0.01)。

表2 神仙草對(duì)高脂大鼠血脂的影響Table 2 Effects of Mesona chinensis extract on blood lipid in hyperlipdemic rats

綜上所述,神仙草提取物可顯著降低高脂大鼠血清中TC、TG、LDL-C,提高HDL-C(p<0.05),尤其是神仙草高劑量組(p<0.01)。

2.3 神仙草對(duì)大鼠血清中SOD、MDA的影響

由表3可知,與空白對(duì)照組相比,模型組SOD活性下降極顯著(p<0.01),MDA值有所升高,但差異不顯著;與模型組相比,神仙草高、低劑量組與辛伐他汀組大鼠血清中SOD活性顯著升高(p<0.05),MDA含量顯著降低(p<0.05);由此可得,神仙草可顯著升高高脂大鼠血清中SOD活性,降低MDA含量。

表3 神仙草對(duì)高脂大鼠血清SOD和MDA的影響Table 3 Effects of Mesona chinensis extract on SOD and MDA in hyperlidemic rats

2.4 神仙草對(duì)大鼠血清中GOT、GTP的影響

由表4可知,與空白對(duì)照組相比較,模型組GOT和GPT指標(biāo)有所升高,但差異不顯著;與模型組相比較,神仙草高、低劑量組以及辛伐他汀組的GOT和GPT沒有顯著性差異。

表4 神仙草對(duì)高脂大鼠血清GOT和GPT的影響Table 4 Effects of Mesona chinensis extract on GOT and GPT in hyperlipdemic rats

綜上所述,神仙草提取物對(duì)大鼠血清中GOT和GPT無明顯影響,說明神仙草提取物無造成大鼠肝臟損傷的可能性。

2.5 神仙草對(duì)大鼠血液流變學(xué)的影響

由表5可知,與空白對(duì)照組相比,模型組高、中、低切的全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯升高(p<0.05);與模型組相比較,神仙草高、低劑量組與辛伐他汀組的全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)均顯著下降(p<0.05)。

表5 神仙草對(duì)高脂大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響Table 5 Effects of mesona chinensis extract on hemorheology in hyperlipdemic rats

綜上所述,神仙草提取物可明顯降低高脂大鼠全血粘度(高切、中切、低切)、血漿粘度與紅細(xì)胞聚集指數(shù)指標(biāo)(p<0.05),改善高脂大鼠血液流變學(xué)的指標(biāo)。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合維生素D3造模成功后,以神仙草提取物灌胃給藥,檢測(cè)大鼠血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C等相關(guān)血脂指標(biāo),結(jié)果顯示,神仙草可有效降低大鼠血清中TC、TG的指標(biāo)(p<0.05),尤其對(duì)LDL-C降低作用較明顯(p<0.05),并顯著提高HDL-C水平(p<0.05)。同時(shí)檢測(cè)到神仙草能明顯升高大鼠血清中SOD活性(p<0.05),降低MDA含量(p<0.05)。此外,神仙草提取物可有效減低高脂大鼠血清中全血粘度、血漿粘度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)(p<0.05),能夠在一定程度上改善因血脂異常引起的血液流變學(xué)異常。通過對(duì)肝功能是否有損傷常用檢測(cè)指標(biāo)GOT、GPT指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn),神仙草提取物不會(huì)引起GOT、GPT指標(biāo)升高,由此推斷神仙草不會(huì)引起嚴(yán)重的肝臟損傷。

4 討論

高脂血癥是由于脂肪代謝異常,其中某幾種脂質(zhì)指標(biāo)明顯高于正常指標(biāo),并沉積于血管壁,逐漸引發(fā)血管壁動(dòng)脈粥樣硬化[7]。高血脂的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,很容易誘發(fā)心腦血管等慢性疾病,近幾年研究發(fā)現(xiàn),其逐漸成為代謝綜合征形成的重要因素之一并引起高度關(guān)注[8]。我國(guó)高脂血癥發(fā)病流程呈現(xiàn)明顯升高及年輕化的趨勢(shì)。通過研究發(fā)現(xiàn),治療高脂血癥可使脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等其他嚴(yán)重心腦血管慢性疾病的發(fā)生率下降30%左右,逐漸成為預(yù)防心腦血管等慢性疾病發(fā)生發(fā)展的有效措施[9]。目前臨床應(yīng)用降脂類西藥均有肝腎功能損傷的相關(guān)報(bào)道,因此,尋找并開發(fā)能夠降低高脂血癥血脂指標(biāo),改變脂質(zhì)代謝異常等天然藥物,就成為目前較為迫切的目標(biāo)之一[10]。

國(guó)內(nèi)神仙草資源豐富,價(jià)格低廉,在陜西其主要用途還僅僅集中在藍(lán)田周圍農(nóng)村等地作為食品使用[13]。通過研究發(fā)現(xiàn)神仙草提取具有降低血脂,升高高密度脂蛋白指標(biāo),改善血液流變學(xué)損傷的作用。為今后高效提取神仙草有效活性成分基礎(chǔ)上,挖掘潛在用途,更好服務(wù)于社會(huì),為人類健康事業(yè)提供一定的思考。