付曉紅，趙敏，余云湖，周航，付臣志

（貴州省遵義市第一人民醫(yī)院 1.神經(jīng)外科，2.藥劑科，貴州 遵義563000；3.貴州省桐梓縣人民醫(yī)院 神經(jīng)外科，貴州 桐梓 563200）

顱內(nèi)動(dòng)脈瘤（intracranial aneurysm, IA）是動(dòng)脈內(nèi)腔的局限性異常擴(kuò)大造成的動(dòng)脈壁的瘤狀突出，全球發(fā)生率約2.7%～6.5%，是造成蛛網(wǎng)膜下腔出血的首位病因，在腦血管意外中，僅次于腦血栓和高血壓腦出血，嚴(yán)重威脅人們生命健康。目前認(rèn)為，顱內(nèi)動(dòng)脈瘤是多環(huán)境因素和多基因共同影響的疾病[1]，但具體發(fā)病機(jī)制尚未完全揭示。研究顯示，動(dòng)脈瘤形成和破裂除受到吸煙、飲酒、血液動(dòng)力學(xué)以及后天退行性改變等因素影響外，還顯示具有一定的遺傳傾向，家族性研究顯示，患者一級(jí)親屬顱內(nèi)動(dòng)脈瘤發(fā)生破裂的風(fēng)險(xiǎn)幾乎是二級(jí)親屬的7倍[2-3]。目前認(rèn)為顱內(nèi)動(dòng)脈瘤發(fā)生與Ⅲ型膠原蛋白α1（type Ⅲ collagen alpha l,COL3A1）基因及其單核苷酸多態(tài)性（SNP）關(guān)系密切。研究發(fā)現(xiàn)，COL3A1基因第30外顯子rs1800255 G＞A多態(tài)性可導(dǎo)致編碼氨基酸的改變（Ala→Thr），該功能性遺傳變異可能影響個(gè)體對(duì)IA的遺傳易感性[4]。

迄今，有關(guān)rs1800255 G＞A多態(tài)性與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤發(fā)生關(guān)系的研究結(jié)論并不一致?？紤]到單個(gè)研究樣本量、研究統(tǒng)計(jì)學(xué)效能等的影響，本研究望應(yīng)用循證醫(yī)學(xué)的原理和方法，明確該多態(tài)性與IA發(fā)病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索方法

截止2017年7月31日，以Intracranial aneurysm、Type Ⅲ collagen alpha l、polymorphism、IA或顱內(nèi)動(dòng)脈瘤、Ⅲ型膠原蛋白α1、單核苷酸多態(tài)性等為關(guān)鍵詞，檢索NCBI PubMed、中國(guó)引文數(shù)據(jù)庫(kù)（CNKI）及萬(wàn)方等數(shù)據(jù)庫(kù)、有關(guān)rs1800255 G＞A與IA發(fā)病相關(guān)病例-對(duì)照研究。另通過(guò)文獻(xiàn)追溯手動(dòng)檢索合格文獻(xiàn)。

1.2 文獻(xiàn)資料的納入與排除

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①正式發(fā)表的、有關(guān)rs1800255 G＞A與IA發(fā)病相關(guān)病例-對(duì)照研究；②明確診斷的IA病例組和對(duì)照組；③有明確的基因分型資料。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)；②基因型或等位基因頻率信息無(wú)法獲??；③數(shù)據(jù)處理過(guò)程中可能產(chǎn)生較大異質(zhì)性，影響整體效應(yīng)；④綜述、病例報(bào)告等。

1.3 文獻(xiàn)資料提取

對(duì)納入的研究，由2位研究成員獨(dú)立進(jìn)行資料提取與整理，如遇分歧則討論解決或由第3位研究者協(xié)助判定。提取的資料內(nèi)容包括：第一作者、發(fā)表時(shí)間、平均年齡（±s）、基因型數(shù)據(jù)、病例/對(duì)照組樣本量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用Stata 12.0統(tǒng)計(jì)軟件。COL3A1基因rs1800255 G＞A多態(tài)性與IA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估采用風(fēng)險(xiǎn)比值及相應(yīng)95%置信區(qū)間（95%CI）]表示。設(shè)定異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果P＜0.1或I2＞50%，可認(rèn)為研究存在異質(zhì)性，分析時(shí)采用隨機(jī)效應(yīng)模型；反之，則采用固定效應(yīng)模型。納入研究發(fā)表偏倚采用Begg's和Egger's檢驗(yàn)，并進(jìn)行敏感性分析[5-6]。

2 結(jié)果

2.1 納入的文獻(xiàn)資料

截止2017年7月31日，共檢索到NCBI PubMed、中國(guó)引文數(shù)據(jù)庫(kù)（CNKI）及萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)等關(guān)于rs1800255 G＞A多態(tài)性與IA的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)研究62篇，通過(guò)閱讀題目和摘要后剩余32篇；仔細(xì)閱讀全文，依據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，再排除27篇，包括綜述6篇、COL3A1基因表達(dá)與疾病的相關(guān)研究10篇，不涉及該位點(diǎn)病例-對(duì)照研究11篇，最終納入符合文獻(xiàn)5篇[4，7-10]。其中5篇有6個(gè)研究數(shù)據(jù)，共包含3 664例研究對(duì)象，其中顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者977例，對(duì)照組2 687例。本研究依據(jù)納、入排除標(biāo)準(zhǔn)篩選合格文獻(xiàn)，流程見(jiàn)圖1，研究資料基本情況，見(jiàn)附表。

圖1 納入文獻(xiàn)篩選流程

2.2 Meta分析結(jié)果

應(yīng)用Stata 12.0軟件評(píng)估COL3A1基因rs1800255 G＞A位點(diǎn)基因型與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤（IA）發(fā)病的關(guān)系，顯性遺傳模型下，經(jīng)檢驗(yàn)納入研究數(shù)據(jù)間異質(zhì)性，結(jié)果顯示（I2=0%，P=0.826），提示所納入各基因型數(shù)據(jù)間不存在異質(zhì)性；采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行rs1800255 G＞A多態(tài)性與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤發(fā)病的合并效應(yīng)分析，發(fā)現(xiàn)與GG基因型比較，A等位基因攜帶者顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增高，整體合并效應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)比（95%CI：1.43，1.98）]。結(jié)果見(jiàn)圖2。而在隱性模型下，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示（I2=0%，P=0.572），同樣提示研究中不存在異質(zhì)性；采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行合并效應(yīng)分析，發(fā)現(xiàn)與GG+GA基因型比較，AA基因型可升高顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，合并效應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)比（95%CI：1.12，2.35）]。結(jié)果見(jiàn)圖3。

附表 納入文獻(xiàn)基本資料

圖2COL3A1基因rs12255372多態(tài)位點(diǎn)與IA發(fā)病的關(guān)系（顯性模型）

2.3 文獻(xiàn)發(fā)表偏倚評(píng)估

本Begg's漏斗圖呈基本對(duì)稱(chēng)分布，進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)顯示，Begg's檢驗(yàn)（P=0.452）和Egger's檢驗(yàn)（t=0.97，P=0.385），未發(fā)現(xiàn)所納入文獻(xiàn)存在發(fā)表偏倚，見(jiàn)圖4。

2.4 敏感性分析

采用Leave-one-out方法，將本研究所納入文獻(xiàn)逐一剔除，評(píng)估單個(gè)研究對(duì)總體效應(yīng)的影響，敏感性檢驗(yàn)結(jié)果未發(fā)現(xiàn)總體效應(yīng)的及95%CI因單個(gè)研究數(shù)據(jù)而發(fā)生波動(dòng)，表明研究結(jié)果具有較好的穩(wěn)健性，見(jiàn)圖5。

圖3COL3A1基因rs12255372多態(tài)位點(diǎn)與IA發(fā)病的關(guān)系（隱性模型）

圖4 Begg's和Egger's檢驗(yàn)對(duì)納入研究發(fā)表偏倚檢驗(yàn)

圖5 敏感性分析

3 討論

顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的病因迄今尚未完全清楚，多認(rèn)為其是在環(huán)境因素作用下，同時(shí)受到多基因遺傳因素共同作用。KATAOKA等[11]的研究表明，在正常的血管壁中Ⅲ型膠原蛋白含量較多，而在IAs血管壁中Ⅲ型膠原蛋白則相對(duì)含量較低。提示動(dòng)脈瘤壁可能因發(fā)生病理性改變后導(dǎo)致COL3A1表達(dá)水平下降，IA的發(fā)生可能與Ⅲ型膠原合成量不足或合成缺陷等存在關(guān)聯(lián)。有研究以IAs家系作為研究對(duì)象，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，家系中2位顱內(nèi)讓動(dòng)脈瘤患者均存在COL3A1基因表達(dá)缺陷，使得Ⅲ型膠原蛋白含量降低，并進(jìn)一步影響蛋白翻譯后修飾和膠原蛋白的代謝功能[12]。另有研究顯示，COL3A1基因單核苷酸多態(tài)性可導(dǎo)致血管性埃勒斯綜合征（VEDS）有親屬關(guān)系的患者具有相同的臨床表型[13]。以上研究提示，COL3A1基因及其多態(tài)性可能在IA等血管性疾病發(fā)生中起重要作用。

COL3A1基因定位于人類(lèi)2號(hào)染色體2q31，編碼的產(chǎn)物為Ⅲ型膠原蛋白是多種結(jié)締組織和細(xì)胞外基質(zhì)的重要成分[14]。缺乏時(shí)，生物學(xué)上將表現(xiàn)為增高相應(yīng)結(jié)構(gòu)的破裂、穿孔和剝離的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。KATAOKA等[11]的研究表明，動(dòng)脈瘤樣突出是由于細(xì)胞外基質(zhì)蛋白合成與降解的動(dòng)態(tài)失衡所致，血流動(dòng)力破壞動(dòng)脈壁，使得瘤壁脆弱并最終可能出現(xiàn)破裂。有研究顯示，COL3A1基因第30外顯子功能性遺傳變異rs1800255 G＞A多態(tài)性能夠?qū)е孪嚓P(guān)密碼子編碼氨基酸發(fā)生改變，由丙氨酸（Ala）轉(zhuǎn)變?yōu)樘K氨酸（Thr），可能響機(jī)體對(duì)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤遺傳易感性改變[8，10-11]。認(rèn)為COL3A1基因多態(tài)性位點(diǎn)rsl800255與中國(guó)人漢族顱內(nèi)動(dòng)脈瘤之間相關(guān)，可作為中國(guó)人人群IA發(fā)病的易感基因。而也有病例對(duì)照研究則未發(fā)現(xiàn)rs1800255 G＞A多態(tài)性與 IA 易感性關(guān)聯(lián)[7，9]。

鑒于目前有關(guān)COL3A1基因rs1800255 G＞A多態(tài)性與IA發(fā)病關(guān)系的病例-對(duì)照研究間結(jié)論并不一致。本考慮到單個(gè)研究樣本量、研究統(tǒng)計(jì)學(xué)效能等的影響，擬應(yīng)用循證醫(yī)學(xué)的原理和方法，明確該多態(tài)性與IA發(fā)病的關(guān)系，以明確兩者間的真實(shí)關(guān)聯(lián)。研究發(fā)現(xiàn)，rs1800255 G＞A多態(tài)性與IA發(fā)病關(guān)系關(guān)聯(lián)，在顯性遺傳模型下，與GG基因型比較，A等位基因攜帶者顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增高，整體合并效應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)比，（95%CI：1.43，1.98）]；而在隱性模型下，與GG+GA基因型比較，AA基因型可升高顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，合并效應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)比（95%CI：1.12，2.35）]。

另外，本研究?jī)H納入已公開(kāi)發(fā)表的有關(guān)rs1800255 G＞A多態(tài)性與IA發(fā)病相關(guān)研究，考慮有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)果更容易被發(fā)表，本研究可能存在一定的發(fā)表偏倚。鑒于樣本選擇過(guò)程及代表性、病例/對(duì)照組的匹配程度等，各納入研究可能會(huì)存在一定的選擇偏倚。以上因素可能對(duì)各研究結(jié)果以及最終合并效應(yīng)產(chǎn)生一定影響。本研究應(yīng)用Begg's漏斗圖和Egger's線性回歸方法，均未檢測(cè)到明顯的發(fā)表偏倚，敏感性分析結(jié)果未提示單個(gè)研究嚴(yán)重影響整體結(jié)果。表明本研究結(jié)果具有較好的穩(wěn)健性，研究結(jié)論具有一定的可信度。

綜上所述，本研究表明COL3A1基因rs12255372 G＞T多態(tài)性與GDM的發(fā)生相關(guān)，G→A突變可能增加個(gè)體對(duì)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。本研究結(jié)果仍需要大樣本量、涉及不同人群的病例對(duì)照研究，或具有一定樣本量的家系研究來(lái)闡明COL3A1基因rs1800255的多態(tài)性與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的形成、破裂及其他臨床特征的聯(lián)系。同時(shí)該位點(diǎn)可能作為IA高危人群篩選的生物學(xué)標(biāo)記，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)無(wú)癥狀的未破裂動(dòng)脈瘤提供科學(xué)依據(jù)。