劉瑞瑞殷 實丁西平

據(jù)統(tǒng)計，目前胃癌(Gastric cancer,GC)是世界范圍內(nèi)發(fā)病率最高的第五大癌癥和第三大癌癥死亡的原因[1]。胃癌的發(fā)生率與胃黏上皮膜異型增生的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，且胃黏膜上皮異型增生經(jīng)治療減退或消失的比率隨著異型增生的嚴(yán)重程度的增高而下降[2]。因此阻斷或逆轉(zhuǎn)胃黏膜異型增生的發(fā)展是降低胃癌發(fā)病率及死亡率的有效措施之一，對胃黏膜異型增生發(fā)生發(fā)展機(jī)制的深入研究顯得尤為重要。線粒體是參與生物能量代謝和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的真核細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器，線粒體的功能主要包括通過呼吸和氧化磷酸化（OXPHOS）產(chǎn)生ATP，活性氧（ROS）的產(chǎn)生，細(xì)胞凋亡的啟動和執(zhí)行。近些年來，有越來越多的證據(jù)表明mtDNA的突變或線粒體功能障礙在胃癌中的發(fā)生發(fā)展中具有重要的意義，ROS的增加引起的線粒體功能障礙可能參與了胃癌的惡性變化。但是，mtDNA突變的具體機(jī)制和線粒體功能障礙影響胃癌進(jìn)展仍不清楚[3]。細(xì)胞內(nèi)80%以上的ATP由線粒體合成，線粒體在細(xì)胞存活和凋亡中發(fā)揮重要的作用。線粒體發(fā)生腫脹、空泡變性等退行性變可導(dǎo)致ATP生成減少，進(jìn)而可引起胃黏膜細(xì)胞的功能下降，胞體變小，致使胃黏膜變薄、萎縮。

在本研究中，我們用透射電鏡觀察了人胃黏膜上皮異型增生和胃癌黏膜細(xì)胞中線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化，進(jìn)一步探討人胃黏膜上皮異型增生及胃癌的發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制。

1　資料與方法

1.1臨床資料 選擇安徽省立醫(yī)院2016年1月-2017年9月接受胃鏡及病理活檢的年齡在18～75周歲的患者，內(nèi)鏡檢查前4周無服用損害胃黏膜的藥物及抗凝、抗血小板藥物，無胃潰瘍及其他影響胃黏膜的嚴(yán)重合并癥，無心腦血管、呼吸、腎臟等其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者。

1.2方法 根據(jù)2017年慢性胃炎及上皮性腫瘤胃黏膜活檢病理診斷共識[4]，收集胃鏡及病理結(jié)果一致的慢性淺表性胃炎（CSG）、胃黏膜上皮輕中度異型增生、胃黏膜上皮重度異型增生及GC患者的胃黏膜標(biāo)本，標(biāo)本直徑約5mm，取出后的標(biāo)本立即置于2.5%戊二醛溶液中固定，用磷酸緩沖液浸洗后乙醇梯度脫水，環(huán)氧樹脂浸透包埋聚合，用超薄切片機(jī)做半超薄切片，甲苯胺藍(lán)染色后在光學(xué)顯微鏡下定位，經(jīng)醋酸鈾、檸檬酸鉛雙重染色后用透射電鏡（日本電子JEOL—1230型）觀察各組胃黏膜中線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化，7200倍拍攝圖片分別進(jìn)行線粒體計數(shù)。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 22.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（± s）的形式表示，用t檢驗比較兩組之間的差異，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1一般資料 選擇安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院消化內(nèi)科內(nèi)鏡室2016年12月-2017年9月胃鏡及病理活檢診斷為CSG、胃黏膜上皮輕中度異型增生、胃黏膜上皮重度異型增生及GC患者共60例,每組各15例。CSG組男7例，女8例，年齡26～67歲，平均年齡（49.93±11.39）歲，其中合并Hp感染者2例；輕中度異型增生組男9例，女6例，年齡28～69歲，平均年齡（56.20±11.31）歲，合并Hp感染7例，萎縮13例，腸化14例；重度異型增生組男12例，女3例，年齡31～69歲，平均年齡（56.20±11.23）歲，合并Hp感染6例，萎縮4例，腸化4例，8例已有癌變；GC組男12例，女3例，年齡45～74歲，平均年齡（60.67±7.38）歲，其中中低分化腺癌6例，低分化腺癌9例，9例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。見表1。

表1　患者的一般資料比較

2.2各組胃黏膜的透射電鏡結(jié)果 CSG組胃黏膜上皮細(xì)胞中線粒體大多為圓形或橢圓型，線粒體的形態(tài)基本正常，合并Hp感染的胃黏膜上皮可見少量線粒體發(fā)生空泡變性；輕中度異型增生組、重度異型增生組和GC組與CSG組相比線粒體的數(shù)目減少，線粒體發(fā)生腫脹、空泡變性、基質(zhì)變淡、固縮、線粒體嵴斷裂與排列紊亂等退變表現(xiàn)，且統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)在輕中度異型增生組、重度異型增生組和GC組中胃黏膜細(xì)胞中線粒體的數(shù)目減少和空泡變性的發(fā)生率與CSG組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而輕中度異型增生組、重度異型增生組和GC組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。電鏡結(jié)果還發(fā)現(xiàn)在非胃癌組，合并Hp感染、萎縮、腸化的胃黏膜上皮細(xì)胞中線粒體發(fā)生退變的程度更重。見表2和圖1。

表2　各組胃黏膜線粒體的超微結(jié)構(gòu)變化

圖1　各組胃黏膜上皮細(xì)胞中線粒體的超微結(jié)構(gòu)

3　討 論

在過去的研究[5]中發(fā)現(xiàn)線粒體DNA的突變介導(dǎo)線粒體功能障礙在胃癌的發(fā)生和發(fā)展中有重要作用。我們的研究發(fā)現(xiàn)在CSG組、輕中度異型增生組、重度異型增生組及GC組中可見線粒體發(fā)生腫脹、空泡變性、基質(zhì)變淡、固縮、線粒體嵴斷裂與排列紊亂等退變表現(xiàn)。因時間、經(jīng)費等多種原因我們僅對部分病例中線粒體數(shù)目及空泡變性發(fā)生率進(jìn)行了統(tǒng)計，統(tǒng)計學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)與CSG組相比，線粒體數(shù)目和空泡變性的發(fā)生率在輕中度異型增生組、重度異型增生組和GC組中差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示線粒體發(fā)生退行性變可能參與胃癌前病變以及胃癌的發(fā)生和發(fā)展。

我們還發(fā)現(xiàn)在非胃癌組中合并Hp感染、萎縮、腸化的胃黏膜上皮細(xì)胞線粒體發(fā)生退變的程度更重，這與Feichtinger RG等[6]研究認(rèn)為Hp感染對線粒體能量代謝有重要影響一致。本研究分析結(jié)果顯示線粒體退變率在輕中度異型增生組、重度異型增生組和GC組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。考慮這一方面可能與我們的樣本量少、電鏡結(jié)果觀察者的個體差異有關(guān)，另一方面可能因為輕中度異型增生組合并Hp感染、萎縮、腸化的比例以及重度異型增生組合并癌變的比例過高而影響結(jié)果的判斷。

綜上所述，我們認(rèn)為線粒體退變參與胃黏膜上皮異型增生及胃癌的發(fā)生和發(fā)展，可能是胃黏膜惡性轉(zhuǎn)化中的重要發(fā)生機(jī)制，但介導(dǎo)線粒體發(fā)生退行性改變參與胃癌前病變及胃癌發(fā)生和發(fā)展的具體分子機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步研究明確。