梅麗，蔣玲，楊樺，栗鳳娟

（江蘇萬(wàn)邦醫(yī)藥科技有限公司，江蘇徐州 221004）

2型糖尿?。═2DM）是由生活方式或遺傳因素導(dǎo)致的一種內(nèi)分泌代謝疾病，近年來(lái)發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[1-2]。精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）含有25%的可溶性重組賴脯胰島素（速效）和75%的精蛋白鋅重組賴脯胰島素，皮下吸收速度更加迅速，滿足餐后胰島素的需要。

與魚(yú)精蛋白結(jié)合的重組賴脯胰島素釋放緩慢，作用時(shí)間延長(zhǎng)，可以替代基礎(chǔ)分泌[3]。林旋等人的研究發(fā)現(xiàn)精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）可明顯改善2型糖尿病患者血糖代謝，增強(qiáng)其免疫功能，減輕炎癥反應(yīng)，從而降低其心血管事件的發(fā)生[4]。張宏穎等的研究結(jié)果表明，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）能較好地控制餐后血糖，無(wú)嚴(yán)重的低血糖事件發(fā)生，具有較好的安全性。注射時(shí)間非常靈活，進(jìn)餐即打針，患者使用更加方便[5]。

目前大量研究表明，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R，商品名優(yōu)泌樂(lè)25）在臨床治療2型糖尿病安全、方便、有效，值得臨床推廣應(yīng)用[6]。所以研究精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液在臨床使用過(guò)程中的穩(wěn)定性具有非常重要的意義。

1 儀器與試藥

儀器：島津20A高效液相色譜儀。

標(biāo)準(zhǔn)品：賴脯胰島素對(duì)照品（批號(hào)：140729-200501，中國(guó)藥品生物制品檢定所）。

參比制劑：優(yōu)泌樂(lè)25（批號(hào)：C572223，Eli Lilly Italia S.p.A公司）。

樣品：精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R），產(chǎn)自江蘇萬(wàn)邦生化醫(yī)藥集團(tuán)有限責(zé)任公司，批號(hào)為B201608504、B201609501、B201609502。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色 譜 柱：Inertsil ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.2mol/L硫酸鹽緩沖液-乙腈（74∶26）；柱溫：40℃；流速：0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：214 nm；進(jìn)樣器溫度：5℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 系統(tǒng)適用性

取賴脯胰島素對(duì)照品適量，加0.01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1mL中含1mg溶液，放置，使A21脫氨賴脯胰島素含量為0.8%～11.0%。在上述色譜條件下，重組賴脯胰島素主峰與A21脫氨賴脯胰島素峰之間的分離度不小于3.0，重組賴脯胰島素主峰的拖尾因子不大于1.5。該色譜條件用于含量測(cè)定，按外標(biāo)法以賴脯胰島素峰與A21脫氨賴脯胰島素峰面積之和計(jì)算。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取賴脯胰島素對(duì)照品適量，用0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并制成每1mL中含20單位的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.4 檢測(cè)方法及結(jié)果

每批樣品分別取12支，分為6組（2支/組）進(jìn)行試驗(yàn)。按照筆式注射器及筆芯使用說(shuō)明書(shū)緩慢顛倒或滾動(dòng)筆芯至規(guī)定次數(shù)，將筆芯和注射器針頭正確安裝于胰島素筆式注射器上，排出筆芯中的氣泡后，正確設(shè)置注射劑量為30 IU（d1～d9，模擬臨床中患者用法與用量，按照體重75 kg，0.4 IU/(kg·d)的給藥劑量計(jì)算），并注射出藥液，取下注射器針頭，將上述裝有筆芯的筆式注射器于室溫下避光靜置。每24 h重復(fù)上述操作，分別在d1、d3、d6、d9收集注射出的藥液至容器中，并迅速用微量移液槍快速精密吸取兩份200 μL藥液備用。按照上述方法注射至行程終點(diǎn)前15 IU處（預(yù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定），放置24 h，將筆式注射器及筆芯緩慢顛倒或滾動(dòng)筆芯規(guī)定次數(shù)，推注藥液至行程終點(diǎn)，用微量移液槍從容器中快速精密吸取200 μL藥液，用于剩余藥液混勻后的檢測(cè)。

取200 μL藥液，加入0.99 mol/L鹽酸溶液6 μL，振搖使其完全澄清，用0.01mol/L鹽酸溶液溶解并制成每1mL中含20單位的溶液，作為供試品溶液。取200 μL藥液與0.1 mol/L 200 μLTris-鹽酸緩沖液[pH 8.2，(25±1)℃ ]，混合，振搖，(25±1)℃放置 1 h，用0.2 μm微孔濾膜濾過(guò)，取濾液，每1 mL加入0.99 mol/L鹽酸溶液15 μL，作為可溶性賴脯胰島素供試品溶液。

2.5 檢測(cè)誤差分析

本研究選取江蘇萬(wàn)邦醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)的三批精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）和禮來(lái)公司的優(yōu)泌樂(lè)25，按照使用說(shuō)明書(shū)，模擬臨床注射操作，選擇注射劑量為30 IU，并且選取了患者單次注射劑量100 μL(即10 IU) 作為小樣本量待測(cè)樣品溶液的體積。孫雪等研究發(fā)現(xiàn)，小樣本量法及大樣本量法檢測(cè)同批次預(yù)混注射液，結(jié)果無(wú)顯著區(qū)別，并符合方法學(xué)驗(yàn)證的要求[7]，因此本次研究可以真實(shí)反映每只筆芯的實(shí)際含量。

本研究中的注射行程終點(diǎn)是依據(jù)萬(wàn)邦筆的使用說(shuō)明書(shū)而確定。選取注射至行程終點(diǎn)前15 IU處作為剩余藥液的混勻體積，以考察玻璃珠在筆芯內(nèi)的運(yùn)動(dòng)空間減小后，樣品中的重組賴脯胰島素含量和可溶性重組賴脯胰島素是否穩(wěn)定和符合規(guī)定。結(jié)果表明，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）在使用過(guò)程中和使用終末期含量和可溶性賴脯胰島素沒(méi)有顯著差異，并且含量和可溶性賴脯胰島素均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求（90.0%～105.0%與15.0%～30.0%），因此，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）在使用中和使用終末期可保證成分充分混勻。

由于本實(shí)驗(yàn)的溫度僅是模擬臨床使用藥常見(jiàn)的使用和保存溫度，不能代表其他特殊溫度條件，患者在使用過(guò)程中嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)操作時(shí)可以完全保證藥品的質(zhì)量。

在可溶性重組賴脯胰島素的檢測(cè)過(guò)程中，通過(guò)向藥液中加入Tris緩沖液，可以使部分與魚(yú)精蛋白物理吸附的可溶性重組賴脯胰島素達(dá)到解吸附的效果?；鞈乙褐械木w大小為1～20 μm，通過(guò)0.2 μm濾膜可將其完全濾過(guò)，因此檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

表1 精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）使用過(guò)程中和使用終末期含量和可溶性賴脯胰島素的檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)論

隨著精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）在臨床中的廣泛應(yīng)用，已經(jīng)有不少學(xué)者研究其在臨床應(yīng)用中的療效，但對(duì)筆芯質(zhì)量控制及檢測(cè)使用中的筆芯質(zhì)量還沒(méi)有見(jiàn)報(bào)道[8-11]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)M臨床使用精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）的操作及室溫保存條件，運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定胰島素含量，考察其在使用過(guò)程中的變化，為臨床開(kāi)啟預(yù)混胰島素注射液后正確使用和保存提供依據(jù)。

[1]潘長(zhǎng)玉,金文勝.2型糖尿病流行病學(xué)[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2005,21(5):491-495.

[2]王紅霞,梁秀芬,張玉敏,等.我國(guó)2型糖尿病的流行病學(xué)及危險(xiǎn)因素研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志,2006,38(2):156-159.

[3]Reviriego J, Herzmroach P. ImprovedGlycamic Control without Increased Risk of Hypoglycaemiawith a 25% Insulin/lispro 75% NPL Mixture Twice Daily Compared with NPL Twice Daily in Patients with Type2 Diabetes [J].J ApplTher Res,2004,4(5):19-25.

[4]張宏穎,張廣穎,楊志霞.賴脯胰島素25治療2型糖尿病臨床觀察[J].河北醫(yī)藥,2011,33(12):1827-1828.

[5]林旋,郎江明,魏愛(ài)生,等.精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液對(duì)2型糖尿病患者糖代謝與免疫功能的影響及其炎癥機(jī)制研究[J].中國(guó)生化藥物雜志,2015(4):144-146.

[6]張繼斌,陳勝業(yè),郭貞臻.優(yōu)泌樂(lè)25在臨床治療2型糖尿病的療效觀察[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2016,14(10):132-133.

[7]孫雪,黃元禮,馮曉明,等.小樣本量預(yù)混精蛋白重組人胰島素注射液的效價(jià)測(cè)定[J].藥物分析雜志,2011,31(10):1987-1989.

[8]艾新泉.優(yōu)泌林70/30和優(yōu)泌樂(lè)25治療2型糖尿病效果研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,21(19):2108-2109.

[9]岳建美,井慶平.優(yōu)泌樂(lè)50與優(yōu)泌樂(lè)25治療2型糖尿病療效觀察[J].山東醫(yī)藥,2012,52(1):93-94.

[10]彭永梅.優(yōu)泌樂(lè)25和優(yōu)泌林30R治療2型糖尿病臨床觀察[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2010,26(10):1507-1508.

[11]韋艷鴻,龐翠軍,肖常青.精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（25R）強(qiáng)化治療初診2型糖尿病療效觀察[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2016,30(4):407-408.