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        樣品不同稀釋倍數(shù)的菌落總數(shù)檢測(cè)分析

        2018-07-07 03:20:16
        山東化工 2018年11期
        關(guān)鍵詞:標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)

        高 杰

        (國(guó)家城市供水水質(zhì)監(jiān)測(cè)網(wǎng)武漢監(jiān)測(cè)站,湖北 武漢 430000)

        飲用水國(guó)標(biāo)GB/T 5750.12-2006定義菌落總數(shù)是指水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上有氧條件下37℃培養(yǎng)48 h后,所得1 mL水樣所含菌落的總數(shù)[2]。水中的細(xì)菌學(xué)檢查是評(píng)判水質(zhì)優(yōu)劣的重要指標(biāo),作為日常檢測(cè)七項(xiàng)指標(biāo)(色度、濁度、嗅和味、肉眼可見物、菌落總數(shù)、總大腸菌群、pH值)之一的菌落總數(shù),主要反映了水體的受污染程度以及評(píng)價(jià)水處理工藝是否達(dá)標(biāo)的主要因素。

        在實(shí)際工作中檢測(cè)人員經(jīng)常會(huì)參加微生物盲樣考核,能夠快速提升自身的技術(shù)水平[3],可以對(duì)欠缺的理論知識(shí)進(jìn)行查漏補(bǔ)缺,充分保證測(cè)定數(shù)據(jù)達(dá)到確定的檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[4]。進(jìn)行菌落總數(shù)考核時(shí),檢測(cè)人員要面臨如何確定稀釋倍數(shù)這一主要問題。本文通過(guò)對(duì)已知菌落總數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行不同梯度的稀釋,分析不同稀釋倍數(shù)樣品之間的數(shù)據(jù)差異,對(duì)今后的微生物考核能夠提供一定的指導(dǎo)意義。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

        營(yíng)養(yǎng)瓊脂,標(biāo)準(zhǔn)樣品(濃度范圍146±19cfu/mL)。

        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

        高壓蒸汽滅菌鍋,恒溫培養(yǎng)箱,無(wú)菌移液管,無(wú)菌取樣瓶,9cm玻璃平皿。

        1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

        1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品前處理

        將標(biāo)準(zhǔn)樣品管從冰箱中取出,置于室溫平衡10~15min。將100 mL無(wú)菌緩沖液(PBS)倒入100mL無(wú)菌取樣瓶中定量。把管中有顏色的圓形膠盤無(wú)菌操作轉(zhuǎn)移至100 mL無(wú)菌PBS中(必要時(shí)可使用無(wú)菌鑷子,一定要在鑷子冷卻后夾取膠盤)。充分振蕩后靜置10min,直到圓形膠盤完全溶解,得到待檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)原液(使用前要充分搖勻)。

        1.3.2 平皿計(jì)數(shù)法

        為保證數(shù)據(jù)的充分可靠性,設(shè)計(jì)了4個(gè)稀釋梯度,分別是1倍、2倍、5倍、10倍的稀釋液:

        1)1倍稀釋液是標(biāo)準(zhǔn)原液;無(wú)菌操作方法吸取20 mL充分混勻的標(biāo)準(zhǔn)原液,注入盛有20 mL滅菌水的無(wú)菌瓶中,混勻成2×稀釋液;無(wú)菌操作方法吸取20 mL充分混勻的標(biāo)準(zhǔn)原液,注入盛有80 mL滅菌水的無(wú)菌瓶中,混勻成5×稀釋液;無(wú)菌操作方法吸取10 mL充分混勻的標(biāo)準(zhǔn)原液,注入盛有90 mL滅菌水的無(wú)菌瓶中,混勻成10×稀釋液;

        2)以無(wú)菌操作方法分別吸取1mL不同稀釋倍數(shù)的樣品,吸取樣品前要充分混勻,注入到玻璃平皿中,傾注約15mL已融化并冷卻到45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,立即旋搖平皿,使水樣與培養(yǎng)基充分混勻;

        3)待培養(yǎng)基冷卻凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿,置于(36±1)℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h,分別進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 十組平行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

        將每一個(gè)稀釋樣品做10組平行樣,分析表1和圖1的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),1×標(biāo)準(zhǔn)原液和2×稀釋樣品的菌落總數(shù)分布相對(duì)集中,平均值也都在合理范圍。隨著稀釋倍數(shù)越來(lái)越高,樣品的菌落總數(shù)分布越來(lái)越離散,其中5×和10×的稀釋樣品平均值不在允許濃度范圍內(nèi)。當(dāng)樣品被稀釋的倍數(shù)變大時(shí),那么每一次取樣的均勻性就會(huì)越來(lái)越低,導(dǎo)致偏差較大。

        表1 各稀釋樣品的菌落總數(shù)

        圖1 各稀釋樣品菌落總數(shù)散點(diǎn)圖

        2.2 二十組平行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

        將每一個(gè)稀釋樣品再做20組平行樣,分析表2和圖2的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),1×標(biāo)準(zhǔn)原液和2×稀釋樣品的菌落總數(shù)分布情況與圖1類似,2×稀釋樣品的平均值更加接近中位值146cuf/mL。通過(guò)增加樣品量,5×稀釋樣品的菌落總數(shù)平均值落在合理范圍內(nèi)。但是10×稀釋樣品的菌落總數(shù)依然不在有效范圍內(nèi),這是因?yàn)樵摌?biāo)準(zhǔn)樣品菌落總數(shù)的確定范圍是(146±19)cfu/mL,如果稀釋到10倍,誤差就會(huì)變大,數(shù)據(jù)間的差值也會(huì)很不均衡。通過(guò)增加平行樣數(shù)量,可以使結(jié)果更加精準(zhǔn),但是如果稀釋倍數(shù)過(guò)高,那么就需要更多的樣本量,才可能使結(jié)果準(zhǔn)確,不過(guò)這會(huì)導(dǎo)致實(shí)際實(shí)驗(yàn)中效率下降,精力耗費(fèi)過(guò)大。

        表2 各稀釋樣品的菌落總數(shù)

        圖2 各稀釋樣品菌落總數(shù)散點(diǎn)圖

        2.3 討論

        在實(shí)際考核中,一般情況下質(zhì)控考核作業(yè)指導(dǎo)書會(huì)標(biāo)明菌落總數(shù)盲樣的濃度范圍,那么在確定稀釋倍數(shù)時(shí),檢測(cè)人員應(yīng)該盡可能的把稀釋后的樣品菌落總數(shù)落在300cfu/mL范圍內(nèi),這樣可以使菌落在9 cm玻璃平皿上最大化的均勻分布,還能夠保證最有效的稀釋倍數(shù);如果質(zhì)控考核作業(yè)指導(dǎo)書沒有給出菌落總數(shù)濃度范圍,那么檢測(cè)人員就要根據(jù)實(shí)際情況制定一系列的稀釋梯度,而且對(duì)于稀釋度高的樣品要做至少20組的平行實(shí)驗(yàn),以此來(lái)保證數(shù)據(jù)的可靠性。不管是否提供濃度范圍,實(shí)驗(yàn)中都要保證每一個(gè)稀釋度都有比較充足的樣本量,低倍稀釋樣品可以有所縮減,以此來(lái)提高實(shí)驗(yàn)效率和準(zhǔn)確度。

        [1]王虹玲. 微生物質(zhì)控考核盲樣未知菌檢測(cè)方法探討[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2000(5): 603.

        [2]劉玉紅,景二丹,胡興利, 等. 酶底物法與平皿計(jì)數(shù)法測(cè)定水中菌落總數(shù)的比較[J]. 中國(guó)給水排水, 2017(2): 111-114.

        [3]楊獻(xiàn)青,何惠娟. 微生物質(zhì)控盲樣菌株鑒定的檢驗(yàn)思路與質(zhì)量保證[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2010(3): 663-664.

        [4]王云國(guó),李懷燕. 食品微生物檢驗(yàn)內(nèi)容及檢測(cè)技術(shù)[J]. 糧油食品科技, 2010(3): 40-43.

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