劉雪蘭，張 燕，伏春燕，魏祥法，閻佩佩，石天虹，董以雷，劉瑞亭

(山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，山東濟(jì)南 250023)

我國商品肉雞生產(chǎn)存在的比較突出的問題是皮脂和腹脂沉積過度，因此，降低商品肉雞體脂沉積從而改善肉品質(zhì)廣受科研工作者的關(guān)注。肉雞脂肪代謝的調(diào)控途徑有多種，其中通過母體的脂肪酸營養(yǎng)來調(diào)控子代的脂肪代謝成為研究的熱點(diǎn)之一。共軛亞油酸(CLA)是一種新型的體脂調(diào)節(jié)劑，具有抑制機(jī)體脂肪沉積的生物學(xué)活性，但是其價(jià)格昂貴，直接用于商品肉雞會(huì)增加成本，很難推廣應(yīng)用，為此，設(shè)想將共軛亞油酸應(yīng)用于肉種雞飼糧，將其沉積在種蛋中進(jìn)而調(diào)控商品蛋的脂肪代謝。但是前期研究發(fā)現(xiàn)，含有共軛亞油酸的種蛋孵化率極低，高CLA含量的種蛋孵化率甚至為零。Aydin 等[1-2]研究表明，種雞和種鵪鶉飼糧中添加CLA，受精蛋的孵化能力完全喪失，這些研究似乎預(yù)示著通過母體共軛亞油酸調(diào)控子代脂肪代謝成為不可能，成為開展母源性CLA研究的瓶頸。該研究的目的是在孵化率極低的種雞CLA飼糧中添加不同比例的大豆油以調(diào)控CLA種蛋中的脂肪酸構(gòu)成，從而得出使其孵化率較好恢復(fù)的大豆油添加量，明確使CLA種蛋孵化能力喪失和恢復(fù)的蛋黃脂肪酸組成的差異，解決母源性CLA調(diào)控商品肉雞脂肪代謝研究的瓶頸問題，為下一步研究提供前體條件。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物與分組。36周齡健康肉種母雞600只，種公雞72只，分為6個(gè)組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)28只，其中母雞25只，公雞3只。

1.1.2試驗(yàn)材料。共軛亞油酸(CLA)油，購自蓬萊市海洋生物有限公司，CLA含量80%(CLA-80)；福臨門大豆油，購自當(dāng)?shù)爻校蠖褂椭泻貦八?%～10%、硬脂酸2%～5%、花生酸1%～3%、油酸22%～30%、亞油酸50%～60%、亞麻油酸5%～9%。

1.1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)。第1組為對(duì)照組，飼喂普通日糧；第2～6組為試驗(yàn)組，飼喂0.5%CLA日糧，試驗(yàn)各組大豆油添加量分別為0%、2%、4%、6%、8%。

1.1.4試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)雞日糧營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)采用NY/33—2004。1～6組營養(yǎng)水平一致，試驗(yàn)飼糧配方見表1。其營養(yǎng)成分含量如下：粗蛋白16.5%、代謝能11 MJ/kg、蛋氨酸0.32%、蛋+胱0.61%、鈣3.5%、有效磷0.42%。

表1 試驗(yàn)飼糧配方

1.2飼養(yǎng)管理試驗(yàn)雞采用本交籠公母混養(yǎng)，自然交配。人工喂料，自由飲水，每天光照16 h，光照強(qiáng)度20 lx，舍內(nèi)溫度22～32 ℃。

1.3種蛋的收集與儲(chǔ)存試驗(yàn)開始14 d后，收集擬孵化的種蛋，連續(xù)收集5 d。將每天收集的種蛋放在密閉容器中用高錳酸鉀熏蒸消毒30 min，取出放入溫度為15 ℃、相對(duì)濕度為75%的儲(chǔ)藏室內(nèi)。

1.4種蛋的選擇與孵化管理每重復(fù)組選擇75枚形狀正常、大小均勻、蛋殼干凈光滑、質(zhì)量為52～56 g的種蛋進(jìn)行孵化。孵化溫度：1～7 d 38.4 ℃,7～19 d 37.8 ℃,19～21 d 37.3 ℃；孵化濕度：65%～70%；孵化器換氣：孵化1～2 d把進(jìn)、出氣孔關(guān)上或開一個(gè)小口，使機(jī)內(nèi)的溫度上升快并保持平穩(wěn)；3～7 d每天換氣2次，每次3 h；7 d以后打開進(jìn)出氣孔，連續(xù)換氣；翻蛋：每晝夜翻蛋4次，每6 h 1次，翻蛋角度為90°；照蛋：分別在7、11、17 d時(shí)各照蛋1次，挑出無精蛋和死胚；落盤：18 d，將蛋平碼在出雛盤上。

1.5檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.5.1種蛋孵化率。受精蛋孵化率=孵出數(shù)/受精蛋數(shù)×100%。

1.5.2蛋黃脂肪酸含量。將蛋黃冷凍干燥成蛋黃粉，按照GB 5009.168—2016的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.5.3種蛋蛋品質(zhì)。每重復(fù)收集同一天的種蛋20枚進(jìn)行蛋品質(zhì)測(cè)定。蛋重、蛋白高度、蛋黃顏色和哈氏單位用EMT-5200型多功能蛋品質(zhì)量測(cè)量儀測(cè)定，蛋殼強(qiáng)度用KQ-1A型TENOVO蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀測(cè)定。

1.5.4種蛋抗氧化指標(biāo)。總抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)采用武漢基因美試劑盒ELISA法測(cè)定。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。采用單因子方差分析，用LSD做平均數(shù)間的兩兩比較，檢驗(yàn)顯著性水平0.05，試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1不同肉種雞飼糧對(duì)受精蛋孵化率的影響從表2結(jié)果可以看出，肉種雞飼糧添加0.5% CLA油，受精蛋孵化率僅為6.9%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于添加0.5%的大豆油組；肉種雞CLA飼糧中補(bǔ)充不同比例的大豆油，受精蛋孵化率會(huì)有不同程度的改善，添加2%大豆油時(shí)，孵化率恢復(fù)為56.7%;添加4%大豆油時(shí)，受精蛋孵化率達(dá)86.2%；大豆油的添加量為6%和8%時(shí)，受精蛋孵化率又逐漸降低。由此可以得出：肉種雞日糧添加0.5%CLA不利于種蛋的孵化，但是，同時(shí)補(bǔ)充適量的大豆油可以提高種蛋的孵化率，補(bǔ)充量以4%～5%為宜。

表2 孵化結(jié)果

2.2不同肉種雞飼糧對(duì)種蛋蛋黃脂肪酸組成的影響由表3可知，各組蛋黃中的己酸、正癸酸、月桂酸的含量差異不顯著(P>0.05)，所測(cè)的其他脂肪酸含量差異均顯著(P<0.05)，具體如下：2組(純CLA飼糧組)的飽和脂肪酸C14∶0、C16∶0、C18∶0、C20∶0、C22∶0、C24∶0含量顯著大于1組(純大豆油組)(P<0.05)，單不飽和脂肪酸C14∶1、C16∶1、C18∶1、C20∶1含量顯著低于1組(P<0.05)，多不飽和脂肪酸C18∶2n6c、C18∶3n3、C20∶3n6、C20∶3n3、C20∶5n3、C22∶6n3含量與1組差異不顯著(P>0.05)，而C20∶4n6含量顯著低于1組，CLA-c9t11、CLA-t10c12含量顯著大于1組(P<0.05)；3、4、5、6組(添加CLA+不同比例的大豆油)的上述飽和脂肪酸含量低于2組，且隨著大豆油添加比例的增加而逐漸降低，單不飽和脂肪含量變化規(guī)律不明顯，多不飽和脂肪酸含量逐漸增加。該結(jié)果表明，肉種雞飼糧添加不同油脂能改變種蛋蛋黃的脂肪酸構(gòu)成。

2.3不同肉種雞飼糧對(duì)種蛋蛋品質(zhì)的影響從表4可以看出，各組的蛋重、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋白高度差異不顯著(P>0.05)。此結(jié)果表明，在該研究條件下(同一營養(yǎng)水平不同配方)的肉種雞飼糧對(duì)種蛋蛋品質(zhì)沒有影響。

表3 蛋黃脂肪酸

注：同列數(shù)據(jù)后小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)

Note:Different small letters within the same column mean significant differences (P<0.05)

表4 蛋品質(zhì)指標(biāo)

2.4不同肉種雞飼糧對(duì)種蛋抗氧化能力的影響從表5可以看出，不同種蛋的總抗氧化能力有顯著差異，1組和4組總抗氧化能力顯著高于其他組(P<0.05)，相應(yīng)，種蛋中的過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量顯著低于其他各組(P<0.05)。該結(jié)果表明，肉種雞共軛亞油酸飼糧中添加不同比例的大豆油對(duì)種蛋抗氧化能力具有顯著影響。

3 討論

人們一直對(duì)通過飼糧途徑來提高雞蛋中CLA含量的方法有濃厚的興趣，但是這種方法并沒有取得成功，因?yàn)镃LA會(huì)使蛋清的顏色變成粉紅色，使蛋黃變硬[1，3]，而且CLA會(huì)導(dǎo)致種雞和種鵪鶉的種蛋孵化能力喪失[1-2]，這種由CLA引起的種禽繁殖能力喪失使它在畜禽養(yǎng)殖上的應(yīng)用受到質(zhì)疑，甚至影響到CLA在人類膳食中的應(yīng)用[4]。

表5 種蛋抗氧化指標(biāo)

注：同列數(shù)據(jù)后小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)

Note:Different small letters within the same column mean significant differences (P<0.05)

研究表明，飼糧中的其他脂肪酸可以調(diào)控CLA對(duì)種蛋孵化能力的不利影響[1，4]。Muma等[5]研究得出，加入2%大豆油僅使孵化能力有小的改善，4%大豆油導(dǎo)致孵化率部分恢復(fù)，6%大豆油使孵化率恢復(fù)到和對(duì)照組一樣的水平，添加8%大豆油時(shí)，孵化率沒有進(jìn)一步改善，說明大豆油消除CLA所致的種蛋孵化能力喪失問題具有明顯的劑量效應(yīng)。該研究結(jié)果為添加2%大豆油時(shí)，孵化率恢復(fù)為56.7%，添加4%大豆油時(shí)，受精蛋孵化率達(dá)86.2%，添加量為6%和8%時(shí)，受精蛋孵化率又逐漸降低，與Muma等的結(jié)果不完全相同，可能是由于共軛亞油酸油中CLA-t10c12的含量不同，因此，CLA劑量與植物油劑量關(guān)系沒有直接的可比性。

Wilson[6]報(bào)道，種蛋中脂肪酸的構(gòu)成會(huì)影響胚胎的發(fā)育和種蛋孵化率。Tullett[7]研究認(rèn)為，當(dāng)?shù)包S中的硬脂酸占總脂肪酸的比例大于12%，油酸的比例小于40%，這時(shí)油酸∶硬脂酸的比例降至4以下，對(duì)種蛋孵化率有不利影響。當(dāng)飼糧中含有棉籽和木棉籽粕時(shí)也會(huì)產(chǎn)生孵化率降低的問題，原因是這些餅粕中含有環(huán)丙烯型脂肪酸，抑制雞肝臟中Δ9去飽和酶的活性[8]。目前的研究認(rèn)為，CLA對(duì)種蛋孵化率的影響是由種蛋中的脂肪酸組成發(fā)生改變而引起的，CLA種蛋中的飽和脂肪酸含量增加，單不飽和脂肪酸含量降低[1-2,4]。該研究結(jié)果表明，CLA飼糧組的飽和脂肪酸C14∶0、C16∶0、C18∶0、C20∶0、C22∶0、C24∶0含量顯著大于對(duì)照組，單不飽和脂肪酸C14∶1、C16∶1、C18∶1、C20∶1含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，與前人的研究結(jié)論相同。

孫從佼等[9]報(bào)道，蛋殼質(zhì)量對(duì)孵化率有一定的影響，蛋殼厚度太薄，則孵化期間水分散失過多，會(huì)導(dǎo)致孵化率降低；但是對(duì)于蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度太大的種蛋，可能因?yàn)榈皻ぶ旅苄蕴珡?qiáng)，阻礙了孵化期間種蛋與外界的氣體交換，反而降低孵化率。該研究中，各組的蛋殼質(zhì)量差異不顯著，說明孵化率的差異與種蛋蛋殼質(zhì)量無關(guān)，也說明大豆油和CLA油對(duì)蛋品質(zhì)無影響。

種蛋孵化過程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物對(duì)種蛋孵化率也會(huì)產(chǎn)生一定的影響，丙二醛(MDA)是蛋黃脂肪氧化的產(chǎn)物，對(duì)胚胎具有毒害作用。種蛋的總抗氧化能力越強(qiáng)，在孵化過程中產(chǎn)生的丙二醛(MDA)越少，種蛋孵化率越高[10]。該研究中各組種蛋的抗氧化能力有顯著差異，1組和4組總抗氧化能力顯著高于其他組，尤其高于2組，相應(yīng)，種蛋中的過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量顯著低于其他各組，尤其高于2組，種蛋孵化率也顯著高于其他組，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于2組。該研究的結(jié)果表明，種蛋中的CLA極易氧化，產(chǎn)生丙二醛(MDA)，使種蛋孵化率降低，隨著大豆油的添加，種蛋中脂肪酸的構(gòu)成發(fā)生變化，抗氧化能力增加，孵化過程中丙二醛(MDA)含量減少，也是種蛋孵化能力提高的因素之一。

4 結(jié)論

(1)影響種蛋孵化能力的因素很多，除環(huán)境因素外，種蛋的某些成分含量也是重要因素，該研究測(cè)定了種蛋的脂肪酸構(gòu)成、種蛋的蛋品質(zhì)和種蛋中的抗氧化能力指標(biāo)，其中確定了脂肪酸構(gòu)成和種蛋的抗氧化能力是導(dǎo)致孵化率改變的因素。

(2)肉種雞飼糧中添加0.5%CLA(CAL-80)油，同時(shí)添加4%～5%的大豆油能使CLA種蛋的孵化率大幅提高。

[1] AYDIN R,PARIZA M W,COO KM E.Olive oil preventsthe adverse effects of dietary conjugated linoleic acid onchick hatchability and egg quality[J].J Nutr,2001,131(3):800-806.

[2] AYDIN R,COOK M E.The effect of dietary conjugated linoleic acid on egg yolk fatty acids and hatchability in Japanese quail[J].Poultry science,2004,83(12):2016-2022.

[3] AHN D U,SELL J L,JO C,et al.Effect of dietary conjugated linoleic acid on the quality characteristics of chicken eggs during refrigerated storage[J].Poult Sci,1999,78:922-928.

[4] CHERIAN G,AI W,GOEGER M P.Maternal dietary conjugated linoleic acid alters hepatic triacylglycerols and tissue fatty acids in hatched chicks[J].Lipids,2005,40(2):131-136.

[5] MUMA E,PALANDER S,NSI M,et al.Modulation of conjugated linoleic acid-induced loss of chicken egg hatchability by dietary soybean oil[J].Poultry science,2006,85(4):712-720.

[6] WILSON H R.Effects of maternal nutrition on hatchability[J].Poult Sci,1997,76(1):134-143.

[7] TULLETT S G.Science and the art of incubation[J].Poult Sci,1990,69(1):1-15.

[8] ALLEN E,JOHNSON A R,FOGERTY A C,et al.Inhibition by cyclopropene fatty acids of the desaturation of stearic acid in hen liver[J].Lipids,1967,2(5):419-423.

[9] 孫從佼,孫菡聰,侯卓成,等.絲羽烏雞蛋品質(zhì)對(duì)種蛋受精率和受精蛋孵化率的影響[J].中國家禽,2011,33(8):19-21.

[10] 王芙蓉.?；撬釋?duì)鵪鶉生產(chǎn)性能、免疫功能及脂肪代謝影響的研究[D].無錫:江南大學(xué),2010.