宋延楓 ，王秀敏 ，廉信 ，宋瓊

（1.桓臺(tái)縣人民醫(yī)院，山東 桓臺(tái) 256400；2.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 濱州 256603）

銀屑病是一種常見的慢性、復(fù)發(fā)性、難治性、炎癥性皮膚病，鱗屑性紅斑為其典型皮損。尚缺乏有效的治療手段，嚴(yán)重影響患者身心健康。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，包含遺傳因素、環(huán)境因素、感染（包括細(xì)菌、病毒等）、代謝及內(nèi)分泌因素、精神因素、免疫因素等，目前該病更傾向于有遺傳基礎(chǔ)的自身免疫性疾病。研究顯示銀屑病是由角質(zhì)形成細(xì)胞和浸潤(rùn)免疫細(xì)胞之間相互作用產(chǎn)生的?，F(xiàn)在被認(rèn)為是一種TH1和TH17細(xì)胞混合介導(dǎo)的自身免疫性疾病，干擾素（IFN）-γ+、白細(xì)胞介素（IL）-17+細(xì)胞也參與了銀屑病的發(fā)病。IL-33、IL-38同為IL-1家族成員，研究顯示IL-33參與Th1/Th17介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎疾病的發(fā)病。在體外，IL-38可抑制TH1型細(xì)胞因子、IL-17及IL-22等的合成。本實(shí)驗(yàn)擬檢測(cè)IL-33、IL-38在尋常型銀屑病患者體內(nèi)的表達(dá)，探討二者在銀屑病發(fā)病中可能的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月～5月桓臺(tái)縣人民醫(yī)院皮膚科門診經(jīng)臨床或病理確診的尋常型銀屑病患者63例；男32例，女31例，平均（39.5±21.7）歲；病程1周～26年；所選病例按照《皮膚性病學(xué)》進(jìn)行分期：進(jìn)行期22例，靜止期20例，退行期21例。所有受檢患者近2個(gè)月未使用糖皮質(zhì)激素、維A酸類藥物及免疫抑制劑，不伴其他系統(tǒng)性疾病，不合并其他自身免疫性疾病。健康對(duì)照組32例，均來自志愿者或健康體檢者。其中男16例，女16例；平均年齡（40.1±20.9）歲。本試驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受檢者了解詳情并簽署知情同意書。

1.2 主要試劑與儀器 人IL-33、IL-38 ELISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)Abcam公司，Dynatech MR 5 000型酶標(biāo)儀購(gòu)自鄭州安圖生物工程有限公司。

1.3 方法 ①標(biāo)本采集：無菌操作下抽取所有受檢者外周靜脈血各3 mL裝入試管，室溫下充分凝血，以4 000轉(zhuǎn)/min離心5 min，分離血清，存儲(chǔ)于-80℃冰箱。②血清IL-33、IL-38檢測(cè)：采用競(jìng)爭(zhēng)性免疫抑制ELISA法，檢測(cè)外周靜脈血血清中IL-33、IL-38水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，最后將加樣板置于波長(zhǎng)450 nm的酶標(biāo)儀讀取各孔吸光光度值（A450nm），并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)一步計(jì)算樣品濃度。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，各項(xiàng)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，尋常型銀屑病各組間及與健康對(duì)照組比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清IL-33表達(dá)水平 尋常型銀屑病進(jìn)行期血清IL-33表達(dá)水平顯著高于靜止期、退行期、健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均P＜0.05；靜止期、退行期與健康對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05，見表 1。

尋常型銀屑病患者組組間比較：進(jìn)行期外周血IL-33表達(dá)顯著高于靜止期、退行期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05，靜止期與退行期間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。

2.2 各組血清IL-38表達(dá)水平 尋常型銀屑病患者血清中IL-38表達(dá)水平均顯著低于健康對(duì)照組。進(jìn)行期、靜止期、退行期外周血血清IL-38表達(dá)水平相比對(duì)照組均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

尋常型銀屑病患者組組間比較：進(jìn)行期外周血IL-33表達(dá)顯著低于靜止期、退行期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；靜止期與退行期間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 尋常型銀屑病患者與健康對(duì)照組外周血IL-33、IL-38 表達(dá)水平 （pg/mL，±s）

表1 尋常型銀屑病患者與健康對(duì)照組外周血IL-33、IL-38 表達(dá)水平 （pg/mL，±s）

注：尋常型銀屑病組各期與健康對(duì)照組相比，aP＜0.05;bP＞0.05。

組別 n IL-33（pg/mL） IL-38（pg/mL）尋常型銀屑病組 63進(jìn)行期 22 69.08±11.54a 40.70±9.17a靜止期 20 58.18±16.38b 84.54±17.59a退行期 21 54.65±14.81b 78.88±14.32a健康對(duì)照組 32 60.85±14.11 139.81±23.35

3 討論

IL-1家族新成員IL-33是一種具有細(xì)胞因子和核轉(zhuǎn)錄因子雙重功能的蛋白。IL-33參與了許多急、慢性炎癥過程以及很多自身免疫性疾病的發(fā)病[1]。IL-33受體為ST2，ST2跨膜形式主要存在于TH2細(xì)胞、肥大細(xì)胞（MCs）和角質(zhì)形成細(xì)胞（KCs）。IL-17與腫瘤壞死因子（TNF）-α聯(lián)合作用于人角質(zhì)形成細(xì)胞與銀屑病發(fā)病相關(guān)[2]。IL-33可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞合成某些趨化因子，如CXCL1和CXCL8[3]。病原體相關(guān)分子模式（Pathogen-associated molecular patterns，PAMP）的分子和細(xì)胞因子如 TNF-α，IL-1β和IFN-γ可刺激IL-33的合成[4]。IFN-γ能誘導(dǎo)培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞合成IL-33，IFN-γ與TNF-α聯(lián)合可催化IL-33成熟[3]。此外，IL-33招募中性粒細(xì)胞遷移和浸潤(rùn)，并能使IL-17和TNF-α合成增加[5]。IL-17可抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞合成IL-33，而不能抑制IL-6和IL-8等炎性細(xì)胞因子的合成[6]。IL-17在自身免疫性疾病的炎癥組織中表達(dá)強(qiáng)烈上調(diào)，并且其可以通過與TNF-α等其他細(xì)胞因子協(xié)同作用來放大炎癥[7]。之前的研究顯示，IL-17與TNF-α聯(lián)合作用可促進(jìn)NHEKs細(xì)胞中IL-33成熟。銀屑病是一種與Th1/TH17介導(dǎo)的免疫疾病，銀屑病患者體內(nèi)IL-17A，IFN-γ和TNF-α表達(dá)升高，且血清IL-17A水平與銀屑病PASI評(píng)分呈正相關(guān)，IL-17A以劑量-濃度依賴方式誘導(dǎo)IL-33mRNA及其蛋白表達(dá)。因此，筆者可以推測(cè)IL-17A等銀屑病相關(guān)細(xì)胞因子通過調(diào)節(jié)IL-33的表達(dá)進(jìn)而參與銀屑病的發(fā)病。Meephansan 等[8]證實(shí)，IL-33 及其受體 ST2L，主要表達(dá)于銀屑病皮損的表皮，并與局部炎性細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)。Balato等[9]研究指出，IL-33通過活化肥大細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞在銀屑病中發(fā)揮促炎作用，且IL-33主要在銀屑病皮損中表達(dá)升高，血清的表達(dá)水平與正常對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究證實(shí)不同類型的銀屑病患者的血清中IL-33含量均較健康對(duì)照組升高，并與血清中TNF-α水平呈正相關(guān)，用抗TNF-α治療后IL-33的水平也下降[10]。筆者的研究發(fā)現(xiàn)，進(jìn)行期尋常型銀屑病患者血清中IL-33表達(dá)較靜止期、退行期及健康對(duì)照組有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而靜止期、退行期與健康對(duì)照組組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這提示血清IL-33水平與尋常型銀屑病疾病活動(dòng)性有關(guān)，可能參與了銀屑病發(fā)病。

IL-38為IL-1家族另一成員，其與IL-36Ra分享43%的同源性，與IL-1Ra具有41%的同源性。研究證實(shí)IL-38主要與IL-36R相結(jié)合，同IL-36Ra的生物學(xué)作用類似[11]。Marrakchi等[12]研究指出攜帶Leu27Pro突變的泛發(fā)性膿皰型銀屑病患者皮損中角質(zhì)形成細(xì)胞在受到促炎癥細(xì)胞因子IL-1β及IL-36刺激后，IL-8合成顯著增加，這可能是由于IL-36RN突變?cè)斐蒊L-36Ra拮抗作用降低。在IL-36刺激下，角質(zhì)形成細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生一種可阻止IL-8合成的抗IL-36R抗體。IL-36Ra的突變可引發(fā)膿皰型銀屑病，其可能通過促進(jìn)TH17應(yīng)答誘導(dǎo)銀屑病皮損的產(chǎn)生。此外有研究證實(shí)TH17細(xì)胞數(shù)目增加及血清IL-17水平升高與關(guān)節(jié)型銀屑病的發(fā)病密切相關(guān)。Guo等[13]發(fā)現(xiàn)，關(guān)節(jié)型銀屑病會(huì)在IL-38基因多態(tài)性的基礎(chǔ)上影響Th17細(xì)胞因子。Th17細(xì)胞可分泌 IL-6、IL-17、IL-21、IL-22 及 TNF-α。在體外，IL-38可抑制TH1型細(xì)胞因子、IL-17及IL-22等的合成[11]。這表明IL-38可能在一些炎癥疾病的病理機(jī)制中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，IL-38主要是通過阻斷IL-1R抑制Th17細(xì)胞，進(jìn)而調(diào)控IL-17和IL-22的產(chǎn)生，來影響相關(guān)疾病的發(fā)生[14]。然而，IL-38的抑制作用與IL-1受體拮抗劑等傳統(tǒng)抑制劑不同，當(dāng)其濃度降低時(shí)，其抑制作用反而更強(qiáng)[15]。IL-38與尋常型銀屑病的研究目前鮮有報(bào)道，本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)尋常型銀屑病患者血清IL-38水平較健康對(duì)照組低，且進(jìn)行期低于靜止期和退行期，鑒于IL-38對(duì)某些與銀屑病發(fā)病密切相關(guān)的促炎性細(xì)胞因子具有抑制作用，推測(cè)IL-38可能在銀屑病的發(fā)病中發(fā)揮保護(hù)性的作用。

本試驗(yàn)研究結(jié)果與既往理論研究有部分矛盾，IL-33、IL-38在尋常型銀屑病的發(fā)病承擔(dān)怎樣角色及具體的免疫機(jī)制還需大量的研究進(jìn)一步證實(shí)。

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