欒志宇，韓 飛，劉文斌，郝翔麟，趙 佶，王丹丹，陳建平，曹 佳，劉晉祎

(陸軍軍醫(yī)大學(xué)軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院毒理研究所，重慶 400038)

人類信號轉(zhuǎn)導(dǎo)淋巴細(xì)胞激活分子家族1(signaling lymphocytic activation molecule family member1,SLAMF1)基因編碼一種70ku的CD150糖蛋白，該蛋白屬于SLAM表面受體免疫球蛋白超家族成員，最早被發(fā)現(xiàn)是T細(xì)胞的表面受體[1-2]。CD150蛋白廣泛表達(dá)于免疫細(xì)胞，包括活化的T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞[2-6]。有研究發(fā)現(xiàn)CD150是麻疹病毒，犬科動物瘟熱病毒和牛瘟病毒的主要受體[7-8]。此外，SLAMF1基因也參與幾種惡性血液系統(tǒng)疾病，包括慢性淋巴細(xì)胞白血病、原發(fā)性縱隔B細(xì)胞淋巴瘤和何杰金氏淋巴瘤[9-11]。ROMANETS-KORBUT等[12]在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system，CNS)腫瘤中發(fā)現(xiàn)SLAMF1編碼的CD150蛋白高表達(dá)[12]。另一項研究發(fā)現(xiàn)，SLAMF1rs1061217降低了超重女性患乳腺癌的風(fēng)險，但增加了體重正常女性的患病風(fēng)險[13]。然而目前尚無文獻(xiàn)報道SLAMF1基因與腎透明細(xì)胞癌的關(guān)系。因此，本研究擬探討SLAMF1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)變化及其預(yù)后診斷價值。

1 材料與方法

1.1oncomine數(shù)據(jù)庫中SLAMF1在腎透明細(xì)胞癌中的RNA-Seq數(shù)據(jù)收集設(shè)定以下條件檢索oncomine(https://www.oncomine.org)數(shù)據(jù)庫。①Gene：SLAMF1；②Analysis Type：Cancervs. Normal Analysis；③Cancer Type：Clear Cell Renal Cell Carcinoma。其中Yusenko Renal、Beroukhim Renal、Jones Renal共3個隊列的差異分析結(jié)果顯示，SLAMF1 mRNA表達(dá)在腎透明細(xì)胞癌組織和正常組織中存在顯著差異。收集以上3個隊列研究中SLAMF1 mRNA表達(dá)數(shù)據(jù)147例，其中正常組織39例，腎透明細(xì)胞癌組織108例?；蛱结業(yè)D為206181_at。

1.2下載TCGA數(shù)據(jù)庫中RNA-Seq數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)下載癌癥基因圖譜數(shù)據(jù)庫(The Cancer Genome Atlas，TCGA)(http://tcgadata.nci.nih.gov)中TCGA KIRC Cohort(Kidney Clear Cell Carcinoma)中相關(guān)的RNA-Seq數(shù)據(jù)。腎透明細(xì)胞癌患者基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)dataset ID為TCGA.KIRC.sampleMap/HiSeqV2，患者的臨床病理學(xué)特征信息dataset ID為TCGA.KIRC.sampleMap/KIRC_clinicalMatrix。獲得SLAMF1 mRNA表達(dá)數(shù)據(jù)605例，其中包含配對的正常組織和腎透明細(xì)胞癌組織72例。篩選包含SLAMF1 mRNA表達(dá)值與對應(yīng)的生存預(yù)后資料的病例，最后獲得共524例腎透明細(xì)胞癌病例信息。

1.3生存分析與ROC診斷試驗匹配524例腎透明細(xì)胞癌患者的SLAMF1 mRNA表達(dá)值及其對應(yīng)的臨床病理學(xué)特征信息。以SLAMF1 mRNA表達(dá)值的中位值為界限，將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。分析腎透明細(xì)胞癌患者中SLAMF1 mRNA表達(dá)與生存預(yù)后的關(guān)系采用Kaplan-Meier生存曲線和Log-rank生存曲線檢驗法。利用正常組織(72例)和腎透明細(xì)胞癌組織(533例)的SLAMF1 mRNA表達(dá)值做受試者工作特征曲線，分析該基因在診斷腎透明細(xì)胞癌中的靈敏度和特異度。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析統(tǒng)計學(xué)分析用SPSS 20.0。非配對樣本組間比較用t檢驗或秩和檢驗，配對樣本組間比較用配對t檢驗。SLAMF1 mRNA表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性分析用卡方檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1SLAMF1mRNA在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)Yusenko Renal隊列(正常組織5例，癌癥組織26例)中SLAMF1 mRNA顯著高表達(dá)于腎透明細(xì)胞癌(P<0.05，圖1A)。Beroukhim Renal隊列(正常組織11例，癌癥組織59例)中SLAMF1 mRNA顯著高表達(dá)于腎透明細(xì)胞癌(P<0.01,圖1B)。Jones Renal隊列(正常組織23例，癌癥組織23例)中SLAMF1 mRNA顯著高表達(dá)于腎透明細(xì)胞癌(P<0.05，圖1C)。在TCGA數(shù)據(jù)庫(配對的正常組織與癌癥組織72例)中也發(fā)現(xiàn)，SLAMF1 mRNA的log2(norm_count+1)表達(dá)值在癌癥組織中顯著上調(diào)(P<0.000 1，圖1D)。

圖1SLAMF1mRNA在腎透明細(xì)胞癌與正常組織中的表達(dá)差異

A:Yusenko Renal隊列；B：Beroukhim Renal隊列；C：Jones Renal隊列；D：在TCGA數(shù)據(jù)庫。

2.2SLAMF1mRNA表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌患者臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性SLAMF1 mRNA表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，SLAMF1 mRNA表達(dá)在不同的性別(P<0.001)、Grade分級(P<0.001)、T分期(P<0.01)、M分期(P<0.01)和臨床分期(P<0.001)中均有顯著性差異，但與年齡(P>0.05)、N分期(P>0.05)無顯著差異(表1)。

2.3SLAMF1mRNA表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌患者的生存分析使用Kaplan-Meier生存曲線對524例患者SLAMF1表達(dá)水平與其生存時間的關(guān)系進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，SLAMF1 mRNA的表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌患者總生存時間顯著相關(guān)，該基因mRNA高表達(dá)組患者的總生存時間顯著短于低表達(dá)組(P<0.01，圖2A)。進(jìn)一步以臨床分期和Grade分級分別做亞組分析。我們發(fā)現(xiàn)，在臨床Ⅰ+Ⅱ期中，SLAMF1高表達(dá)組患者的總生存時間短于低表達(dá)組(P<0.05，圖2B)，而在Ⅲ+Ⅳ期中，SLAMF1的表達(dá)與總生存時間無關(guān)(P>0.05，圖2C)。在G1+2期中SLAMF1的表達(dá)與生存時間無關(guān)(P>0.05，圖2D)，在G3+4期中SLAMF1的表達(dá)與生存時間無關(guān)(P>0.05，圖2E)。

表1SLAMF1基因表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌患者臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性

[例(%)]

A：全部腎透明細(xì)胞癌患者；B：臨床Ⅰ和Ⅱ期患者；C：臨床Ⅲ和Ⅳ期患者；D：Grade 1級和2級患者；E：Grade 3級和4級患者。

圖2腎透明細(xì)胞癌患者及其分組SLAMF1mRNA表達(dá)的Kaplan-Meier生存分析曲線

2.4SLAMF1mRNA表達(dá)在腎透明細(xì)胞癌中的診斷價值用ROC曲線分析SLAMF1 mRNA表達(dá)在腎透明細(xì)胞癌中的診斷價值。結(jié)果顯示，SLAMF1 mRNA表達(dá)對腎透明細(xì)胞癌的診斷效果較好。受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)下面積AUC=0.809，95%CI=0.756～0.862(圖3)。

圖3SLAMF1mRNA表達(dá)的ROC曲線

3 討 論

SLAMF1基因含7個外顯子，定位于人1q22[14]。COCKS等[2]最早發(fā)現(xiàn)該基因編碼T細(xì)胞表面受體CD150蛋白。近期有研究發(fā)現(xiàn)，免疫組織化學(xué)顯示77.6%的人CNS腫瘤中高表達(dá)CD150蛋白[12]。在與原發(fā)性縱隔大B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生相關(guān)的胸腺記憶B細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)SLAMF1基因表達(dá)上調(diào)[10]。這提示SLAMF1可能是一個潛在的癌基因且該基因在腎透明細(xì)胞癌臨床樣本中的相關(guān)研究目前未見報道。

分析oncomine和TCGA數(shù)據(jù)庫的結(jié)果顯示，與腎透明細(xì)胞癌中基因組整體表達(dá)水平相比，SLAMF1表達(dá)呈低水平。但相比于正常組織，SLAMF1高表達(dá)于腎透明細(xì)胞癌組織，可能是一個癌基因。本研究發(fā)現(xiàn)SLAMF1 mRNA表達(dá)與患者的性別、Grade分級、T分期、M分期和臨床分期均有顯著差異，SLAMF1 mRNA高表達(dá)與癌癥的發(fā)生及浸潤轉(zhuǎn)移相關(guān)。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示SLAMF1 mRNA高表達(dá)的患者的總生存時間短。ROC曲線分析顯示SLAMF1 mRNA的表達(dá)可用于診斷腎透明細(xì)胞癌，且效果較好。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，SLAMF1基因編碼的CD150受體可以在正常和惡性B細(xì)胞中觸發(fā)磷酯酸肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K)介導(dǎo)的Akt信號通路；并且在HL(hodgkin’s lymphoma B cells)細(xì)胞中CD150可介導(dǎo)Akt下游靶標(biāo)GSK-3β和FoxO1的磷酸化來躲避細(xì)胞凋亡，維持細(xì)胞存活[11]。這提示SLAMF1基因有可能通過上述信號通路發(fā)揮促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移的作用。

綜上，本研究通過挖掘公共數(shù)據(jù)庫獲得腎透明細(xì)胞癌相關(guān)信息并進(jìn)行分析。結(jié)果表明SLAMF1 mRNA高表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。除此之外，SLAMF1 mRNA表達(dá)水平可作為候選的生物標(biāo)志物用于診斷腎透明細(xì)胞癌并評價患者的生存預(yù)后。本研究收集的臨床資料來自于公共數(shù)據(jù)庫，數(shù)據(jù)客觀完整可靠，納入樣本量足夠大，因此研究結(jié)果具有一定的臨床意義。然而本研究局限于數(shù)據(jù)庫挖掘分析，至于SLAMF1能否作為診斷腎透明細(xì)胞癌并評價其預(yù)后的生物標(biāo)志物還需要實驗驗證，在后續(xù)研究中有必要深入探討其在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的功能及作用機制。

參考文獻(xiàn)：

[1] CANNONS JL，TANGYE SG，SCHWARTZBERG PL.SLAM family receptors and SAP adaptors in immunity[J].Annu Rev Immunol，2011，29：665-705.

[2] COCKS BG，CHANG CC，CARBALLIDO JM，et al.A novel receptor involved in T-cell activation[J].Nature，1995，376(6537)：260-263.

[3] SIDORENKO SP，CLARK EA.Characterization of a cell surface glycoprotein IPO-3，expressed on activated human B and T lymphocytes[J].J Immunol，1993，151(9)：4614-4624.

[4] KRUSE M，MEINL E，HENNING G，et al.Signaling lymphocytic activation molecule is expressed on mature CD83+ dendritic cells and is up-regulated by IL-1 beta[J].J Immunol，2001，167(4)：1989-1995.

[5] MINAGAWA H，TANAKA K，ONO N，et al.Induction of the measles virus receptor SLAM(CD150) on monocytes[J].J Gen Virol，2001，82(Pt 12)：2913-2917.

[6] VEILLETTE A，DONG Z，LATOUR S.Consequence of the SLAM-SAP signaling pathway in innate-like and conventional lymphocytes[J].Immunity，2007，27(5)：698-710.

[7] TATSUO H，ONO N，TANAKA K，et al.SLAM(CDw150) is a cellular receptor for measles virus[J].Nature，2000，406(6798)：893-897.

[8] TATSUO H，ONO N，YANAGI Y.Morbilliviruses use signaling lymphocyte activation molecules(CD150) as cellular receptors[J].J Virol，2001，75(13)：5842-5850.

[9] BOLOGNA C，BUONINCONTRI R，SERRA S，et al.slamf1 regulation of chemotaxis and autophagy determines CLL patient response[J].J Clin Invest，2016，126(1)：181-194.

[10] BERGKVIST KS，NORGAARD MA，BOGSTED M，et al.Characterization of memory B cells from thymus and its impact for DLBCL classification[J].Exp Hematol，2016，44(10)：982-990.

[11] YURCHENKO M，SHLAPATSKA LM，ROMANETS OL，et al.CD150-mediated Akt signalling pathway in normal and malignant B cells[J].Exp Oncol，2011，33(1)：9-18.

[12] ROMANETS KORBUT O，NAJAKSHIN AM，YURCHENKO M，et al.Expression of CD150 in tumors of the central nervous system：identification of a novel isoform[J].PLoS One，2015，10(2)：e118302.

[13] LIN W，LIN HD，GUO XY，et al.Allelic expression imbalance polymorphisms in susceptibility chromosome regions and the risk and survival of breast cancer[J].Mol Carcinog，2017，56(1)：300-311.

[14] WANG N，MORRA M，WU C，et al.CD150 is a member of a family of genes that encode glycoproteins on the surface of hematopoietic cells[J].Immunogenetics，2001，53(5)：382-394.