梁明森

【摘 要】目的：探究在肺癌診斷中P63、TTF-1及CD56聯(lián)合相關免疫組化的價值觀察。方法：選取本院病理科2016年1月到2018年1月肺癌標本124例，其中小細胞肺癌34例、腺癌47例、鱗狀細胞癌43例。對其病理標本進行免疫組化染色，所選抗體為P63、CK5/6、CK18、CEA、TTF-1。結果：P63聯(lián)合CK5/6診斷鱗細胞癌靈敏度明顯優(yōu)于單種抗體，；CK18、CEA、TTF-1診斷腺癌方面的靈敏度（91.49%）優(yōu)于單用抗體的靈敏度（21.28%、55.32%、44.68%），但CK18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%）。結論：在對肺癌診斷以及鑒別肺癌組織學分型中，P63、CK5/6、CK18、CEA、TTF-1具有重要臨床意義。

【關鍵詞】免疫組化；肺癌；非小細胞肺癌；小細胞肺癌

【中圖分類號】R734.2 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2018）04-0-01

肺癌作為全球發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤之一，具有治療預后效果差、侵襲性強等特點。肺癌的不同組織類型對治療存在非常重要的指導作用，其中非小細胞肺癌的臨床診斷需要準確的病理分型，而病理診斷手法并不完全可靠，雖然70%肺癌診斷依靠小組織活檢或細胞進行評估和分級，但對于分化差的腫瘤分型較為困難，因此需要借助免疫組化指標方法。近年來，國內外相關研究發(fā)現(xiàn)[1]，甲狀腺轉錄因子-1（TTF-1）、P63在鑒別腺癌和鱗癌中應用較好。臨床上對非小細胞肺癌和小細胞肺癌的治療方案和預后截然不同，因此對鑒別準斷小細胞肺癌也十分重要，神經細胞黏附分子（CD560）對鑒別小細胞和非小細胞肺癌是一個較好的免疫指標。本研究現(xiàn)選取P63、TTF-1、CK5/6、CD56等相關免疫組化在肺癌診斷中的價值進行觀察分析，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院病理科2016年1月到2018年1月肺癌標本124例，其中小細胞肺癌34例、腺癌47例、鱗狀細胞癌43例。所有患者均經肺穿刺、纖維支氣管鏡或手術病理標本診斷為肺癌?；颊吣挲g在18～65歲，均具有完整的臨床病歷資料。

1.2 方法

1.2.1 材料

準備即用型鼠抗人P63、T TF-1、CK5/6、CK18、CEA、CD56單克隆抗體，生物素標記的兔抗鼠IgG二抗、羊抗鼠二抗，辣根過氧化物酶標記鏈霉卵白素，鏈霉菌抗生素-過氧化物酶溶液，DAB顯色液以及B-P試劑盒。上述均購于福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，其他實驗室應用機器均購于上海徠卡儀器有限公司。

1.2.2 方法

用10%中性福爾馬林固定所有組織標本后脫水，再經石蠟包埋后連續(xù)切5～6張片，保證每張切片厚度在5μm。準備一張HE染色，核實組織病理學診斷，其余用免疫組織化學染色。免疫組化過程：將準備好的標本浸泡在新鮮配制的3%H2O2后，阻斷標本中內源性過氧化物酶10分鐘。用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）漂洗標本兩次，每次3分鐘。將山羊血清溫室封閉30分鐘后，進而消除非特異性染色，并滴加一抗，過夜。采用PBS緩沖液漂洗兩次，并滴加對應的生物素化IgG二抗，放置在37℃環(huán)境下30分鐘。用PBS緩沖液漂洗后采用鏈霉素生物素化HRP復合物，放置在37℃環(huán)境下30分鐘。用PBS緩沖液漂洗后采用DAB顯色液室溫顯色，并在顯微鏡下控制顯色，小流水沖洗20分鐘后終止顯色。梯度乙醇脫水后晾干。

1.3 觀察指標 ①P63和TTF-1為細胞核呈棕黃色顆粒，當細胞核內出現(xiàn)棕黃色為陽性信號；②CK5/6、CEA、CK18為細胞漿呈棕黃色顆粒，當細胞漿內出現(xiàn)棕黃色為陽性信號；③CD56為細胞膜呈棕黃色顆粒，當細胞膜內出現(xiàn)棕黃色為陽性信號。上述結果均需經兩位以上的病理主治醫(yī)師進行判斷。

1.4 統(tǒng)計學方法

本研究所有數據均采取SPSS19.0軟件計算，其中應用“X?”、“t”對其檢驗，采用“%”為計數資料、“”為計量資料均數標準差。如P值<0.05，證明對比具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各個細胞癌標本中在免疫組化中的陽性例數，詳見表1

2.2 各免疫指標在診斷各項細胞癌方面的靈敏度顯示，P63聯(lián)合CK5/6診斷鱗細胞癌靈敏度明顯優(yōu)于單種抗體，；CK18、CEA、TTF-1診斷腺癌方面的靈敏度（91.49%）優(yōu)于單用抗體的靈敏度（21.28%、55.32%、44.68%），但CK18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%），詳見表2、3、4。

3 討論

近年來，國內外研究表明，多個抗體組合腳單種抗體在肺癌組織學分類診斷中的臨床應用價值高。因此，如何尋找出一種最優(yōu)的抗體組合應用在肺癌分型診斷中至關重要。

TTF-1作為一種甲狀腺特異性增強子結合蛋白在甲狀腺和肺發(fā)育過程中表達組織特異性轉錄因子。由于該抗體具有較強的組織特異性，因此可鑒別原發(fā)性及轉移性肺癌的標志物，尤其是對轉移性腺癌是否為肺源性診斷較為明顯。本研究TTF-1在診斷肺腺癌方面靈敏度為44.68%，與相關文獻報道一致[2，3]。P63定位在人類染色體，廣泛在人和鼠組織中表達，其中對宮頸、泌尿道等具有鱗狀上皮分化潛在能力的基底細胞和旁基層細胞中具有選擇性的表達。研究表明，P63對肺鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展過程中作用明顯。本研究中發(fā)現(xiàn)P63在診斷肺鱗狀細胞癌方面靈敏度為79.07%，與相關文獻報道一致[4]。CD56作為一種免疫球蛋白，是神經細泡黏附分子的CD分子。定位在細胞膜，尤其是神經內分泌細胞。本研究CD56在診斷小細胞癌方面靈敏度為100%，且該抗體結合HE形態(tài)可有效鑒別小細胞癌與非小細胞癌。癌胚抗原（CEA）作為一種廣譜腫瘤標志物，該抗體一直作為腸道系統(tǒng)腫瘤標志物。近年來，有研究表明，CEA對肺癌的分期和分型存在臨床意義。此外，也有研究表明細胞角蛋白18（CK18）在診斷肺腺癌以及細胞角蛋白5/6在診斷肺鱗癌中均具有一定意義[5，6]。本研究選擇抗體時將CEA、CK18聯(lián)合TTF-1診斷肺腺癌，將CK5/6聯(lián)合P63診斷肺鱗狀細胞癌。結果顯示，癌胚抗原（CEA）和細胞角蛋白18（CK18）在診斷肺腺癌方面存在一定意義（91.49%），但細胞角蛋白18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%）。P63聯(lián)合CK5/6診斷鱗細胞癌靈敏度明顯優(yōu)于單種抗體，故在鑒別診斷肺鱗細胞癌時可選擇聯(lián)合應用P63和CK5/6。CK18、CEA、TTF-1診斷腺癌方面的靈敏度（91.49%）優(yōu)于單用抗體的靈敏度（21.28%、55.32%、44.68%），故在鑒別診斷肺腺癌時可選擇聯(lián)合應用CK18、CEA、TTF-1，但CK18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%），因此在鑒別肺腺癌時可聯(lián)合用CEA和TTF-1。

綜上所述，在對肺癌診斷以及鑒別肺癌組織學分型中，P63、CK5/6、CK18、CEA、TTF-1具有重要臨床意義。

參考文獻：

沈湘萍，陳艷，張小偉.細胞塊免疫組化在惡性小細胞腫瘤胸腔轉移中的臨床病理分析[J].現(xiàn)代實用醫(yī)學，2014，26（06）：686-687+785.

段楚驍，付圣靈，付向寧.CK5/6、P63、TTF-1和CK8/18在NSCLC組織中的表達及意義[J].華中科技大學學報（醫(yī)學版），2015，44（02）：147-151+175.

章文華，項晶晶，孫麗娟，李丹丹，周虹.肺腺癌中TTF-1與Napsin A的病理診斷價值比較[J].臨床與實驗病理學雜志，2016，32（09）：1028-1032.

徐曉艷，杜華，寶魯日，李時榮，李秀霞，師永紅.非小細胞肺癌活檢標本中CK7、TTF-1、NapsinA、CK5/6及p63的表達及其意義[J].診斷病理學雜志，2015，22（11）：688-691.

余何，李鐳，劉丹，李為民.TTF-1、NapsinA、P63和CK5/6在肺癌組織的表達與分型診斷的價值[J].四川大學學報（醫(yī)學版），2017，48（03）：336-341.

劉瑞青，李醒亞，曹會存，李輝，曹廣劭，劉建文，吳方明，劉玉巖，劉健，陳利娟.TTF-1和SPA表達對早期肺腺癌術后復發(fā)預測及預后的判斷價值[J].實用癌癥雜志，2017，32（07）：1048-1051+1068.