徐建強(qiáng)，張呂醉，唐慧驥，許道超，范一霖，李文亮

(1.河南科技大學(xué)林學(xué)院，河南 洛陽 471003； 2.洛陽出入境檢驗檢疫局，河南 洛陽 471003； 3.河南出入境檢驗檢疫局，河南 鄭州 450003)

牡丹PaeoniasuffruticosaAndr.在我國栽培歷史悠久，栽培規(guī)模巨大，形成了以中原、西北、江南、西南為主要分布區(qū)域的四大牡丹品種群[1]。在河南洛陽，牡丹種植面積700 hm2，分布于70多處種植基地(園區(qū))[2]。洛陽牡丹除滿足國內(nèi)市場外，還出口到法國、日本、美國、意大利等國家，取得了良好的經(jīng)濟(jì)效益[2]。

牡丹生長過程中會受到多種病原物的侵染，以葉部病害發(fā)生較為普遍，且病斑常常連片，病害種類不易區(qū)分[3]；而根莖部病害的發(fā)生則可直接導(dǎo)致牡丹整株枯死，對牡丹產(chǎn)業(yè)的發(fā)展危害更大[4]。牡丹病害輕則減少來年開花數(shù)量，降低開花質(zhì)量，重則造成大量植株枯死，對旅游產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和牡丹出口造成巨大阻礙[5]。

國內(nèi)外關(guān)于牡丹病害的研究總體有限：國內(nèi)主要集中在幾種病害上，缺乏系統(tǒng)的研究與總結(jié)[5]；國外僅限于對牡丹的抗病育種、生物學(xué)特性等方面，對牡丹病害的研究鮮有報道[6]。本文在調(diào)查洛陽市當(dāng)前牡丹病害發(fā)生危害的基礎(chǔ)上，根據(jù)各病害的癥狀特點，編制了牡丹葉部及根莖部真菌病害的檢索表，為生產(chǎn)及植物檢疫部門快速、準(zhǔn)確地診斷病害提供參考。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查地點 洛陽市6處主要牡丹種植園，其中：西苑公園、王城公園、牡丹公園3處建園時間久遠(yuǎn)，牡丹栽培歷史達(dá)60年之久，占地面積分別為1 hm2、1.33 hm2及0.57 hm2，分別有牡丹品種200、320、200個以上；國際牡丹園，面積25.33 hm2，栽植國內(nèi)牡丹品種300多個，日本、法國、美國等牡丹品種100多個，以及中國芍藥品種300多個，該園多次進(jìn)行航天牡丹育種且效果顯著；中國國花園建于2001年，占地103.2 hm2，1 000多個牡丹品種；隋唐城遺址植物園千姿牡丹園，始建于2005年，占地23.33 hm2，1258個品種。

1.2 調(diào)查方法 于2014、2015、2016每年的7月份，每周六到各牡丹園隨機(jī)調(diào)查牡丹病害；走訪各牡丹園生產(chǎn)技術(shù)人員，了解病害類型、發(fā)生危害程度、發(fā)病時間等。對于葉部，觀察葉片有無變色、壞死、畸形等病狀；對于根莖部病害，觀察病害對植株的影響，如萎蔫或畸形，檢查發(fā)病部位，記載病狀(如斑點、腐爛、枯枝)、病征(包括菌絲體、菌核、小黑點等)。將癥狀明顯的病害標(biāo)本帶回實驗室鏡檢。

1.3 病害診斷方法 對于發(fā)病部位癥狀明顯的，直接鏡檢；癥狀不明顯的先保濕培養(yǎng)，待產(chǎn)生典型癥狀后，再行鏡檢。按照發(fā)病癥狀類型，如是否產(chǎn)生霉?fàn)钗?、粉狀物、小黑點等，采用挑、刮或切等方法，在顯微鏡下觀察病菌的菌絲及分生孢子形態(tài)，根據(jù)孢子形態(tài)對病菌開展鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 牡丹葉部病害

2.1.1 牡丹葉霉病Cladosporiumpaeoniae該病目前在洛陽市牡丹種植園發(fā)生最為普遍，危害也最為嚴(yán)重，發(fā)病率可達(dá)到90%以上，在單個葉片上的發(fā)病面積可達(dá)到60%。該病自5月份前后開始發(fā)生，8、9月份達(dá)到發(fā)病高峰；某些品種如海黃，染上此病，可導(dǎo)致葉片大面積枯死，遠(yuǎn)望如同葉片枯焦一般。該病原菌也可危害芍藥，在芍藥上形成紅色的病斑，故稱為芍藥紅斑病[5]；而在牡丹上，病斑紅色并不明顯，稱為牡丹葉霉病。

病斑圓形或近圓形，多在葉片中間發(fā)病，紅褐色至黑褐色，病部葉片背面為淺褐色，空氣濕度較大時，病斑正面和背面均出現(xiàn)墨綠色霉?fàn)钗?，為病原菌的分生孢子和分生孢子梗；?yán)重時，多個病斑聯(lián)合引起葉片焦枯，提早落葉，常在發(fā)病后期穿孔。

芍藥和牡丹上的病原菌相同，均為牡丹枝孢菌(C.paeoniae)[3]：分生孢子梗褐色至深褐色，線性或彎曲狀，單生或簇生，其一側(cè)有節(jié)狀膨大物；分生孢子淡褐色，卵形或紡錘形，單胞或多胞，單生或鏈狀著生。

2.1.2 牡丹黑斑病Alternariaspp. 為害較為嚴(yán)重，初期在葉片上形成圓形小病斑，灰黑色或黑褐色，中央顏色稍淺，后逐漸擴(kuò)大為圓形或不規(guī)則形病斑，黑褐色，上著生有墨黑色霉?fàn)钗?，手摸病斑有粗糙感，病斑常脫落造成穿孔?月份為發(fā)病盛期，重病植株在后期葉片全部枯死，脫落。

病原菌為鏈格孢屬Alternaria的菌種[3]：分生孢子梗淡褐色至褐色，由菌絲上生出，或生于子座上，分枝或不分枝，與菌絲區(qū)別不明顯；頂生分生孢子淡褐色至深褐色，卵圓形或倒棍棒狀，有縱橫隔膜，常鏈狀著生；表面光滑或有疣，頂端常具喙?fàn)罴?xì)胞，有長喙與短喙之分。

2.1.3 牡丹腔孢葉斑病Hainesialythri該病可危害枝條和葉片：在葉片上主要形成圓形或近圓形褐色病斑，稍凹陷，后期病斑上可產(chǎn)生輪狀排列的黑褐色的瘤狀小點；危害枝條時，在樹皮上出現(xiàn)灰褐色病斑，組織松軟，稍隆起，縱裂，在樹皮下可產(chǎn)生褐色的瘤狀小點，即病菌的分生孢子座。病原菌為牡丹絨邊膠盤孢Hainesialythri[12]。目前，該病在河南洛陽牡丹種植園中發(fā)生普遍，葉片發(fā)病率在20%～48%，危害日益加重。

2.1.4 牡丹葉部真菌病害檢索表 在對牡丹葉部各真菌病害的癥狀進(jìn)行仔細(xì)分析的基礎(chǔ)上，參照相關(guān)文獻(xiàn)[3]，編制了牡丹葉部真菌病害的檢索表。

牡丹葉部真菌病害檢索表

其它牡丹葉部真菌病害還包括白粉病Erysiphepaeoniae、黃斑病Phyllostictacommonsii、褐斑病Cercosporapaeoniae、灰霉病Botrytispaeoniae、輪紋斑病Pestalotiopsispaeoniae以及葉斑病Seimatosporiumsp.[3]。由于這些病害在牡丹園發(fā)生不普遍，危害較輕，不做詳述。

2.1.5 牡丹病毒病 在調(diào)查過程中，偶爾能發(fā)現(xiàn)受病毒感染的牡丹植株，其癥狀主要表現(xiàn)為黃色花葉并伴有少量的花藥敗育。

2.2 牡丹根莖部病害 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，洛陽市牡丹根部病害主要包括根腐病Fusariumsolani、白絹病Sclerotiumrolfsii、立枯病Rhizoctaoniasolani等3種，其中以牡丹根腐病發(fā)病最重[4]；牡丹莖部真菌病害6種，分別為葉霉病C.paeoniae、腔孢葉斑病H.lythri、灰霉病B.paeoniae、輪紋斑病P.paeoniae、潰瘍病Botryosphaeriasp.和牡丹枝枯病，其中以腔孢葉斑病和潰瘍病發(fā)病最重[4]。葉霉病、灰霉病、腔孢葉斑病、輪紋斑病除危害葉片外，還可危害莖桿。

2.2.1 牡丹根腐病F.solani該病是為害牡丹根部較嚴(yán)重的病害之一。植株染病后，地上部分長勢衰弱，葉片發(fā)黃，嚴(yán)重時葉片和枝條枯死，甚至整株枯死。根頸部、主根、支根和須根均可發(fā)病，其中老根發(fā)病最為嚴(yán)重。根部染病初期，在根皮上產(chǎn)生不規(guī)則形黑斑，后隨著病斑逐漸擴(kuò)展，由木質(zhì)部擴(kuò)展至髓部，根部慢慢變黑腐爛，肉質(zhì)根剝落，造成植株失水萎蔫枯死。發(fā)病較重的地塊能造成大面積植株死亡[4]。

2.2.2 牡丹潰瘍病Botryosphaeriasp. 該病發(fā)病嚴(yán)重，主要危害莖部，亦能侵染葉片。發(fā)病初期出現(xiàn)褐色小斑點，后逐漸擴(kuò)展成橢圓形、梭形或不規(guī)則形，紫褐色或黑色病斑，中間灰白色，凹陷成潰瘍狀，濕度高時病斑邊緣形成不規(guī)則形水漬狀病斑，呈水泡狀，后期在病部皮層下往往形成許多針狀小黑點，埋生或半埋生，為病原菌的分生孢子器或子囊殼，嚴(yán)重者病斑表皮開裂甚至枝條枯死。輕度發(fā)病的植株抽枝較慢，花蕾較小，開花遲緩；重度發(fā)病的植株鱗芽萎縮，不能抽枝或抽枝后不能開花，萎蔫青枯，造成單株枝條稀疏、甚至植株枯死[4]。

2.2.3 牡丹根莖部真菌病害檢索表 其它根莖部病害發(fā)生較少，危害較輕，不再詳述。在對牡丹根莖部各真菌病害的癥狀進(jìn)行仔細(xì)分析的基礎(chǔ)上，參照相關(guān)文獻(xiàn)[4]，編制了牡丹根莖部真菌病害的檢索表。

牡丹根莖部真菌病害檢索表

2.2.4 牡丹根結(jié)線蟲病 在調(diào)查過程中，發(fā)現(xiàn)有些牡丹植株地上部分枯死，拔出后可以明顯看到牡丹根部側(cè)根根系癭瘤累累、根結(jié)連結(jié)成串，后期癭瘤龜裂、腐爛。實驗室解剖根結(jié)，在體式顯微鏡下觀察，可以看到線蟲的雌蟲。由于線蟲病發(fā)生隱秘，僅通過觀察牡丹地上部分，不易分析牡丹根結(jié)線蟲病的發(fā)生危害程度。

3 結(jié)論與討論

本文依據(jù)病害癥狀鑒定出牡丹葉部真菌病害9種，偶爾能發(fā)現(xiàn)受病毒感染的牡丹葉片；根部真菌病害3種，線蟲病害1種；莖部真菌病害6種。目前，葉霉病、黑斑病、腔孢葉斑病為害葉片較重；根腐病危害根部較重；腔孢葉斑病和潰瘍病危害莖部較重。依據(jù)各病害的典型癥狀，編制了牡丹葉部、根莖部真菌病害的檢索表，為病害的診斷提供參考。

牡丹性較耐寒，不耐濕熱[1]。牡丹7月份后發(fā)生的葉片枯死是侵染性病害和非侵染性病害共同作用的結(jié)果：夏季7～8月份溫度高，葉片發(fā)生枯焦，導(dǎo)致牡丹生長勢衰弱，從而利于弱寄生真菌侵染，引起病害發(fā)生，如鏈格孢菌(可引起牡丹黑斑病)、斑點葉點霉(可引起牡丹黃斑病)；而侵染性病害的暴發(fā)流行則可使發(fā)病面積擴(kuò)大，進(jìn)一步降低牡丹生長勢，導(dǎo)致牡丹更易受到不良環(huán)境條件的影響(高溫)。許多牡丹種植園通過搭遮陽棚，不但能延長來年牡丹花期，且能降低7～8月牡丹葉片溫度，防止葉片枯焦，有利于牡丹生長勢的維持，降低病菌的侵染機(jī)率[13]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，生長在遮陽棚或大樹樹蔭下的牡丹，長勢普遍比裸露的牡丹長勢好。

牡丹葉部病害多發(fā)生在夏秋季，除了搭遮陽棚降低牡丹園溫度外，秋季清除牡丹園的病株殘體、做好田園衛(wèi)生，對病害防治也有非常好的效果；但在病害暴發(fā)流行時藥劑防治是必不可少的手段[14]；由于葉部病害常?；旌习l(fā)生，對牡丹葉部病害宜采用通過藥劑復(fù)配來達(dá)到綜合防控的目的。而對于牡丹根莖部病害，由于其易導(dǎo)致整株枯死，故病害發(fā)生前的早期診斷非常關(guān)鍵：一旦發(fā)現(xiàn)病害后，及早采用灌根或涂抹的方法，會對根莖部病害有一定的防控效果。

對牡丹病害的診斷是防治及出口檢疫時非常重要的一環(huán)。本文編制的檢索表可為牡丹病害診斷提供參考。但生產(chǎn)中，牡丹病害在發(fā)病前期、中期及后期的癥狀表現(xiàn)并不相同，且多數(shù)時候多種病害混合發(fā)生，病征往往又不太典型，這均給牡丹病害診斷帶來很大困難。癥狀診斷是病害識別的第一步，但為了獲得確切的病原菌信息，有必要借助于分子生物學(xué)、血清學(xué)等技術(shù)對病害做進(jìn)一步確診。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國牡丹全書編撰委員會.中國牡丹全書(上)[M].北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社,2002:269-283.

[2] 鄧國取.洛陽牡丹產(chǎn)業(yè)化發(fā)展現(xiàn)狀 [J].河南科技大學(xué)學(xué)報,2003,21(1):87-89.

[3] 段亞冰.牡丹葉斑病病原真菌鑒定及生物學(xué)特征研究 [D].洛陽:河南科技大學(xué),2009.

[4] 趙丹.牡丹根莖部真菌病害及病原鑒定 [D].洛陽:河南科技大學(xué),2012.

[5] 吳玉柱,季延平,劉慇,等.牡丹紅斑病發(fā)病規(guī)律的觀察[J].中國森林病蟲,2004,23(5):6-10.

[6] 張運興,李衛(wèi)國.我國牡丹研究核心期刊載文分析[J].北方園藝,2014,38(19):213-215.

[7] 李嘉玨.中國牡丹與芍藥[M].北京:中國林業(yè)出版社,1999:181-199.

[8] 戴芳瀾.中國真菌總匯[M].北京:科學(xué)出版社,1979:818-1102.

[9] 魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1979:405-649.

[10]陸家云.植物病原真菌學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2001:332-533.

[11]陸家云.植物病害診斷(第二版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1997:118-227.

[12]趙新蘭,李寧,劉愛新,等.牡丹腔孢葉斑病及其病原物的共無性型 [J].菌物學(xué)報,2010,29(4):475-480.

[13]周曙光,孔祥生,張妙霞,等.遮光對牡丹光合及其他生理生化特性的影響 [J].林業(yè)科學(xué),2010,46(2):56-60.

[14]徐建強(qiáng),楊改鳳,田娟,等.三種殺菌劑對牡丹紅斑病病菌分生孢子形成和萌發(fā)的影響 [J].植物保護(hù)學(xué)報,2016,43(5):850-857.