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(1.上海欣灝珍禽育種有限公司，上海 奉賢 201403； 2.上海市奉賢區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，上海 奉賢 201400)

0 引言

雞傳染性法氏囊病(IBD)是一種以法氏囊發(fā)炎、壞死、萎縮和囊內(nèi)淋巴細胞嚴重受損為特征的急性、接觸性傳染病，其病原體為傳染性法氏囊病毒(IBDV)。法氏囊是禽類特有的免疫器官，又稱腔上囊，其在70～80日齡時的體積最大，以后逐漸消退，至性成熟時完全消失，因此IBD主要發(fā)生于雞的早期生長階段。

IBD是目前養(yǎng)禽業(yè)中最重要的疫病之一，其對所有品種的雞均可感染，且發(fā)病率可達100%，但死亡率較低，為5%～15%；由于IBD可引起雞的法氏囊炎癥而造成機體免疫抑制，使病雞馬立克氏病和新城疫等疫苗免疫的反應(yīng)能力下降以及對球蟲病和大腸桿菌等細菌性疾病更易感，對雞群造成更大損失。

對IBD的預(yù)防，目前各山雞養(yǎng)殖場主要是采用蛋種雞的免疫程序來對種山雞實施免疫，但在生產(chǎn)實踐中常會出現(xiàn)免疫失敗的現(xiàn)象。為此，筆者選擇了一家大型山雞育種公司的一批種山雞(雛苗)，開展了一輪山雞全周期(一個世代、56周)IBD疫苗免疫和課題效價評估的的試驗，并根據(jù)試驗結(jié)果提出了山雞專用的免疫程序?，F(xiàn)將試驗情況匯總?cè)缦隆?/p>

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗山雞

選擇某大型山雞養(yǎng)殖場2016年7月2日出雛的祖代1日齡種山雞雛苗1萬羽；該批雛苗的入孵種蛋為43周齡健康種山雞所產(chǎn)；孵化過程嚴格按照種蛋孵化流程操作。記錄顯示，該批入孵種蛋的親本母山雞在整個飼養(yǎng)期已分別于19日齡和26日齡采用IBD活疫苗(B87株)進行了2次飲水免疫，并于125日齡時實施了IBD滅活疫苗的免疫。

1.1.2 免疫疫苗

(1)IBD滅活疫苗:IBD基因工程亞單位疫苗；生產(chǎn)商：青島易幫生物工程有限公司；批號：160041405；有效期：2017.06.30。

(2)IBD活疫苗:IBD活疫苗(B87株)；生產(chǎn)商：青島易幫生物工程有限公司；批號：160161101；有效期：2018.05.19。

1.1.3 檢測試劑

IBD病毒抗體檢測試劑盒；供應(yīng)商：北京愛得士元亨生物科技有限公司；批號：WM083。

1.2 方法

1.2.1 試驗山雞飼養(yǎng)

本試驗對試驗山雞的整個飼養(yǎng)期進行IBD抗體的全程跟蹤監(jiān)測。該批試驗山雞的全飼養(yǎng)期為56周，分為育雛期、保育期、育雛期和種用期4個階段。其中：0～35日齡為育雛期，采用4層疊層式立體育雛籠飼養(yǎng)，育雛舍采用智能內(nèi)環(huán)境自動控制系統(tǒng)；36～55日齡為保育期，采用內(nèi)環(huán)境水供暖自動加熱系統(tǒng)和雙層階梯式保育籠飼養(yǎng)。

育成期分為育成前期和育成后期2個階段，其中： 56～120日齡為育成前期，采用暗光照地面平養(yǎng)方式飼養(yǎng)；121日齡～開產(chǎn)(190～195日齡)為育成后期，又稱為產(chǎn)蛋準備期；采用3層疊層單雞單籠式種山雞籠飼養(yǎng)。試驗山雞從開產(chǎn)～56周齡淘汰為種用期，采用3層疊層單雞單籠式種山雞籠飼養(yǎng)。

1.2.2 試驗山雞免疫

對試驗山雞全周期實施以下IBD疫苗的免疫，詳見表1。

表1 試驗山雞IBD免疫程序表

1.2.3 采樣與樣品處理

(1)親本母山雞采樣:在留取種蛋(43周齡)時隨機采取20羽試驗山雞親本母山雞的血液樣品。

(2)育雛期采樣:隨機抽取20羽0日齡雛山雞血液樣品；以后每隔10天隨機抽取20羽雛山雞采取血樣，共采集0日齡、10日齡、20日齡、30日齡等四個批次、80份血樣；由于雛山雞體型偏小，此期采血可取心臟采血法或直接頸動脈放血采樣。

(3)育成期及后續(xù)樣品采集:育成期60日齡時隨機采取20份血樣，以后每隔30 d在試驗山雞群中隨機采取20份血樣，共采集60日齡、90日齡、120日齡、150日齡、180日齡、210日齡、240日齡、270日齡、300日齡和330日齡等10個批次、200份血樣。

(4)樣品處理與保存:整個試驗共采集試驗山雞14個批次、280份血液樣品和43周齡親本母山雞1個批次、20份血液樣品，總數(shù)為15個批次、300份血液樣品；每個批次樣品在采集后立即分離血清，標記后冷凍保存；至全部15個批次血樣全部采集完成后集中檢測。

1.2.4 樣品檢測

(1)檢測方法：采用ELISA方法對300份試驗樣品同時進行抗體檢測。

(2)判定標準：陰、陽對照成立確定試驗有效，樣品OD值>臨界值判為陽性，否則判為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果

2.1.1 親本母山雞一個批次血樣IBD抗體ELISA檢測結(jié)果

20份43周親本母山雞血樣的IBD抗體ELISA檢測結(jié)果，IBD抗體95%合格，平均OD值0.17(臨界值0.0819、標陽OD均值0.232)。親本母山雞樣品IBD抗體檢測OD值分布情況見表2。

表2 樣品檢測結(jié)果匯總表

2.1.2 試驗山雞IBD抗體ELISA檢測結(jié)果

(1)試驗山雞各批次血樣ELISA檢測IBD免疫抗體的OD均值見表3，其全階段免疫抗體變動情況見圖1。

表3 試驗山雞IBD抗體ELISA檢測結(jié)果匯總表

圖1 試驗山雞IBD免疫抗體變動曲線圖

(2)試驗山雞IBD抗體檢測陽性合格結(jié)果:14個批次的試驗山雞血樣ELISA檢測IBD免疫抗體陽性合格率見表4，不同階段陽性合格率變化情況見圖2。

表4 試驗山雞各批次樣品IBD抗體陽性合格率結(jié)果匯總表

圖2 試驗山雞各批次樣品IBD抗體陽性合格率變化曲線圖

2.2 分析

2.2.1 親本母山雞IBD母源抗體情況

從表2可以看到，親本母山雞IBD免疫抗體總體良好，基本呈正態(tài)分布，唯一1份不合格樣品的OD值也與臨界值較接近，大部分樣品OD值界于臨界值與全部樣品均值之間，另有3份樣品的OD值超過了檢測試驗標陽OD值。

2.2.2 試驗山雞IBD抗體情況

結(jié)合試驗山雞的生長階段，分析表3可以發(fā)現(xiàn)，在全部14個批次280份檢測結(jié)果中，120日齡以前的7個批次樣品的OD值小于臨界值。其中：0日齡20份樣品的OD值為0.06，陽性合格率僅為15%，提示IBD母源抗體的遺傳性較差，親本母山雞較高的母源抗體末能較好地傳給子代，后續(xù)6個批次樣品的OD均值也基本在這一水平波動；期間雖經(jīng)IBD中等毒力弱毒疫苗于19日齡和26日齡二次飲水免疫，但IBD免疫抗體末獲提高，說明弱毒疫苗飲水免疫的效果較差；125日齡采用IBD滅活疫苗肌注免疫后，免疫抗體OD均值快速上升，150日齡批次樣品檢測結(jié)果達到0.136,180日齡批次繼續(xù)上升至0.185，但抗體上升期較短，在210日齡時已快速下降至0.122，240日齡時的OD均值已消退到0.095，接近OD臨界值，說明IBD滅活苗肌注免疫有較好的免疫作用，但抗體有效維持期僅約4個月。其后，3個批次樣品的OD均值又出現(xiàn)了一輪強勁反彈，但期間末進行任何相關(guān)的免疫措施，提示試驗雞群在此階段可能感染了IBD病毒。

2.2.3 試驗山雞IBD抗體陽性合格情況

分析表4和圖2，可見試驗雞群IBD免疫抗體陽性合格率有2個明顯的變化區(qū)間，一個是在120日齡以前的低水平區(qū)間，另一個是在150日齡后的高水平區(qū)間，而125日齡的免疫是二個區(qū)間的拐點。

在低水平區(qū)間7個批次樣品中，陽性合格率最高的僅為25%，最低為0。雖然二次飲水免疫也未見效，抗體檢測OD均值無明顯提高；在高水平區(qū)間，又可分為2個高峰階段，第一個高峰段是125日齡免疫后，抗體快速上升并維持3個月后的消退階段，此階段抗體陽性合格率最高值達到了80%；第二個高峰段是本次試驗的最后3個批次樣品，在滅活疫苗抗體逐步消退至臨界值后，可能是受到IBD野毒感染，試驗雞群的抗體陽性合格率出現(xiàn)了一波強勢反彈，高峰值達到了90%，這一變動現(xiàn)象與IBD抗體OD均值的變動情況相符。

3 討論

(1)試驗結(jié)果顯示，親本母山雞擁有較高的IBD母源抗體，但試驗山雞未能通過種蛋垂直獲得這些較高的IBD母源抗體，而且在2次使用D78中毒活疫苗進行飲水免疫后，未能有效提升試驗山雞早期免疫抗體；但青年種山雞在上籠后使用滅活苗進行肌注免疫后，可使IBD免疫抗體快速提升至較高水平，且可有效維持3個月以上，說明2次中等毒力活疫苗的飲水免疫，雖然未能有效提高早期免疫抗體水平，但仍起到了較好的基礎(chǔ)免疫作用，為滅活疫苗的免疫起到一定的協(xié)同作用。

(2)相關(guān)資料顯示，免疫接種IBD疫苗是預(yù)防本病的一種有效措施。目前在我國批準使用的疫苗主要有弱毒苗、滅活苗和進口的中等毒力活疫苗(D78)。臨床上低毒力株弱毒疫苗主要用于無母源抗體或低母源抗體的雞群，一般在出殼后用滴鼻、點眼+肌注的方式超前免疫1次，2～3周時用中毒活疫苗加強1次；中毒活疫苗主要是供有母源抗體的雞群使用；滅活疫苗主要是供種雞群使用。

(3)結(jié)合本次試驗結(jié)果，建議山雞IBD的免疫程序見表5。

表5 種山雞IBD免疫程序

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