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(1.上海欣灝珍禽育種有限公司,上海 奉賢 201403; 2.上海市奉賢區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心,上海 奉賢 201400)
雞傳染性法氏囊病(IBD)是一種以法氏囊發(fā)炎、壞死、萎縮和囊內(nèi)淋巴細胞嚴重受損為特征的急性、接觸性傳染病,其病原體為傳染性法氏囊病毒(IBDV)。法氏囊是禽類特有的免疫器官,又稱腔上囊,其在70~80日齡時的體積最大,以后逐漸消退,至性成熟時完全消失,因此IBD主要發(fā)生于雞的早期生長階段。
IBD是目前養(yǎng)禽業(yè)中最重要的疫病之一,其對所有品種的雞均可感染,且發(fā)病率可達100%,但死亡率較低,為5%~15%;由于IBD可引起雞的法氏囊炎癥而造成機體免疫抑制,使病雞馬立克氏病和新城疫等疫苗免疫的反應(yīng)能力下降以及對球蟲病和大腸桿菌等細菌性疾病更易感,對雞群造成更大損失。
對IBD的預(yù)防,目前各山雞養(yǎng)殖場主要是采用蛋種雞的免疫程序來對種山雞實施免疫,但在生產(chǎn)實踐中常會出現(xiàn)免疫失敗的現(xiàn)象。為此,筆者選擇了一家大型山雞育種公司的一批種山雞(雛苗),開展了一輪山雞全周期(一個世代、56周)IBD疫苗免疫和課題效價評估的的試驗,并根據(jù)試驗結(jié)果提出了山雞專用的免疫程序。現(xiàn)將試驗情況匯總?cè)缦隆?/p>
1.1.1 試驗山雞
選擇某大型山雞養(yǎng)殖場2016年7月2日出雛的祖代1日齡種山雞雛苗1萬羽;該批雛苗的入孵種蛋為43周齡健康種山雞所產(chǎn);孵化過程嚴格按照種蛋孵化流程操作。記錄顯示,該批入孵種蛋的親本母山雞在整個飼養(yǎng)期已分別于19日齡和26日齡采用IBD活疫苗(B87株)進行了2次飲水免疫,并于125日齡時實施了IBD滅活疫苗的免疫。
1.1.2 免疫疫苗
(1)IBD滅活疫苗:IBD基因工程亞單位疫苗;生產(chǎn)商:青島易幫生物工程有限公司;批號:160041405;有效期:2017.06.30。
(2)IBD活疫苗:IBD活疫苗(B87株);生產(chǎn)商:青島易幫生物工程有限公司;批號:160161101;有效期:2018.05.19。
1.1.3 檢測試劑
IBD病毒抗體檢測試劑盒;供應(yīng)商:北京愛得士元亨生物科技有限公司;批號:WM083。
1.2.1 試驗山雞飼養(yǎng)
本試驗對試驗山雞的整個飼養(yǎng)期進行IBD抗體的全程跟蹤監(jiān)測。該批試驗山雞的全飼養(yǎng)期為56周,分為育雛期、保育期、育雛期和種用期4個階段。其中:0~35日齡為育雛期,采用4層疊層式立體育雛籠飼養(yǎng),育雛舍采用智能內(nèi)環(huán)境自動控制系統(tǒng);36~55日齡為保育期,采用內(nèi)環(huán)境水供暖自動加熱系統(tǒng)和雙層階梯式保育籠飼養(yǎng)。
育成期分為育成前期和育成后期2個階段,其中: 56~120日齡為育成前期,采用暗光照地面平養(yǎng)方式飼養(yǎng);121日齡~開產(chǎn)(190~195日齡)為育成后期,又稱為產(chǎn)蛋準備期;采用3層疊層單雞單籠式種山雞籠飼養(yǎng)。試驗山雞從開產(chǎn)~56周齡淘汰為種用期,采用3層疊層單雞單籠式種山雞籠飼養(yǎng)。
1.2.2 試驗山雞免疫
對試驗山雞全周期實施以下IBD疫苗的免疫,詳見表1。
表1 試驗山雞IBD免疫程序表
1.2.3 采樣與樣品處理
(1)親本母山雞采樣:在留取種蛋(43周齡)時隨機采取20羽試驗山雞親本母山雞的血液樣品。
(2)育雛期采樣:隨機抽取20羽0日齡雛山雞血液樣品;以后每隔10天隨機抽取20羽雛山雞采取血樣,共采集0日齡、10日齡、20日齡、30日齡等四個批次、80份血樣;由于雛山雞體型偏小,此期采血可取心臟采血法或直接頸動脈放血采樣。
(3)育成期及后續(xù)樣品采集:育成期60日齡時隨機采取20份血樣,以后每隔30 d在試驗山雞群中隨機采取20份血樣,共采集60日齡、90日齡、120日齡、150日齡、180日齡、210日齡、240日齡、270日齡、300日齡和330日齡等10個批次、200份血樣。
(4)樣品處理與保存:整個試驗共采集試驗山雞14個批次、280份血液樣品和43周齡親本母山雞1個批次、20份血液樣品,總數(shù)為15個批次、300份血液樣品;每個批次樣品在采集后立即分離血清,標記后冷凍保存;至全部15個批次血樣全部采集完成后集中檢測。
1.2.4 樣品檢測
(1)檢測方法:采用ELISA方法對300份試驗樣品同時進行抗體檢測。
(2)判定標準:陰、陽對照成立確定試驗有效,樣品OD值>臨界值判為陽性,否則判為陰性。
2.1.1 親本母山雞一個批次血樣IBD抗體ELISA檢測結(jié)果
20份43周親本母山雞血樣的IBD抗體ELISA檢測結(jié)果,IBD抗體95%合格,平均OD值0.17(臨界值0.0819、標陽OD均值0.232)。親本母山雞樣品IBD抗體檢測OD值分布情況見表2。
表2 樣品檢測結(jié)果匯總表
2.1.2 試驗山雞IBD抗體ELISA檢測結(jié)果
(1)試驗山雞各批次血樣ELISA檢測IBD免疫抗體的OD均值見表3,其全階段免疫抗體變動情況見圖1。
表3 試驗山雞IBD抗體ELISA檢測結(jié)果匯總表
圖1 試驗山雞IBD免疫抗體變動曲線圖
(2)試驗山雞IBD抗體檢測陽性合格結(jié)果:14個批次的試驗山雞血樣ELISA檢測IBD免疫抗體陽性合格率見表4,不同階段陽性合格率變化情況見圖2。
表4 試驗山雞各批次樣品IBD抗體陽性合格率結(jié)果匯總表
圖2 試驗山雞各批次樣品IBD抗體陽性合格率變化曲線圖
2.2.1 親本母山雞IBD母源抗體情況
從表2可以看到,親本母山雞IBD免疫抗體總體良好,基本呈正態(tài)分布,唯一1份不合格樣品的OD值也與臨界值較接近,大部分樣品OD值界于臨界值與全部樣品均值之間,另有3份樣品的OD值超過了檢測試驗標陽OD值。
2.2.2 試驗山雞IBD抗體情況
結(jié)合試驗山雞的生長階段,分析表3可以發(fā)現(xiàn),在全部14個批次280份檢測結(jié)果中,120日齡以前的7個批次樣品的OD值小于臨界值。其中:0日齡20份樣品的OD值為0.06,陽性合格率僅為15%,提示IBD母源抗體的遺傳性較差,親本母山雞較高的母源抗體末能較好地傳給子代,后續(xù)6個批次樣品的OD均值也基本在這一水平波動;期間雖經(jīng)IBD中等毒力弱毒疫苗于19日齡和26日齡二次飲水免疫,但IBD免疫抗體末獲提高,說明弱毒疫苗飲水免疫的效果較差;125日齡采用IBD滅活疫苗肌注免疫后,免疫抗體OD均值快速上升,150日齡批次樣品檢測結(jié)果達到0.136,180日齡批次繼續(xù)上升至0.185,但抗體上升期較短,在210日齡時已快速下降至0.122,240日齡時的OD均值已消退到0.095,接近OD臨界值,說明IBD滅活苗肌注免疫有較好的免疫作用,但抗體有效維持期僅約4個月。其后,3個批次樣品的OD均值又出現(xiàn)了一輪強勁反彈,但期間末進行任何相關(guān)的免疫措施,提示試驗雞群在此階段可能感染了IBD病毒。
2.2.3 試驗山雞IBD抗體陽性合格情況
分析表4和圖2,可見試驗雞群IBD免疫抗體陽性合格率有2個明顯的變化區(qū)間,一個是在120日齡以前的低水平區(qū)間,另一個是在150日齡后的高水平區(qū)間,而125日齡的免疫是二個區(qū)間的拐點。
在低水平區(qū)間7個批次樣品中,陽性合格率最高的僅為25%,最低為0。雖然二次飲水免疫也未見效,抗體檢測OD均值無明顯提高;在高水平區(qū)間,又可分為2個高峰階段,第一個高峰段是125日齡免疫后,抗體快速上升并維持3個月后的消退階段,此階段抗體陽性合格率最高值達到了80%;第二個高峰段是本次試驗的最后3個批次樣品,在滅活疫苗抗體逐步消退至臨界值后,可能是受到IBD野毒感染,試驗雞群的抗體陽性合格率出現(xiàn)了一波強勢反彈,高峰值達到了90%,這一變動現(xiàn)象與IBD抗體OD均值的變動情況相符。
(1)試驗結(jié)果顯示,親本母山雞擁有較高的IBD母源抗體,但試驗山雞未能通過種蛋垂直獲得這些較高的IBD母源抗體,而且在2次使用D78中毒活疫苗進行飲水免疫后,未能有效提升試驗山雞早期免疫抗體;但青年種山雞在上籠后使用滅活苗進行肌注免疫后,可使IBD免疫抗體快速提升至較高水平,且可有效維持3個月以上,說明2次中等毒力活疫苗的飲水免疫,雖然未能有效提高早期免疫抗體水平,但仍起到了較好的基礎(chǔ)免疫作用,為滅活疫苗的免疫起到一定的協(xié)同作用。
(2)相關(guān)資料顯示,免疫接種IBD疫苗是預(yù)防本病的一種有效措施。目前在我國批準使用的疫苗主要有弱毒苗、滅活苗和進口的中等毒力活疫苗(D78)。臨床上低毒力株弱毒疫苗主要用于無母源抗體或低母源抗體的雞群,一般在出殼后用滴鼻、點眼+肌注的方式超前免疫1次,2~3周時用中毒活疫苗加強1次;中毒活疫苗主要是供有母源抗體的雞群使用;滅活疫苗主要是供種雞群使用。
(3)結(jié)合本次試驗結(jié)果,建議山雞IBD的免疫程序見表5。
表5 種山雞IBD免疫程序
Y.M.Saif.禽病學(xué)(第十一版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2012.
[2] 鄧干臻.獸醫(yī)臨床診斷學(xué)(第三版)[M].北京:科學(xué)出版社,2009.
[3] 谷子林,和英布.特禽標準化生產(chǎn)技術(shù)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2003.
[4] 沈強,丁鼎立.特種經(jīng)濟動物養(yǎng)殖手冊[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2015.