廖文勝 李江發(fā) 何陽(yáng)陽(yáng)

(廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院肝膽胰脾外科，廣西 桂林 541002)

原發(fā)性肝細(xì)胞癌是肝細(xì)胞異型增生來(lái)源的腫瘤，病變常與肝炎病毒感染有關(guān)，病變形成后具有侵襲和播散的特征〔1〕。腫瘤在侵襲時(shí)常常與細(xì)胞間黏附和細(xì)胞外基質(zhì)降解有關(guān)?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-14是細(xì)胞外基質(zhì)中的重要蛋白，其在腫瘤中表達(dá)升高時(shí)具有降解細(xì)胞外基質(zhì)的作用〔2〕。磷脂酶Cε(PLCE)1是近年認(rèn)識(shí)的一種基因，是磷脂酰肌醇信號(hào)通路中的關(guān)鍵酶〔3〕，可以引起各種G蛋白水解，并且能調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞遷移。本研究檢測(cè)原發(fā)性肝細(xì)胞癌術(shù)后組織中PLCE1和MMP-14的表達(dá)量，分析其在不同臨床病理特征中的差異。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2015年1月至2017年10月廣西壯族自治區(qū)南溪山醫(yī)院確診為原發(fā)性肝細(xì)胞癌，并且行手術(shù)切除的患者61例為觀察組，年齡49～86歲，平均59.1歲，其中男31例，女30例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合世界衛(wèi)生組織病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理醫(yī)師復(fù)診并分型；②均為原發(fā)腫瘤；③無(wú)其他器官惡性腫瘤；④無(wú)消化系統(tǒng)手術(shù)史；⑤術(shù)前均未行放、化療。選取上述患者中距腫物邊緣>5 cm的正常肝組織新鮮組織18例為對(duì)照組，年齡48～81歲，平均57.2歲，其中男9例，女9例。兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PLCE1和MMP-14表達(dá) 兩組均為術(shù)后新鮮標(biāo)本，立即取材，置于75%酒精中固定48 h后，用手術(shù)剪將組織剪成碎末，在過(guò)濾網(wǎng)上輕搓組織，輔以生理鹽水沖洗，取過(guò)濾過(guò)后的組織，2 000 r/min離心5 min后，取沉淀物，制備成單細(xì)胞懸液(1×106/ml)。每種抗體上機(jī)檢測(cè)時(shí)均取1 ml單細(xì)胞懸液后，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟加入一抗、磷酸鹽緩沖液(PBS)及熒光二抗后，上機(jī)檢測(cè)，應(yīng)用熒光指數(shù)(FI)計(jì)算結(jié)果。FI=(腫瘤中蛋白表達(dá)的熒光強(qiáng)度-對(duì)照樣品平均熒光強(qiáng)度)/正常對(duì)照樣品平均熒光強(qiáng)度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和線(xiàn)性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組PLCE1和MMP-14蛋白表達(dá)量比較 兩組PLCE1(觀察組1.31±0.26，對(duì)照組1.00±0.15)和MMP-14蛋白表達(dá)量(觀察組1.40±0.28，對(duì)照組1.00±0.27)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.78，12.64；均P=0.000)。

2.2PLCE1和MMP-14在觀察組不同臨床特征中表達(dá)量比較 PLCE1和MMP-14表達(dá)量與病變脈管累犯和腫瘤最大徑密切相關(guān)，PLCE1表達(dá)量與腫瘤增殖指數(shù)和炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度密切相關(guān)(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 PLCE1和MMP-14在觀察組不同臨床特征中表達(dá)量的比較

2.3觀察組PLCE1和MMP-14表達(dá)相關(guān)性 PLCE1和MMP-14表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.50，P=0.039 3)。

3 討 論

原發(fā)性肝細(xì)胞癌病變由類(lèi)似肝細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞組成，間質(zhì)由襯覆單層內(nèi)皮的血竇樣腔隙形成，實(shí)質(zhì)細(xì)胞可以形成條索狀、假腺樣和腺泡樣、實(shí)性和硬化的形態(tài)〔4〕。PLCE1基因定位于染色體的10q23，是一個(gè)單拷貝基因，共有33個(gè)外顯子，除包含血小板蛋白激酶C同源區(qū)、交換因子亞型和X區(qū)、Y區(qū)催化結(jié)構(gòu)域外〔5,6〕，還含有細(xì)胞分裂周期25結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)結(jié)構(gòu)，具有鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換的特征，與蛋白的激活密切相關(guān)，激素、細(xì)胞因子及生長(zhǎng)因子等均可以激活蛋白，使其發(fā)揮催化活性〔7,8〕。近年研究顯示PLCE1的異?；罨c腫瘤進(jìn)展相關(guān)〔9〕。張曉娟等〔10〕發(fā)現(xiàn)PLCE1在腫瘤中高表達(dá)，且與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤最大徑相關(guān)，認(rèn)為PLCE1的升高可能成為食管癌早期診斷和判斷預(yù)后的輔助指標(biāo)。MMP-14是MMPs家族中的重要成員，具有前肽區(qū)、信號(hào)肽區(qū)、催化區(qū)、鉸鏈區(qū)和類(lèi)血紅素蛋白結(jié)合區(qū)共5個(gè)功能區(qū)域，能活化MMP-2等MMP家族中的其他蛋白，MMP-14還具有直接分解基底膜中層黏連蛋白的作用〔11,12〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為MMP-14可以作用在腫瘤細(xì)胞周?chē)拈g質(zhì)細(xì)胞，誘導(dǎo)間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生MMP-14原酶，該酶激活后可以降解Ⅳ型膠原，使腫瘤轉(zhuǎn)移的屏障結(jié)構(gòu)破壞，引起轉(zhuǎn)移〔13,14〕。本研究結(jié)果提示PLCE1和MMP-14表達(dá)升高具有促進(jìn)腫瘤形成的作用，即二者類(lèi)似癌基因的功能，這種作用主要與PLCE1基因在12-O-十四烷酰氟波醋酸酯(TPA)的刺激下使腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)激活而引起的惡變有關(guān)，其惡變后腫瘤細(xì)胞失控性增生明顯〔15〕。本文結(jié)果提示PLCE1和MMP-14二者高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，使腫瘤體積增大，對(duì)周?chē)M織的破壞能力增加，促進(jìn)局部蔓延的形成。二者與脈管累犯的相關(guān)性使PLCE1和MMP-14與腫瘤的轉(zhuǎn)移直接相關(guān)，這種作用可能與PLCE1和MMP-14對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)節(jié)有關(guān)，使腫瘤細(xì)胞易于進(jìn)入脈管，為腫瘤轉(zhuǎn)移提供了便捷的通路，隨著脈管內(nèi)液體的流動(dòng)，細(xì)胞易于定殖在其他組織和器官，形成轉(zhuǎn)移瘤〔12，16〕。本文結(jié)果提示PLCE1是促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的相關(guān)蛋白。PLCE1表達(dá)升高后，能使細(xì)胞停滯于幼稚階段，腫瘤細(xì)胞趨于原始，腫瘤細(xì)胞異型性明顯，細(xì)胞增生快，核染色深。本文結(jié)果提示PLCE1表達(dá)與腫瘤間質(zhì)反應(yīng)有關(guān)，間質(zhì)反應(yīng)在一定程度上提示腫瘤性病變，這也是病理醫(yī)師診斷惡性腫瘤的直接證據(jù)，而PLCE1高表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞周?chē)仔苑磻?yīng)的發(fā)生，也使PLCE1與腫瘤細(xì)胞免疫和體液免疫功能聯(lián)系在一起。PLCE1和MMP-14二者具有協(xié)同作用。二者的相關(guān)性可能與引起VEGF分泌〔1〕，促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖有關(guān)，但是其具體機(jī)制有待證實(shí)。

4 參考文獻(xiàn)

1潘運(yùn)龍,覃 莉,李文生.肝細(xì)胞肝癌中VEGF、p53、mdm2蛋白表達(dá)及其相互關(guān)系〔J〕.實(shí)用腫瘤雜志,2004;19(4):288-91.

2Yang B,Gao J,Rao Z,etal.Clinicopathological and prognostic significance of α5β1-integrin and MMP-14 expressions in colorectal cancer〔J〕.Neoplasma,2013;60(3):254-61.

3Ma H,Wang L,Liu Z,etal.Polymorphisms of PLCE1 and KIF1B and risk of squamous cell carcinoma of the head and neck〔J〕.Cancer Res,2011;71(8):880.

4于德新,高志芹,王 濱,等.肝細(xì)胞癌VEGF、bFGF與凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的關(guān)系〔J〕.腫瘤防治研究,2005;32(5):276-8.

5Abnet C,Freedman N,Hu N,etal.A shared susceptibility locus in PLCE1 at 10q23 for gastric adenocarcinoma and esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Nature Genet,2010;42(9):764-5.

6Bye H,Prescott N,Lewis C,etal.Distinct genetic association at the PLCE1 locus with oesophageal squamous cell carcinoma in the South African population〔J〕.Carcinogenesis,2012;33(11):2155-61.

7Zhou R,Li Y,Wang N,etal.PLC-ε1 gene polymorphisms significantly enhance the risk of esophageal squamous cell carcinoma in individuals with a family history of upper gastrointestinal cancers〔J〕.Arch Med Res,2012;43(7):578-84.

8Sharma K,Rai R,Srivastava A,etal.A multigenic approach to evaluate genetic variants of PLCE1,LXRs,MMPs,TIMP,and CYP genes in gallbladder cancer predisposition〔J〕.Tumour Biol,2014;35(9):8597-606.

9周榮秒,牛朝旭,李 賓,等.沉默PLCε1基因?qū)κ彻馨〦ca109細(xì)胞凋亡和侵襲的影響及其作用機(jī)制〔J〕.腫瘤,2014;32(12):1102-8.

10張曉娟,石勁松,張玲染,等.食管鱗狀細(xì)胞癌組織中PLCE1和RFT2的表達(dá)及臨床意義〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2015;31(12):1348-51.

11Kolodziej S,Hockerman S,Boehm T,etal.Orally bioavailable dual MMP-1/MMP-14 sparing,MMP-13 selective α-sulfone hydroxamates〔J〕.Bioorg Med Chem Lett,2010;20(12):3557-60.

12Harrison G,Davies G,Martin T,etal.The influence of CD44v3-v10 on adhesion,invasion and MMP-14 expression in prostate cancer cells〔J〕.Oncol Reports,2006;15(1):199-206.

13Cork S,Kaur B,Devi N,etal.A proprotein convertase/MMP-14 proteolytic cascade releases a novel 40 kDa vasculostatin from tumor suppressor BAI〔J〕.Oncogene,2012;31(50):5144-52.

14Tetu B,Brisson J,Wang C,etal.The influence of MMP-14,TIMP-2 and MMP-2 expression on breast cancer prognosis〔J〕.Breast Cancer Res,2006;8(3):28-9.

15Hinkes B,Wiggins R,Gbadegesin R,etal.Positional cloning uncovers mutations in PLCE1 responsible for a nephrotic syndrome variant that may be reversible〔J〕.Nature Genet,2006;38(12):1397-405.

16Palmer A,Lochhead P,Hold G,etal.Mo1584 genetic variation in C20orf54,PLCE1 and MUC1 and risk of upper gastrointestinal cancers in caucasian populations〔J〕.Eur J Cancer Prev,2012;21(6):541-4.