俞 芹，王倩穎，王寧杭，王型力，范李節(jié)，張明如，申亞梅

（浙江農(nóng)林大學(xué) 風(fēng)景園林與建筑學(xué)院，浙江 杭州 311300）

木蘭屬M(fèi)agnolia植物分布范圍廣，多為高大喬木或灌木，抗性強(qiáng)，株型優(yōu)美，早春季節(jié)開(kāi)花，花色艷麗，具有較高的觀賞價(jià)值，在園林綠化中應(yīng)用廣泛［1］，具有廣闊的市場(chǎng)價(jià)值。目前，雜交育種是木蘭屬新品種選育的主要手段之一，大部分種間雜交均表現(xiàn)為親和［2］?；ǚ刍盍Φ母叩椭苯佑绊戨s交育種工作的成敗?；ǚ刍盍Φ臏y(cè)定方法有直接授粉、離體萌發(fā)、染色法等［3］。直接授粉花粉生活力易受柱頭可授性、授粉時(shí)期、花粉與柱頭親和性等因素影響［4］。根據(jù)染色原理不同，染色法分為氯化三苯基四氮唑（TTC）、碘－碘化鉀法、聯(lián)苯胺法、醋酸洋紅染色法等，該方法雖簡(jiǎn)單易操作，但所測(cè)得的花粉活力受花粉自身特性的影響較大，如花粉壁的厚度、花粉內(nèi)各種酶活性的強(qiáng)弱等［5］，未成熟、衰老或敗育的花粉仍能染色［6］。離體培養(yǎng)法為花粉提供的條件與花粉在柱頭內(nèi)萌發(fā)的條件相似［7］，所得花粉活力與花粉在柱頭上的活力最接近，是檢測(cè)花粉活力的最佳方法。近年來(lái)，已有許多木蘭屬植物花粉形態(tài)、生活力及其儲(chǔ)藏特性的相關(guān)研究， 如二喬玉蘭Magnolia soulangeana［8］， 天女木蘭 Magnolia sieboldii［9］， 紫玉蘭Magnolia liliflora［10］，景寧木蘭Magnolia sinostellata［11］等，研究表明不同植物適宜的培養(yǎng)基組分及質(zhì)量濃度要求不同，花粉離體培養(yǎng)中所需的萌發(fā)條件也不同。本研究在綜合前人研究的基礎(chǔ)上，以望春玉蘭Magnolia biondii，長(zhǎng)花玉蘭 Magnolia ‘Changhua’，丹馨玉蘭 Magnolia ‘Danxin’，黃山木蘭 Magnolia cylindrica等為試驗(yàn)材料，研究不同培養(yǎng)基組分、培養(yǎng)溫度及時(shí)間對(duì)花粉萌發(fā)的影響。旨在篩選出各植物材料適宜的培養(yǎng)基及花粉萌發(fā)最佳條件，為木蘭屬植物的育種工作提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

望春玉蘭、長(zhǎng)花玉蘭、丹馨玉蘭、黃山木蘭等4種木蘭屬植物均來(lái)自于浙江農(nóng)林大學(xué)苗圃地，將所采集花藥置于硫酸紙上，自然干燥24～36 h，待花藥開(kāi)裂后收集花粉，并放置于硅膠中干燥，－80℃條件下儲(chǔ)藏備用。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 單因子試驗(yàn) 采用離體培養(yǎng)法。蔗糖質(zhì)量濃度梯度為0，50，100，150，200 g·L－1；硼酸質(zhì)量濃度梯度為 0， 50， 100， 200， 300 mg·L－1； PEG-4000 質(zhì)量濃度梯度為 0， 150， 200， 250， 300 g·L－1。

1.2.2 正交試驗(yàn) 在單因子試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取對(duì)試驗(yàn)材料影響較大的培養(yǎng)基組分及質(zhì)量濃度，進(jìn)行L9（33）正交試驗(yàn)（表1），以得到最佳培養(yǎng)基組分。

1.2.3 最佳培養(yǎng)條件的確定 利用最佳培養(yǎng)基，把4種試驗(yàn)材料分別置于15，20，25，30，35℃下進(jìn)行離體培養(yǎng)，培養(yǎng)12 h后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定最適萌發(fā)溫度。在最適溫度條件下，分別培養(yǎng)3，6，9，12，15 h，確定最佳培養(yǎng)條件。

1.3 試驗(yàn)方法

采用離體培養(yǎng)法，在雙凹載玻片內(nèi)滴入培養(yǎng)液，將充分混勻后的花粉均勻點(diǎn)入培養(yǎng)液中，將載玻片置于鋪有濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，25℃，8 400 lx人工氣候培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h。在顯微鏡下觀察統(tǒng)計(jì)，花粉管長(zhǎng)度等于或超過(guò)花粉粒直徑的花粉即視為已萌發(fā)。重復(fù)3次·處理－1，觀察視野3個(gè)·重復(fù)－1，所統(tǒng)計(jì)的花粉粒不少于50粒·視野－1?；ǚ勖劝l(fā)率=（萌發(fā)的花粉粒數(shù)/視野中花粉粒總數(shù)）×100%。

1.4 數(shù)據(jù)處理

使用Excel 2010對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，利用SPSS 22.0對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行反正弦轉(zhuǎn)換并進(jìn)行單因素方差分析（Duncan’s），各處理間差異顯著性水平為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基組分對(duì)4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)的影響

2.1.1 蔗糖對(duì)花粉萌發(fā)的影響 試驗(yàn)結(jié)果表明：不同質(zhì)量濃度蔗糖對(duì)4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)率影響顯著（圖1A）。隨著蔗糖質(zhì)量濃度的增加，4種花粉萌發(fā)率均呈先增加后減小的變化趨勢(shì)。不同植物最大萌發(fā)率及最適蔗糖質(zhì)量濃度有所不同，望春玉蘭花粉適宜的蔗糖質(zhì)量濃度為50和100 g·L－1，花粉萌發(fā)率分別為62.56%和68.87%，顯著高于其他質(zhì)量濃度處理下的萌發(fā)率（P＜0.05）；當(dāng)蔗糖質(zhì)量濃度超過(guò)100 g·L－1時(shí)，望春玉蘭花粉萌發(fā)率下降，但蔗糖溶液中花粉萌發(fā)率均高于對(duì)照。長(zhǎng)花玉蘭在100 g·L－1的蔗糖溶液中，萌發(fā)率達(dá)最大，為18.02%，顯著高于其他質(zhì)量濃度處理（P＜0.05）；蔗糖質(zhì)量濃度為200 g·L－1時(shí)，花粉萌發(fā)率最低，為9.90%，比對(duì)照低1.92%。在各質(zhì)量濃度蔗糖培養(yǎng)基上，丹馨玉蘭花粉萌發(fā)率均低于10%，蔗糖質(zhì)量濃度為0～100 g·L－1時(shí)，花粉萌發(fā)率差異不顯著（P＞0.05）；而高質(zhì)量濃度蔗糖溶液對(duì)丹馨玉蘭花粉萌發(fā)起抑制作用，150和200 g·L－1蔗糖質(zhì)量濃度下，花粉萌發(fā)率顯著低于對(duì)照，分別降低了3.47%和4.42%。黃山木蘭花粉適宜的蔗糖質(zhì)量濃度為50～100 g·L－1，在此范圍內(nèi)花粉萌發(fā)率顯著高于對(duì)照（P＜0.05），在200 g·L－1蔗糖溶液中，黃山木蘭花粉萌發(fā)率最低，為2.46%，低于對(duì)照22.95%。

2.1.2 硼酸對(duì)花粉萌發(fā)的影響 硼酸對(duì)4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)均有顯著作用（圖1B）。其中，望春玉蘭花粉在200 mg·L－1硼酸的培養(yǎng)液中萌發(fā)率高達(dá)79.63%，顯著高于其他質(zhì)量濃度下花粉的萌發(fā)率（P＜0.05），且比對(duì)照萌發(fā)率高46.89%，高質(zhì)量濃度的硼酸培養(yǎng)液中花粉萌發(fā)率與對(duì)照無(wú)顯著差異（P＞0.05）。在0～200 mg·L－1硼酸范圍內(nèi)，長(zhǎng)花玉蘭花粉萌發(fā)率均隨質(zhì)量濃度的增加而上升，其最適質(zhì)量濃度為200 mg·L－1，萌發(fā)率為25.57%，顯著高于對(duì)照；在300 mg·L－1硼酸條件下，萌發(fā)率開(kāi)始下降。丹馨玉蘭花粉在各質(zhì)量濃度硼酸條件下萌發(fā)率差異均不顯著（P＞0.05），當(dāng)硼酸質(zhì)量濃度為50和100 mg·L－1時(shí)，花粉萌發(fā)率達(dá)最大，分別為13.22%和14.93%，對(duì)照萌發(fā)率最低，為7.27%。黃山花粉萌發(fā)率隨著硼酸質(zhì)量濃度增大而增加，在100 mg·L－1時(shí)，其花粉萌發(fā)率達(dá)最大，為47.09%，顯著高于200 mg·L－1下的萌發(fā)率（28.47%），與其他質(zhì)量濃度培養(yǎng)液中的花粉萌發(fā)率差異不顯著（P＞0.05）。

2.1.3 PEG-4000對(duì)花粉萌發(fā)的影響 隨著PEG-4000質(zhì)量濃度的增加，4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)率均呈先增加后減小的變化趨勢(shì)（圖1C）。PEG-4000的質(zhì)量濃度為200和250 g·L－1時(shí)，望春玉蘭花粉萌發(fā)率達(dá)最大，分別為53.92%和51.21%，顯著高于其他質(zhì)量濃度處理（P＜0.05）。長(zhǎng)花玉蘭花粉萌發(fā)的最適PEG-4000質(zhì)量濃度為150 g·L－1，之后隨著PEG-4000質(zhì)量濃度的增加，花粉萌發(fā)率降低；當(dāng)質(zhì)量濃度為300 g·L－1時(shí)，花粉萌發(fā)率僅為2.41%，顯著低于對(duì)照萌發(fā)率（13.60%）?？梢?jiàn)高質(zhì)量濃度的PEG-4000抑制長(zhǎng)花玉蘭花粉萌發(fā)。丹馨玉蘭花粉在PEG-4000質(zhì)量濃度為150～250 g·L－1時(shí)，萌發(fā)率差異不顯著（P＞0.05）， 顯著高于其他處理（P＜0.05）；質(zhì)量濃度為 200 g·L－1時(shí)萌發(fā)率最大，為 17.29%； 300 g·L－1PEG-4000抑制花粉萌發(fā)，萌發(fā)率僅為2.41%，且低于對(duì)照（4.39%）。在150g·L－1PEG-4000培養(yǎng)液中黃山木蘭花粉萌發(fā)率達(dá)最大（42.39%），顯著高于其他質(zhì)量濃度下花粉萌發(fā)率，隨著質(zhì)量濃度增大，萌發(fā)率呈逐漸遞減趨勢(shì)。

圖1 不同因素對(duì)4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)率的影響Figure1 Effects of different factors on pollen germination rate of four Magnolia species

2.2 4種木蘭屬植物花粉最佳萌發(fā)培養(yǎng)基的選擇

在單因子試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行L9（33）正交試驗(yàn)，尋找最佳培養(yǎng)基組合。試驗(yàn)結(jié)果表明（表1）：4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)對(duì)液體培養(yǎng)基組分的質(zhì)量濃度存在差異，這可能因不同基因型花粉自身的萌發(fā)特性而異。 望春玉蘭在 50 g·L－1蔗糖＋50 mg·L－1硼酸＋200 g·L－1PEG-4000 培養(yǎng)基下萌發(fā)率高于其他培養(yǎng)基，高達(dá)69.23%，極差分析表明各因素對(duì)其花粉萌發(fā)率的影響依次為：硼酸＞蔗糖＞PEG-4000。長(zhǎng)花玉蘭在 100 g·L－1蔗糖＋200 mg·L－1硼酸＋200 g·L－1PEG-4000 培養(yǎng)基下萌發(fā)率最高， 為 51.47%， 極差分析顯示對(duì)其花粉萌發(fā)率的影響因素依次為：蔗糖＞PEG-4000＞硼酸。丹馨玉蘭在100 g·L－1蔗糖＋100 mg·L－1硼酸＋150 g·L－1PEG-4000培養(yǎng)基下萌發(fā)率最高，為29.79%，極差分析顯示對(duì)其花粉萌發(fā)率的影響因素依次為： 蔗糖＞硼酸＞PEG-4000。 黃山木蘭在 50 g·L－1蔗糖＋100 mg·L－1硼酸＋250 g·L－1PEG-4000 培養(yǎng)基下萌發(fā)率最高，為69.54%，極差分析表明各因素對(duì)其花粉萌發(fā)率的影響依次為蔗糖＞硼酸＞PEG-4000。

表1 4種木蘭屬植物花粉正交試驗(yàn)的萌發(fā)率Table 1 Pollen germination rate of four Magnolia species in orthogonal design experiment

2.3 4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)最適條件

2.3.1 最適培養(yǎng)溫度 不同溫度對(duì)望春玉蘭、長(zhǎng)花玉蘭、丹馨玉蘭及黃山木蘭花粉萌發(fā)率均有一定的影響（圖3A）。15～25℃內(nèi)，隨著溫度的升高，萌發(fā)率隨之增加，25℃時(shí)各植物花粉萌發(fā)率顯著高于其他溫度處理萌發(fā)率（P＜0.05），依次為75.85%，31.85%，18.94%，61.14%；在25～35℃內(nèi)，隨著溫度的上升，萌發(fā)率受到抑制，即溫度過(guò)高或過(guò)低均不適合4種花粉萌發(fā)。由此可見(jiàn)：雖然4種不同遺傳背景的花粉萌發(fā)率有較大差異，但其最適萌發(fā)溫度相同。

2.3.2 最適培養(yǎng)時(shí)間 由試驗(yàn)結(jié)果可知（圖3B）：培養(yǎng)3 h時(shí)，4種木蘭屬植物花粉均已萌發(fā)，6～9 h萌發(fā)率迅速上升，12～15 h萌發(fā)率趨于穩(wěn)定。其中培養(yǎng)9 h時(shí)，望春玉蘭和黃山木蘭花粉萌發(fā)率達(dá)到最大，分別為71.19%和59.82%，而長(zhǎng)花玉蘭和丹馨玉蘭花粉萌發(fā)率在培養(yǎng)12 h時(shí)達(dá)到最大，分別為44.50%，23.43%。4種植物花粉雖最適培養(yǎng)時(shí)間有所不同，但其萌發(fā)趨勢(shì)幾乎一致。

圖2 不同培養(yǎng)條件下4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)率的變化Figure 2 Changes of different culture conditions on pollen germination rate of four Magnolia species

3 結(jié)論與討論

蔗糖和硼酸是組成花粉離體培養(yǎng)基的基本成分，蔗糖為花粉代謝、跨膜運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程提供必要的能量，同時(shí)也是維持花粉內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)［12］。本研究結(jié)果表明，蔗糖對(duì)4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)的影響水平不同，蔗糖在長(zhǎng)花玉蘭、丹馨玉蘭及黃山木蘭花粉萌發(fā)中具有主導(dǎo)作用，但對(duì)望春玉蘭花粉萌發(fā)率影響水平次于硼酸，這可能與不同植物生物學(xué)特性相關(guān)。4種木蘭屬植物花粉萌發(fā)最適蔗糖質(zhì)量濃度（50～100 g·L－1）與二喬玉蘭［8］， 天女木蘭［9］結(jié)果相符。

硼元素在植物體內(nèi)作為微量營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，以花器官內(nèi)含量居多，且主要分布于柱頭及子房，硼對(duì)糖分的吸收具有促進(jìn)作用，參與果膠物質(zhì)的合成，且促進(jìn)花粉管壁的形成，從而加快花粉萌發(fā)生長(zhǎng)［13］。本研究中，4種木蘭屬植物所需最適硼酸質(zhì)量濃度不同，但在含有硼酸的培養(yǎng)基中花粉萌發(fā)率均高于對(duì)照，即花粉萌發(fā)需要硼元素的參與。正交試驗(yàn)結(jié)果表明：望春玉蘭花粉萌發(fā)所需硼酸質(zhì)量濃度低于其他3種花粉，可能由于蔗糖和PEG-4000的添加，望春玉蘭花粉對(duì)硼酸的需求量減少。長(zhǎng)花玉蘭在200 mg·L－1硼酸溶液中萌發(fā)率達(dá)最大，與景寧木蘭研究結(jié)果相同［11］；丹馨玉蘭、黃山木蘭均在100 mg·L－1硼酸溶液中萌發(fā)率達(dá)最大，與二喬玉蘭、天女木蘭結(jié)果一致［8－9］。由此可知：100～200 mg·L－1硼酸可促進(jìn)木蘭屬植物花粉萌發(fā)生長(zhǎng)。

PEG-4000作為高分子滲透劑，在花粉萌發(fā)過(guò)程中，通常改變花粉內(nèi)膜結(jié)構(gòu)，提高內(nèi)膜通透性，從而促進(jìn)花粉粒萌發(fā)［14］。單因素試驗(yàn)表明：4種木蘭屬植物最適PEG-4000質(zhì)量濃度為150～250 g·L－1，對(duì)蠟梅Chimonanthus praecox［15］的研究發(fā)現(xiàn)，低質(zhì)量濃度PEG-4000對(duì)花粉離體萌發(fā)作用不顯著，而高濃度下，花粉萌發(fā)率顯著受到抑制，本研究結(jié)果與此相一致。正交試驗(yàn)結(jié)果表明：PEG-4000在4種花粉萌發(fā)中均不是主導(dǎo)因子，而若蠟梅花粉離體培養(yǎng)基內(nèi)不含PEG-4000，其花粉不萌發(fā)［15］，可能由于不同科植物花粉萌發(fā)過(guò)程中所需營(yíng)養(yǎng)不同。PEG-4000是首次應(yīng)用于木蘭屬植物花粉離體萌發(fā)，對(duì)同屬其他植物花粉萌發(fā)有待進(jìn)一步研究。

多數(shù)花粉萌發(fā)的最適溫度為25℃［16］，本研究結(jié)果與此相同。也有研究發(fā)現(xiàn)［17］：由于植物分布區(qū)不同，其花粉萌發(fā)對(duì)溫度的響應(yīng)有所差異。望春玉蘭和黃山木蘭花粉在培養(yǎng)9 h時(shí)萌發(fā)率達(dá)最大，而長(zhǎng)花玉蘭和丹馨玉蘭花粉最佳培養(yǎng)時(shí)間為12 h，在各自最適培養(yǎng)時(shí)間下，對(duì)花粉其進(jìn)行觀察，花粉管互不交錯(cuò)，清晰，便于統(tǒng)計(jì)。

4 參考文獻(xiàn)

［1］王子華，潘玉霞，李慶有，等.木蘭屬植物育種研究進(jìn)展［J］.河北科技師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，25（4）：40－44.WANG Zihua,PAN Yuxia,LI Qingyou,et al.Research progress in breeding of Magnolia genus plant ［J］.J Hebei Norm Univ Sci Technol,2011,25（4）:40 － 44.

［2］王亞玲，李勇，張壽洲，等.木蘭科植物的人工雜交［J］.武漢植物學(xué)研究，2003，21（6）:508－514.WANG Yaling,LI Yong,ZHANG Shouzhou,et al.The crossing result of Magnoliaceae ［J］.J Wuhan Bot Res,2003,21（6）:508 － 514.

［3］張超儀，耿興敏.6種杜鵑花屬植物花粉活力測(cè)定方法的比較研究［J］.植物科學(xué)學(xué)報(bào)，2012，30（1）：92－99.ZHANG Chaoyi,GENG Xingmin.Comparative study on methods for testing pollen viability of the six species from genus Rhododendron ［J］.Plant Sci J,2012,30（1）:92 － 99.

［4］胡春，劉左軍，李富香，等.鈍裂銀蓮花花粉活力測(cè)定方法的研究［J］.植物研究，2013，33（5）：582－586.HU Chun,LIU Zuojun,LI Fuxiang,et al.Detection methods for pollen viability of Anemone obtusiloba ［J］.Bull Bot Res,2013,33（5）:582 － 586.

［5］蘇蕓蕓，王康才，薛啟.不同產(chǎn)地藿香花粉活力與柱頭可授性研究［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2016，25（9）：189－196.SU Yunyun,WANG Kangcai,XUE Qi.Study of the pollen viability and stigma receptivity of Agastache rugosa from different areas ［J］.Acta Pratac Sin,2016,25（9）:189 － 196.

［6］李梅，周蘭英.云南松花粉儲(chǔ)藏溫度及離體萌發(fā)條件［J］.浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，34（1）：63－67.LI Mei,ZHOU Lanying.Storage temperature and pollen viability of Pinus yunnanensis ［J］.J Zhejiang A＆F Univ,2017,34（1）:63 － 67.

［7］管雨，賈文慶，劉會(huì)超，等.木瓜花粉生活力測(cè)定及儲(chǔ)藏特性［J］.浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，29（5）：790－794.GUAN Yu,JIA Wenqing,LIU Huichao,et al.Pollen viability and storage of Chaenomeles sinensis ［J］.J Zhejiang A＆F Univ,2012,29（5）:790 － 794.

［8］張亞利，田振坤，劉燕.二喬玉蘭花粉貯存條件的比較研究［J］.熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)，2006，14（4）：318－320.ZHANG Yali,TIAN Zhenkun,LIU Yan.Preservation methods of pollen of Magnolia soulangeana Soul.-Bod. ［J］.J Trop Subtrop Bot,2006,14（4）:318 － 320.

［9］王子華，張風(fēng)娟，秦素平，等.天女木蘭花粉形態(tài)特征及其生活力［J］.熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)，2008，16（6）：551－556.WANG Zihua,ZHANG Fengjuan,QIN Suping,et al.Pollen morphology and viability of Magnolia sieboldii［J］.J Trop Subtrop Bot,2008,16（6）:551 － 556.

［10］劉會(huì)超，賈文慶，郭艷艷.紫玉蘭花粉的生活力測(cè)定及貯藏方法［J］.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39（7）:188－191.LIU Huichao,JIA Wenqing,GUO Yanyan.The determination of Magnolia liliiflora pollen viability and its storage method ［J］.Guizhou Agric Sci,2011,39（7）:188 － 191.

［11］盧璐，余澤智，劉雪燕，等.景寧木蘭花粉萌發(fā)與貯藏特性研究［J］.植物研究，2014，34（2）：182－187.LU Lu,YU Zezhi,LIU Xueyan,et al.Pollen germination and storage of Magnolia sinostellata ［J］.Bull Bot Res,2014,34（2）:182 － 187.

［12］葉要妹，張佳祺，張雙鳳，等.百日草自交系花粉萌發(fā)條件及花粉活力研究［J］.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007， 26（5）： 693 － 696.YE Yaomei,ZHANG Jiaqi,ZHANG Shuangfeng,et al.In vitro pollen germination of inbred lines of Zinnia elegans Jacq.［J］.J Huazhong Agric Univ,2007,26（5）:693 － 696.

［13］胡珂雪，張曉曼，鄭云鳳.四季報(bào)春花粉萌發(fā)特性研究［J］.西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，32（2）：170－173.HU Kexue,ZHANG Xiaoman,ZHENG Yunfeng.Characteristics of pollen germination of Primula obconica ［J］.J Northwest For Univ,2017,32（2）:170 － 173.

［14］趙宏波，房偉民，陳發(fā)棣.梅花花粉離體萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng)研究［J］.廣西植物，2007，27（3）：393－396.ZHAO Hongbo,FANG Weimin,CHEN Fadi.Pollen germination in vitro of Mei flower ［J］.Guihaia,2007,27（3）:393－396.

［15］龔雙姣，馬陶武，劉強(qiáng).培養(yǎng)基組分及培養(yǎng)條件對(duì)蠟梅花粉萌發(fā)及花粉管生長(zhǎng)的影響［J］.西北植物學(xué)報(bào)，2012， 32（6）： 1254 － 1260.GONG Shuangjiao,MA Taowu,LIU Qiang.Effects of culture medium composition and culture conditions on pollen germination and pollen tube growth of Chimonanthus praecox ［J］.Acta Bot Boreal-Occident Sin,2012,32（6）:1254－1260.

［16］彭向永，劉俊祥，李振堅(jiān)，等.蒿柳花粉離體萌發(fā)及花粉管生長(zhǎng)特性［J］.北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，39（3）：81－86.PENG Xiangyong,LIU Junxiang,LI Zhenjian,et al.Characteristics of pollen germination and pollen tube growth in Salix viminalis in vitro ［J］.J Beijing For Univ,2017,39（3）:81 － 86.

［17］郭磊，張斌斌，馬瑞娟，等.溫度對(duì)桃離體花藥散粉及花粉萌發(fā)的影響［J］.植物生理學(xué)報(bào)，2014，50（3）：269－274.GUO Lei,ZHANG Binbin,MA Ruijuan,et al.Effects of temperature on the pollen dissemination and germination of peach ［J］.Plant Physiol J,2014,50（3）:269 － 274.