□ 陳 勇 自貢檢驗(yàn)檢測(cè)院

糕點(diǎn)在我國(guó)生產(chǎn)和食用的歷史悠久，南北糕點(diǎn)種類繁多，制作工藝差異大，生產(chǎn)者通常會(huì)加入各種色素，這些色素一般分為天然色素和合成色素。天然色素價(jià)格昂貴，合成色素價(jià)格低廉，為控制生產(chǎn)成本、吸引消費(fèi)者眼球，生產(chǎn)者往往會(huì)在所生產(chǎn)的糕點(diǎn)中加入過量的合成色素，但如果食用合成色素過量，對(duì)人體具有毒害作用，因此，我國(guó)對(duì)合成色素的添加量有著嚴(yán)格規(guī)定。我國(guó)準(zhǔn)許使用的人工合成色素有11種，最常見的有檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅、亮藍(lán)等8種色素。本文通過對(duì)前處理方法的改進(jìn)，采用液相色譜法測(cè)定糕點(diǎn)中的合成色素，該方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定，解決了回收率不理想、穩(wěn)定性差、操作繁瑣等問題。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器和試劑

主要儀器包括高效液相色譜：Agilent 1200；檢測(cè)器：DAD；電子天平：AL204；純水機(jī)：優(yōu)普 UPH-1-10T；高速離心機(jī)：Xiang Yi H-1650；恒溫水浴鍋。

試劑有乙酸銨（優(yōu)級(jí)純）；亞鐵氰化鉀（分析純）；乙酸鋅（分析純）；甲醇（HPLC級(jí)）

標(biāo)準(zhǔn)品有檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅、亮藍(lán)（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）。

1.2 色譜條件

色譜柱：welch xtimate C18（150 mm×4.6 mm×5 mm）；柱溫：35℃；流動(dòng)相為甲醇、0.02 mol/L乙酸銨溶液；梯度洗脫程序如下：時(shí)間/min分 別 是（0 min、9 min、11 min、12 min、16 min、19 min、19 min）； 甲 醇 /%（4%、4%、10%、20%、40%、90%、4%）；乙酸 銨 溶 液/%（96%、96%、90%、80%、60%、10%、96%）；流量為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)430～625 nm。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

將標(biāo)準(zhǔn)品（檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅、亮藍(lán)）分別用高純水配制成1.000 g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，精密吸取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成濃度為0.05 g/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，再經(jīng)過膜稀釋后，按照1.2的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.4 樣品前處理

稱取約5 g（精確至0.0 001 g）已制備處理好的樣品，用20 mL水分?jǐn)?shù)次將樣品轉(zhuǎn)移入100 mL燒杯中，超聲提取10 min，取出后加入106 g/L的亞鐵氰化鉀溶液2 mL，搖勻，然后再加入220 g/L的乙酸鋅溶液2 mL，搖勻后加熱至沸，收集煮沸后的液體，然后再加水煮沸，直至無色為止。收集的液體放入蒸發(fā)皿中，在100℃水浴鍋中加熱濃縮至5 mL左右，后經(jīng)離心機(jī)（10 000 r/min）離心10 min，取出上清液，用微孔濾膜過濾后上機(jī)待測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 波長(zhǎng)的選擇

通過紫外-可見光譜掃描，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅的最大吸收波長(zhǎng)在400～600 nm，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)比較：其中檸檬黃在430 nm處具有最大吸收波長(zhǎng)，亮藍(lán)在625 nm處具有最大吸收波長(zhǎng)，新紅在530 nm處具有最大吸收波長(zhǎng)，其他幾種色素在500 nm處都能很好地被吸收。因此，本實(shí)驗(yàn)最終選擇在檸檬黃430 nm、亮藍(lán)625 nm、新紅530 nm、其他5種500 nm處進(jìn)行檢測(cè)。

2.2 樣品前處理的選擇

由于全國(guó)各地的糕點(diǎn)各類繁多，其以含高蛋白的產(chǎn)品居多，所以怎樣沉淀蛋白，使其不干擾樣品的檢測(cè)，是一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。筆者通過反復(fù)多次試驗(yàn)及選取不同的沉淀劑進(jìn)行處理、測(cè)試，最后選擇了亞鐵氰化鉀和乙酸鋅，再通過多次加水煮沸，收集沸水，濃縮，離心后過濾。這種方法處理過程簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定，回收率高。

2.3 流動(dòng)相的選擇

本實(shí)驗(yàn)以甲醇和0.02 mol/L乙酸銨溶液作為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min。通過調(diào)整溶液比例，分別采用下面三種體積比（甲醇:乙酸銨）4:96、8:92、12:88進(jìn)行試驗(yàn)，得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)比例在4:96時(shí)，可以得到較好的峰面積，靈敏度也最高，見圖1。

2.4 方法線性和檢出限

在方法優(yōu)化的條件下，這八種合成色素的質(zhì)量濃度在1～20 mg/L范圍內(nèi)與色譜峰面積均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9 993～0.9 998，檢出限（SN）為0.07～0.16 mg/kg，對(duì)10 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣10次，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.10%～1.0%。

八種合成色素的定量限（mg/L）、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、方法檢出限（S/N≥3）（mg/L）分別是：檸檬黃（1.0、y=706.70x+0.2 830、0.9 993、0.0 005）；日 落 黃（1.0、y=622.27x+0.3 214、0.9 997、0.0 005）；莧菜紅（1.0、y=461.03x+0.4 338、0.9 996、0.0 005）；胭脂紅（1.0、y=478.28x+0.4 182、0.9 997、0.0 005）；誘惑紅（1.0、y=744.64x+0.2 686、0.9 995、0.0 005）；赤蘚紅（1.0、y=108 5.1x+0.1 080、0.9 997、0.0 002）；新紅（1.0、y=1 526.2x+0.3 276、0.9 999、0.0 005）； 亮 藍(lán)（1.0、y=185 1.7x+0.1 080、0.9 995、0.0 002）

圖1 八種色素標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

表1 精密度和回收率測(cè)定結(jié)果

2.5 方法回收率和精密度

稱取5g樣品，分別做高中低3個(gè)濃度標(biāo)樣，添加檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅、亮藍(lán)8種合成色素標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)濃度重復(fù)6次，按試品制備方法處理后，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1，表明該方法準(zhǔn)確可靠。

3 結(jié)論

對(duì)糕點(diǎn)類樣品中常用的8種食用合成色素進(jìn)行研究，大大減少了樣品處理步驟和工作量，可有效降低誤差，優(yōu)化樣品前處理?xiàng)l件。通過對(duì)測(cè)定波長(zhǎng)進(jìn)行確認(rèn)，能達(dá)到很良好的基線分離，方法回收率在95～101之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＜2，檢出限檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅為0.0 005 mg/kg，赤蘚紅、亮藍(lán)為0.0 002 mg/kg，完全能滿足樣品的分析要求。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB 2760-2014 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

[2]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB 5009.35-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.