□ 于海豐 張 蘭 申 利 王海澍 鞍山市食品藥品檢驗(yàn)所

吡咯里西啶類生物堿存在于自然界有花植物中，這類物質(zhì)很容易在蜂蜜中殘留。人類長期食用這種生物堿會導(dǎo)致肝損傷，甚至癌變。目前，大多數(shù)研究都針對其醫(yī)學(xué)毒性展開，而對這類物質(zhì)的檢測及食品中殘留限制的研判并不多。

1 實(shí)驗(yàn)測試

1.1 儀器

液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀（Agilent 1260-6460），超聲波清洗器（舒美KQ-100DB），電子天平（梅特勒ME204E），旋渦混合器，離心機(jī)（美國貝克曼Allera64R），氮吹儀（上海屹堯MS-10），固相萃取裝置。

1.2 試劑

倒千里光堿（Retrorsine）、克氏千里光堿（Senkirkine）、千里光 菲 林（Seneciphylline）、 千 里光 寧（Senecionine）、 野 百 合 堿（Crotaline），純度均為99%，德國Dr.Ehrenstorfer生產(chǎn)；色譜級乙腈、甲醇、甲酸88%、乙酸銨，美國Fisher生產(chǎn)；試驗(yàn)用水為屈臣氏蒸餾水；強(qiáng)陽離子固相萃取柱（SCX 3mL/60mg），美國Waters生產(chǎn)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密稱取各標(biāo)準(zhǔn)品20 mg（精確至0.1 mg），用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至20 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制成濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于-18℃條件下保存，有效期3個(gè)月。用0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液混合溶液（9+1）稀釋，搖勻，作為系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度為1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、200.0 ng/mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.4 樣品前處理

稱取1.0 g蜂蜜樣品（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入10 mL0.1%甲酸水溶液，于渦旋混合器上混合提取5 min，再超聲5 min后，于8 000 r/min離心5 min，取上清液，作待凈化液。SCX固相萃取柱依次用甲醇4 mL、水3 mL活化，保持柱體濕潤。取待凈化液1 mL過柱，依次用水3 mL、甲醇3 mL淋洗，抽干，用6 mL5%氨化甲醇溶液洗脫，收集洗脫液，將洗脫液在氮?dú)饬飨麓蹈?，? mL0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液混合溶液（9+1）溶解殘?jiān)?，?jīng)0.22 μm有機(jī)相濾膜過濾后供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀分析測定。

1.5 測試條件

色譜柱：RRHD Eclipse PLUS C18，2.1 mm×100 mm，1.8 μm；流速：0.25 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5 μL；駐留時(shí)間：2 min；離子源：電噴霧正離子源（ESI+）；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM；毛細(xì)管電壓：4 000V；源溫度：300℃；碰撞氣：氮?dú)?.4 mL/min；錐孔氣：17 L/h。

2 測試結(jié)果與分析

2.1 加標(biāo)測試結(jié)果

加標(biāo)測試結(jié)果如表1所示。

表1 加標(biāo)測試結(jié)果

2.2 結(jié)果分析

通過表1可以得出，蜂蜜中5種生物堿含量在1.5～30 μg/kg，回收率在85%～105%，測試方法穩(wěn)定，回收良好。

[1]程莉，王丹，周爽，等.超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定蜂蜜中吡咯里西啶類生物堿[J].環(huán)境科學(xué)，2014（11）：1971-1977.

[2]呂辰，丁濤，馬昕，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蜂蜜中的5種雙稠吡咯啶類生物堿[J].色譜，2013（11）：1046-1050.