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        陜產(chǎn)細(xì)葉益母草中總生物堿的提取工藝研究

        2018-06-19 09:47:40侯敏娜何莉郭颯
        中醫(yī)藥信息 2018年3期
        關(guān)鍵詞:中總益母草生物堿

        侯敏娜,何莉,郭颯

        (陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院,陜西 咸陽(yáng) 712046)

        基金項(xiàng)目:2016年陜西省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.2961)

        作者簡(jiǎn)介:侯敏娜(1981-),女,碩士研究生,講師,主要研究方向:中草藥中活性物質(zhì)研究。

        收稿日期:2017-04-06

        修回日期:2017-05-01

        益母草(LeonurusjaponicusHoutt)是唇形科益母草屬1年生或2年生草本植物,其藥用部位多為益母草新鮮或干燥的地上部分,又稱(chēng)“莞蔚”。被歷代醫(yī)家譽(yù)為“血家圣藥”“經(jīng)產(chǎn)良藥”,是治療婦科疾病之要藥。《本草綱目》云:“益母草行經(jīng)養(yǎng)血,行血而不傷血,養(yǎng)血而不瘀血,誠(chéng)為血家之圣藥也。”活性成分主要有總生物堿,包括益母草堿和水蘇堿等,具有活血調(diào)經(jīng)、利尿消腫、抗炎鎮(zhèn)痛等多種生理活性[1-5]。益母草作為一種傳統(tǒng)的中藥,臨床應(yīng)用廣泛,但存在提取物中的活性成分含量低,藥材及制劑有效成分差異顯著。本次研究意在加快中藥現(xiàn)代化進(jìn)程,提高益母草資源利用效率,探索更先進(jìn)的提取工藝,使益母草劑型多樣化,充分利用益母草這一生物資源,現(xiàn)將研究情況報(bào)告如下。

        1 材料

        1.1 試劑及藥材

        益母草(自行收集于陜西延安,經(jīng)我院生藥教研室雷國(guó)蓮教授鑒定為益母草正品);雷氏銨鹽(北京華科盛精細(xì)化工產(chǎn)品貿(mào)易有限公司);95%乙醇(天津市河?xùn)|區(qū)紅巖試劑廠);丙酮(天津市鼎盛鑫化工有限公司);鹽酸(西安三浦化學(xué)試劑有限公司);水為純化水;其他試劑均為分析純。

        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備

        TU-1810紫外分光光度計(jì)(上海長(zhǎng)城制造有限公司);KQ5200DE超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);HH-2電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司);FW100粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司);RE-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。

        2 方法

        2.1 益母草中生物堿的含量測(cè)定方法

        本實(shí)驗(yàn)采用雷氏鹽比色法進(jìn)行測(cè)定[6-7]。原理是利用雷氏鹽在酸性介質(zhì)中可與大部分生物堿生成難溶于水的絡(luò)合物,將生物堿的硫氰酸鉻銨鹽沉淀溶于丙酮中,所得到的紫紅色溶液在波長(zhǎng)為510 nm處有最大吸收,可利用公式(1)。

        W=A·M·V/ε

        (1)

        其中,M表示益母草中含量較多的水蘇堿鹽酸鹽(C7H13NO2·HCl),相對(duì)分子質(zhì)量為179.63;ε表示硫氰酸鉻銨在丙酮中的克分子吸收系數(shù),為106.5;V表示溶解沉淀所取丙酮的毫升數(shù),為10 ml;測(cè)其吸光度A,經(jīng)計(jì)算可得到生物堿的含量W(mg),得率Y可由公式(2)計(jì)算。

        (2)

        2.2 含量測(cè)定[8-11]

        準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)干燥、粉碎、過(guò)80目篩的益母草粉10.0 g,加入一定濃度的適量0.5%鹽酸乙醇溶液,進(jìn)行超聲提取,過(guò)濾,濾液水浴蒸干,加入0.1 mol/L HCl溶解,過(guò)濾,用等濃度的5 ml HCl洗滌,定容于25 ml容量瓶中。移取6 ml于錐形瓶中,加入0.1 mol/L HCl 6 ml,緩慢滴加新配制的2%雷氏銨鹽溶液6 mL,置冰箱中過(guò)夜,抽濾,沉淀用10 ml冷水洗滌至溶液無(wú)色,抽干。沉淀加丙酮溶解并定容于10 ml容量瓶中,以丙酮為空白,在最大吸收波長(zhǎng)為510 nm處測(cè)定吸光度,代入公式(1)、(2)中計(jì)算,可得到益母草中總生物堿的得率。

        2.3 單因素考察

        超聲波輔助提取益母草中生物堿的影響因素主要包括超聲時(shí)間、超聲溫度、超聲功率、料液比、乙醇濃度、pH值等。本次研究考察超聲時(shí)間、乙醇濃度和料液比這三個(gè)因素。

        2.3.1 乙醇濃度對(duì)益母草中生物堿得率的影響

        稱(chēng)取干燥、粉碎、過(guò)80目篩的益母草粉5份,每份10 g,置于250 ml錐形瓶中,依次加入200 ml濃度為50%、60%、70%、80%、90%的0.5%鹽酸乙醇溶液,進(jìn)行超聲提取,超聲功率為180 W,超聲溫度為40℃,超聲時(shí)間為30 min??疾煲掖紳舛葘?duì)益母草生物堿得率的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1。

        圖1 乙醇濃度對(duì)益母草生物堿得率的影響

        由圖1可知,益母草生物堿的得率,隨著乙醇濃度的增加,不斷增大。當(dāng)乙醇濃度大于70%時(shí)得率也在繼續(xù)增加,但增加的幅度很小。所以,考慮到節(jié)省溶劑資源等原因,我們選取70%乙醇作為益母草生物堿乙醇提取的溶劑濃度。

        2.3.2 料液比對(duì)益母草中生物堿得率的影響

        稱(chēng)取干燥、粉碎、過(guò)80目篩的益母草粉5份,每份10 g,分別加入70%的0.5%鹽酸乙醇溶液140 ml、160 ml、180 ml、200 ml、220 ml,進(jìn)行超聲提取,超聲功率定為180 W,超聲溫度為40℃,超聲時(shí)間為30 min??疾炝弦罕葘?duì)益母草生物堿得率的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。

        圖2 料液比對(duì)益母草生物堿得率的影響

        由圖2可知,益母草生物堿得率隨著料液比的增加呈不斷增大趨勢(shì)。當(dāng)達(dá)到18 BV時(shí)得率也在繼續(xù)增加,但增加的幅度很小。所以,綜合考慮各方面原因,選取料液比為18 BV,作為益母草生物堿乙醇提取的溶劑用量。

        2.3.3 超聲時(shí)間對(duì)益母草中生物堿得率的影響

        稱(chēng)取干燥、粉碎、過(guò)80目篩的益母草粉5份,每份10 g,分別加入70%的0.5%鹽酸乙醇180 ml,進(jìn)行超聲提取,超聲功率為180 W,超聲溫度為40℃,超聲時(shí)間分別為30 min、35 min、40 min、45 min、50 min??疾斐晻r(shí)間對(duì)益母草生物堿得率的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3。

        圖3 超聲時(shí)間對(duì)益母草生物堿得率的影響

        由圖3可知,在30~50 min內(nèi),隨著時(shí)間的增加,得率也增加,但時(shí)間超過(guò)40 min后,隨著時(shí)間繼續(xù)增加,得率開(kāi)始逐漸降低,表明益母草生物堿得率并不會(huì)隨著時(shí)間的增加而無(wú)限增加,而在40 min時(shí)達(dá)到最高值。

        2.4 響應(yīng)曲面優(yōu)化

        2.4.1 響應(yīng)曲面優(yōu)選分析

        在單因素的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,根據(jù)因素水平表1,按照響應(yīng)曲面Box-Behnken的設(shè)計(jì)原理,共有17組實(shí)驗(yàn),其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1~2。

        表1 因素水平表

        表2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        對(duì)該模型進(jìn)行回歸分析,結(jié)果見(jiàn)表3。

        表3 方差分析表

        注:*P<0.05顯著;**P<0.01高度顯著;***P<0.001極其顯著

        通過(guò)Design-Expert8.0.6軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合,得到益母草生物堿得率對(duì)乙醇濃度(A),提取時(shí)間(B),料液比(C)的二次多元回歸方程。

        得率:

        Y=-2.503 13+0.013 475A+0.047 775B+0.135 69C+2.500 0E-005AB-8.750 00E-005AC-1.500 00E-004BC-8.750 00E-005A2-5.800 00E-004B2-3.375 00E-003C2

        對(duì)該模型數(shù)據(jù),進(jìn)行回歸分析,結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知,模型P值(<0.000 1)及F值(119.70>0.05),說(shuō)明本次實(shí)驗(yàn)選用的二次多項(xiàng)式模型極為顯著。同時(shí)失擬項(xiàng)F=0.317 7>0.05,表明失擬項(xiàng)不顯著,可以對(duì)響應(yīng)值進(jìn)行預(yù)測(cè),實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)合理正確。

        2.4.2 響應(yīng)曲面分析與優(yōu)化

        根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,使用Design-Expert 8.0.6軟件,繪制相應(yīng)的響應(yīng)曲面圖及等高線圖,見(jiàn)圖4、圖5、圖6。

        圖4 乙醇濃度與超聲時(shí)間的三維圖和等高線

        圖4為乙醇濃度與超聲時(shí)間對(duì)益母草中總生物堿得率的響應(yīng)曲面圖,由圖4可以看出,當(dāng)料液比一定時(shí),益母草中總生物堿得率隨著乙醇濃度增加呈增加趨勢(shì),但達(dá)到70%時(shí),坡面增加的幅度較緩;超聲時(shí)間不斷延長(zhǎng),得率也在上升,但是在40 min后,呈下降趨勢(shì),且整個(gè)坡度比乙醇濃度的坡面要陡,說(shuō)明得率受超聲時(shí)間二次項(xiàng)的影響比乙醇濃度大。由圖4可以確定最佳參數(shù)范圍:乙醇濃度72%~76%,超聲時(shí)間38~42 min。在此范圍內(nèi)益母草中總生物堿得率最大。

        圖5 乙醇濃度和料液比的三維圖和等高線

        圖5為料液比和乙醇濃度對(duì)益母草中總生物堿得率的響應(yīng)曲面圖,由圖5可以看出料液比的坡面比乙醇濃度的坡面陡,表明料液比的二次項(xiàng)對(duì)益母草中總生物堿得率具有明顯影響,而乙醇濃度對(duì)其影響較小。由圖5可以確定兩因素最佳參數(shù)范圍:乙醇濃度72%~76%,料液比為1∶17~1∶19。在此范圍內(nèi)的益母草中總生物堿得率最大。

        圖6 料液比與超聲時(shí)間的三維圖和等高線

        圖6為料液比與超聲時(shí)間對(duì)益母草中總生物堿得率的響應(yīng)曲面圖,由圖6可以看出料液比與超聲時(shí)間的坡面都比較陡,說(shuō)明他們的二次項(xiàng)對(duì)益母草中總生物堿得率的影響都比較顯著,等高線趨于橢圓,說(shuō)明超聲時(shí)間與料液比的交互項(xiàng)對(duì)益母草中總生物堿得率的影響顯著。由圖6可以確定兩因素的最佳參數(shù)范圍:料液比1∶17~1∶19,超聲時(shí)間38~42 min。

        由此可知,優(yōu)選的益母草中總生物堿提取工藝為:料液比為1∶18.25,提取時(shí)間為40.14 min,乙醇濃度為73.63%,在此條件下,益母草中總生物堿預(yù)測(cè)值為0.196 53%。綜合考慮各方面因素,將實(shí)驗(yàn)參數(shù)修正為:料液比為1∶18,提取時(shí)間為40 min,乙醇濃度為74%,平行3次實(shí)驗(yàn),經(jīng)計(jì)算平均得率為0.195 27%,與理論值相差0.001 26%。因此,本方法確定的益母草中總生物堿提取工藝參數(shù)可靠,并且有一定的實(shí)際參考價(jià)值。

        3 結(jié)論

        通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn),運(yùn)用響應(yīng)曲面法,優(yōu)化益母草中總生物堿的超聲提取工藝參數(shù),經(jīng)綜合考慮修正,最終優(yōu)化條件為:料液比為1:18,提取時(shí)間為40 min,乙醇濃度為74%,此時(shí)益母草中總生物堿得率為0.195 27%。通過(guò)回歸分析及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),證明了該響應(yīng)面法的合理性、可行性,可為益母草資源的開(kāi)發(fā)及合理利用提供依據(jù)。

        [1] 周本宏,馬郁文,羅毅.超聲提取益母草總堿的工藝優(yōu)選[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2006,25(5): 451-452.

        [2] ZHOU Ben-hong,MA Yu-wen,LUO Yi.Technology Optimizationfor U ltrasonic Ectraction of Total Alkaloids from Leonurus[J].Herald of Medicine,2006,25(5): 451-452.

        [3] 李煥杰,孟祥云.不同溶劑及方法對(duì)益母草生物堿含量影響[J].陜西中醫(yī),2008,29(5):607-608.

        [4] 徐冰,李寶泉,馬勇.益母草有效成分的研究進(jìn)展[J].天津藥學(xué),2003,15(3):68-70.

        [5] 李萬(wàn),蔡亞玲.益母草總生物堿的藥理實(shí)驗(yàn)研究[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2002,31(2):168-170.

        [6] 徐小華,杜紹亮,楊云.益母草中總生物堿的提取及含量測(cè)定[J].河南科學(xué),2008,26(12):1481-1483.

        [7] 李林.水蘇堿的研究概況[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(3):930-931.

        [8] 嚴(yán)優(yōu)芍.益母草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、提取工藝和劑型的改進(jìn)研究[D].廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué),2005:19-23.

        [9] 晁志,王厄舟,周秀佳.益母草藥材中生物堿含量與產(chǎn)地生態(tài)環(huán)境的關(guān)系[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,20(6):504-506.

        [10] 周文華,楊輝榮,岳慶磊.生物堿提取和分離方法的研究新進(jìn)展[J].當(dāng)代化工,2003,5(2):54-57.

        [11] 喻朝陽(yáng),王曉琳.生物堿提取與純化技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展[J].化工進(jìn)展,2006,25(3):259-261.

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