方佳 陳鳳燕

[摘要]目的 探析P16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染檢測(cè)在宮頸癌前病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性。方法 選擇2016年5月～2017年3月我院收治的宮頸癌前病變患者900例，所有患者均接受P16/Ki-67免疫化學(xué)雙染法檢測(cè)、液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）、人乳頭瘤病毒DNA（HPVDNA）檢測(cè)，應(yīng)用P16/Ki-67免疫化學(xué)雙染法檢測(cè)宮頸癌前病變的陽(yáng)性率，以病理活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估P16/Ki-67免疫化學(xué)雙染法、TCT法檢測(cè)宮頸癌前病變的準(zhǔn)確性。結(jié)果 900例患者，以病理活檢為金標(biāo)準(zhǔn)（陽(yáng)性54例），發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法的特異性為82.3%（696/846），敏感性為92.6%（50/54），TCT檢查法的特異性為68.6%（580/846），敏感性為62.9%（34/54），兩種檢查方式比較，p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法的特異性、敏感性顯著高于TCT法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 P16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染檢測(cè)可提高宮頸癌前病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性，效果確切，值得臨床推廣。

[關(guān)鍵詞]癌前病變；宮頸癌；化學(xué)雙染法；P16/Ki-67；細(xì)胞免疫學(xué)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）4（c）-0125-03

Diagnostic value of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining for cervical precancerous lesions

FANG Jia CHEN Feng-yan

Department of Pathology，People′s Hospital of Puning City，Guangdong Province，Puning 515300，China

[Abstract]Objective To explore the application of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining in the diagnosis of cervical precancerous lesions for its accuracy.Methods A total of 900 patients with cervical precancerous lesions who were treated in our hospital from May 2016 to March 2017 were selected.Each patient was provided with P16/Ki-67 immunochemistry double staining assay and thinprep cytologic test （TCT） for human papilloma virus DNA.The positive rate of cervical precancerous lesions was detected using P16/Ki-67 immunochemistry double staining method.The pathological biopsy results were set as the gold standard，the accuracy of P16/Ki-67 immunochemistry double staining and TCT detecting cervical precancerous lesions was assessed.Results Among 900 participants，54 subjects were examined as positivity by pathological biopsy.The specificity and sensitivity of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining for cervical precancerous lesions were 82.3% （696/846） and 92.6% （50/54）.By TCT，they were 68.6% （580/846） and 62.9% （34/54） respectively.Compared with the two examination methods，the specificity and sensitivity of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining were superior to those by TCT with significant differences（P<0.05）.Conclusion The detection of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining can improve the diagnostic accuracy of cervical precancerous lesions in a definite effect，which is worthy of clinical promotion.

[Key words]Precancerous lesions；Cervical cancer；Chemical double staining；P16/Ki-67；Cellular immunology

宮頸原位癌的高發(fā)群體為30～35歲女性，浸潤(rùn)癌的高發(fā)群體為45～55歲女性[1]。宮頸癌的發(fā)病與吸煙、感染滴蟲(chóng)、單純皰疹病毒Ⅱ型、沙眼衣原體、多產(chǎn)、多孕、初產(chǎn)年齡小、性伴侶過(guò)多、感染人乳頭瘤病毒（HPV）等因素密切相關(guān)。宮頸癌早期無(wú)特異性臨床表現(xiàn)，病情進(jìn)展可出現(xiàn)排液、陰道流血等特征。研究表明，HPV是導(dǎo)致宮頸癌的因素之一，但只有持續(xù)長(zhǎng)期感染HPV高危型病毒會(huì)引發(fā)高級(jí)別宮頸癌上皮內(nèi)瘤變，進(jìn)展為宮頸癌，同時(shí)通過(guò)新技術(shù)、新檢測(cè)方式有助于提高宮頸癌篩查的準(zhǔn)確性及有效性[2]。宮頸癌的細(xì)胞學(xué)篩查方式在實(shí)際臨床操作中存在重復(fù)性差、靈敏度較低，檢查結(jié)果存在一定的假陽(yáng)性率及假陰性率，P16/Ki-67雙染檢測(cè)輔助細(xì)胞學(xué)技術(shù)診斷有助于降低陰道鏡的轉(zhuǎn)診率。本研究探析P16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染檢測(cè)在宮頸癌前病變?cè)\斷準(zhǔn)確性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年5月～2017年3月來(lái)我院就診的宮頸癌前病變患者900例，均予以宮頸液基細(xì)胞學(xué)（TCT）檢查、HPV檢查，病理活檢結(jié)果確診，每位女性均接受P16/Ki-67免疫化學(xué)雙染法檢測(cè)、TCT檢查、HPVDNA檢測(cè)，根據(jù)世界衛(wèi)生組織2014年《女性生殖器官腫瘤分類(lèi)》標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)，年齡23～59歲，平均（40.2±3.4）歲。文化程度：高中及以上學(xué)歷者535例，初中及以下學(xué)歷365例。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期、生理期、接受盆腔放射療法患者。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，參與研究者均知情同意。

1.2方法

P16/Ki-67細(xì)胞學(xué)雙染方法由福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司提供的細(xì)胞學(xué)P16/Ki-67雙染試劑盒。細(xì)胞薄片置于95%的乙醇中30 min，流動(dòng)水沖洗1 min，應(yīng)用EDTA8.0系統(tǒng)在95°C溫度下熱修復(fù)標(biāo)本20 min，滴加100 ul過(guò)氧化物酶，室內(nèi)常溫孵育10 min，滴加Ki-67抗體、P16抗體組合，室溫下孵育1 h，滴加100 μl顯色劑DAB，常溫下5 min孵育。蘇木素染色，應(yīng)用乙醇梯度脫水，中性樹(shù)膠固封。進(jìn)行HPVDNA檢驗(yàn)，TCT檢查，進(jìn)行液基細(xì)胞學(xué)專(zhuān)用毛刷在宮頸內(nèi)交界和鱗狀上皮處采集細(xì)胞，細(xì)胞洗涮至TCT專(zhuān)用取樣瓶?jī)?nèi)，TCT制片機(jī)制作為薄層涂片，經(jīng)巴氏染色后予以鏡檢。以病理活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3檢查評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)及觀察指標(biāo)

比較p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染檢測(cè)法、TCT檢測(cè)法的特異度、靈敏度。特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性+假陽(yáng)性）例數(shù)×100%，靈敏度=真陽(yáng)性例數(shù)/（真陽(yáng)性+假陰性）例數(shù)×100%。P16/Ki-67細(xì)胞學(xué)雙染檢測(cè)結(jié)果評(píng)估[3]：Ki-67呈黃色，位于細(xì)胞核上，細(xì)胞核部分交叉反應(yīng)呈棕褐色。p16呈紅色，位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核上。陽(yáng)性結(jié)果為雙染細(xì)胞>1個(gè)出現(xiàn)在染色片內(nèi)；雙染細(xì)胞細(xì)胞核為棕褐色或黃色，而細(xì)胞質(zhì)呈紅色。陰性結(jié)果為染色片內(nèi)出現(xiàn)單染細(xì)胞，未發(fā)現(xiàn)雙染細(xì)胞。單染細(xì)胞為紅色細(xì)胞質(zhì)，棕褐色或黃色細(xì)胞核。兩位病理醫(yī)師閱片（巴氏染色涂片），良性或正常為陰性，異常腺上皮細(xì)胞、鱗狀上皮浸潤(rùn)癌、高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變，包含原位癌、中、重度鱗狀上皮不典型增生，低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變、不排除高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變，無(wú)法明確意義的非典型鱗狀細(xì)胞均為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)進(jìn)行SPSS 18.0軟件系統(tǒng)處理分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

900例患者，以病理活檢為金標(biāo)準(zhǔn)（陽(yáng)性54例），p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法的特異性為82.3%（696/846），敏感性為92.6（50/54），TCT檢查法的特異性為68.6%（580/846），敏感性為62.9%（34/54），p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法的特異性、敏感性顯著高于TCT法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1、2、3）。

表1 p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法與病理診斷宮頸癌前病變的診斷準(zhǔn)確性評(píng)估（n）

表2 TCT法與病理診斷宮頸癌前病變的診斷準(zhǔn)確性評(píng)估（n）

表3 p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法與TCT法特異性、靈敏性的比較[%（n1/n2）]

3討論

目前，較多發(fā)達(dá)國(guó)家應(yīng)用巴氏檢查或常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查法可降低宮頸癌的發(fā)病率。約有99%的宮頸癌患者與高危型病毒密切相關(guān)（HR-HPV）[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，從起初感染HR-HPV到進(jìn)展為宮頸癌最少不低于8年，HR-HPV陰性的女性在5～7年內(nèi)不會(huì)進(jìn)展為宮頸癌[5]。研究指出半年后再行細(xì)胞學(xué)檢查只檢測(cè)到部分高級(jí)別宮頸鱗狀上皮病變[6]。其中約有1/3的高級(jí)別宮頸鱗狀上皮病變持續(xù)感染最終診斷HR-HPV，HR-HPV多次檢測(cè)或重復(fù)細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)對(duì)陰道鏡轉(zhuǎn)診率的下降效果不佳[7]。目前，臨床醫(yī)學(xué)已應(yīng)用新型輔助檢查方式提高宮頸癌及癌前病變檢查的準(zhǔn)確性[8]。有已發(fā)生癌變或出現(xiàn)癌變趨勢(shì)的細(xì)胞核酸增生異常，在細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)變化前已經(jīng)出現(xiàn)了核酸變化[9-10]。宮頸上皮DNA非整倍體缺少可用于評(píng)估臨床預(yù)后。以往文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)DNA倍體的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值具有一定差異性，可能與標(biāo)本的數(shù)量、標(biāo)本的選擇密切相關(guān)[11]。

本研究探析輔助宮頸癌前病變?cè)\斷應(yīng)用P16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染檢測(cè)法的準(zhǔn)確性，結(jié)果顯示，p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法的特異性為82.3%（696/846），敏感性為92.6（50/54），TCT檢查法的特異性為68.6%（580/846），敏感性為62.9%（34/54），p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法的特異性、敏感性顯著高于TCT法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與宋艷等[12]的研究結(jié)果大體一致，宮頸癌前病變的細(xì)胞學(xué)檢查是檢測(cè)其形態(tài)學(xué)，如形態(tài)改變則細(xì)胞學(xué)檢查則會(huì)出現(xiàn)一定的誤差性，重復(fù)診斷的結(jié)果不佳[13]。本研究結(jié)果顯示，以病理活檢為金標(biāo)準(zhǔn)，p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法的檢查準(zhǔn)確率與病理活檢的準(zhǔn)確率，均超過(guò)90%以上兩者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而TCT的檢查陽(yáng)性率為62.9%（34例）顯著低于病理活檢及p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法，p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法的檢查的特異性及敏感性更高，提示p16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染法和病理活檢的檢查準(zhǔn)確性更高，且檢查方式對(duì)機(jī)體無(wú)創(chuàng)傷性[14]。臨床已用單染Ki-67/P16法輔助檢測(cè)宮頸鱗狀上皮病變組織學(xué)，但需與組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)相結(jié)合，用于鑒別宮頸鱗狀上皮萎縮性變化、反應(yīng)性變化、化生或病變[15]。過(guò)去應(yīng)用P16或Ki-67細(xì)胞單染評(píng)估結(jié)果準(zhǔn)確性較低，P16可用于評(píng)估宮頸癌Ⅰ級(jí)的預(yù)后[16]。本研究結(jié)果顯示，P16不僅在異常細(xì)胞上呈局限性表達(dá)，同時(shí)在健康的子宮化生、柱狀、內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi)表達(dá)均正常。P16過(guò)度表達(dá)阻滯細(xì)胞周期，細(xì)胞標(biāo)本顯示二者為雙標(biāo)蛋白表達(dá)方式[17]。單個(gè)癌細(xì)胞會(huì)通過(guò)HPV基因蛋白可通過(guò)P16/Ki-67的雙陽(yáng)性表達(dá)調(diào)控細(xì)胞周期[18-19]。在DNA倍體分析基礎(chǔ)上，有可重復(fù)的細(xì)胞學(xué)制片雙染P16/Ki-67可促使一過(guò)性感染的假陽(yáng)性下降，可降低宮頸活檢及陰道鏡的創(chuàng)傷性檢查，提高高級(jí)別宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，降低患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)及心理壓力[20]。

綜上所述，P16/Ki-67免疫細(xì)胞化學(xué)雙染檢測(cè)可提高宮頸癌前病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性，效果確切，值得臨床推廣。

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（收稿日期：2018-01-23 本文編輯：崔建中）