方佳 陳鳳燕

[摘要]目的 探析P16/Ki-67免疫細胞化學雙染檢測在宮頸癌前病變診斷的準確性。方法 選擇2016年5月～2017年3月我院收治的宮頸癌前病變患者900例，所有患者均接受P16/Ki-67免疫化學雙染法檢測、液基細胞學檢查（TCT）、人乳頭瘤病毒DNA（HPVDNA）檢測，應用P16/Ki-67免疫化學雙染法檢測宮頸癌前病變的陽性率，以病理活檢結果為金標準，評估P16/Ki-67免疫化學雙染法、TCT法檢測宮頸癌前病變的準確性。結果 900例患者，以病理活檢為金標準（陽性54例），發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法的特異性為82.3%（696/846），敏感性為92.6%（50/54），TCT檢查法的特異性為68.6%（580/846），敏感性為62.9%（34/54），兩種檢查方式比較，p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法的特異性、敏感性顯著高于TCT法，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 P16/Ki-67免疫細胞化學雙染檢測可提高宮頸癌前病變診斷的準確性，效果確切，值得臨床推廣。

[關鍵詞]癌前病變；宮頸癌；化學雙染法；P16/Ki-67；細胞免疫學

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）4（c）-0125-03

Diagnostic value of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining for cervical precancerous lesions

FANG Jia CHEN Feng-yan

Department of Pathology，People′s Hospital of Puning City，Guangdong Province，Puning 515300，China

[Abstract]Objective To explore the application of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining in the diagnosis of cervical precancerous lesions for its accuracy.Methods A total of 900 patients with cervical precancerous lesions who were treated in our hospital from May 2016 to March 2017 were selected.Each patient was provided with P16/Ki-67 immunochemistry double staining assay and thinprep cytologic test （TCT） for human papilloma virus DNA.The positive rate of cervical precancerous lesions was detected using P16/Ki-67 immunochemistry double staining method.The pathological biopsy results were set as the gold standard，the accuracy of P16/Ki-67 immunochemistry double staining and TCT detecting cervical precancerous lesions was assessed.Results Among 900 participants，54 subjects were examined as positivity by pathological biopsy.The specificity and sensitivity of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining for cervical precancerous lesions were 82.3% （696/846） and 92.6% （50/54）.By TCT，they were 68.6% （580/846） and 62.9% （34/54） respectively.Compared with the two examination methods，the specificity and sensitivity of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining were superior to those by TCT with significant differences（P<0.05）.Conclusion The detection of P16/Ki-67 immunocytochemistry double staining can improve the diagnostic accuracy of cervical precancerous lesions in a definite effect，which is worthy of clinical promotion.

[Key words]Precancerous lesions；Cervical cancer；Chemical double staining；P16/Ki-67；Cellular immunology

宮頸原位癌的高發(fā)群體為30～35歲女性，浸潤癌的高發(fā)群體為45～55歲女性[1]。宮頸癌的發(fā)病與吸煙、感染滴蟲、單純皰疹病毒Ⅱ型、沙眼衣原體、多產(chǎn)、多孕、初產(chǎn)年齡小、性伴侶過多、感染人乳頭瘤病毒（HPV）等因素密切相關。宮頸癌早期無特異性臨床表現(xiàn)，病情進展可出現(xiàn)排液、陰道流血等特征。研究表明，HPV是導致宮頸癌的因素之一，但只有持續(xù)長期感染HPV高危型病毒會引發(fā)高級別宮頸癌上皮內(nèi)瘤變，進展為宮頸癌，同時通過新技術、新檢測方式有助于提高宮頸癌篩查的準確性及有效性[2]。宮頸癌的細胞學篩查方式在實際臨床操作中存在重復性差、靈敏度較低，檢查結果存在一定的假陽性率及假陰性率，P16/Ki-67雙染檢測輔助細胞學技術診斷有助于降低陰道鏡的轉(zhuǎn)診率。本研究探析P16/Ki-67免疫細胞化學雙染檢測在宮頸癌前病變診斷準確性，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年5月～2017年3月來我院就診的宮頸癌前病變患者900例，均予以宮頸液基細胞學（TCT）檢查、HPV檢查，病理活檢結果確診，每位女性均接受P16/Ki-67免疫化學雙染法檢測、TCT檢查、HPVDNA檢測，根據(jù)世界衛(wèi)生組織2014年《女性生殖器官腫瘤分類》標準分級，年齡23～59歲，平均（40.2±3.4）歲。文化程度：高中及以上學歷者535例，初中及以下學歷365例。排除標準：妊娠期、生理期、接受盆腔放射療法患者。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準，參與研究者均知情同意。

1.2方法

P16/Ki-67細胞學雙染方法由福州邁新生物技術開發(fā)公司提供的細胞學P16/Ki-67雙染試劑盒。細胞薄片置于95%的乙醇中30 min，流動水沖洗1 min，應用EDTA8.0系統(tǒng)在95°C溫度下熱修復標本20 min，滴加100 ul過氧化物酶，室內(nèi)常溫孵育10 min，滴加Ki-67抗體、P16抗體組合，室溫下孵育1 h，滴加100 μl顯色劑DAB，常溫下5 min孵育。蘇木素染色，應用乙醇梯度脫水，中性樹膠固封。進行HPVDNA檢驗，TCT檢查，進行液基細胞學專用毛刷在宮頸內(nèi)交界和鱗狀上皮處采集細胞，細胞洗涮至TCT專用取樣瓶內(nèi)，TCT制片機制作為薄層涂片，經(jīng)巴氏染色后予以鏡檢。以病理活檢結果為金標準，評估p16/Ki-67免疫細胞化學雙染檢測結果的準確性。

1.3檢查評估標準及觀察指標

比較p16/Ki-67免疫細胞化學雙染檢測法、TCT檢測法的特異度、靈敏度。特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性+假陽性）例數(shù)×100%，靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陰性）例數(shù)×100%。P16/Ki-67細胞學雙染檢測結果評估[3]：Ki-67呈黃色，位于細胞核上，細胞核部分交叉反應呈棕褐色。p16呈紅色，位于細胞質(zhì)、細胞核上。陽性結果為雙染細胞>1個出現(xiàn)在染色片內(nèi)；雙染細胞細胞核為棕褐色或黃色，而細胞質(zhì)呈紅色。陰性結果為染色片內(nèi)出現(xiàn)單染細胞，未發(fā)現(xiàn)雙染細胞。單染細胞為紅色細胞質(zhì)，棕褐色或黃色細胞核。兩位病理醫(yī)師閱片（巴氏染色涂片），良性或正常為陰性，異常腺上皮細胞、鱗狀上皮浸潤癌、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變，包含原位癌、中、重度鱗狀上皮不典型增生，低級別鱗狀上皮內(nèi)病變、不排除高級別鱗狀上皮內(nèi)病變，無法明確意義的非典型鱗狀細胞均為陽性。

1.4統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)進行SPSS 18.0軟件系統(tǒng)處理分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

900例患者，以病理活檢為金標準（陽性54例），p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法的特異性為82.3%（696/846），敏感性為92.6（50/54），TCT檢查法的特異性為68.6%（580/846），敏感性為62.9%（34/54），p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法的特異性、敏感性顯著高于TCT法，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1、2、3）。

表1 p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法與病理診斷宮頸癌前病變的診斷準確性評估（n）

表2 TCT法與病理診斷宮頸癌前病變的診斷準確性評估（n）

表3 p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法與TCT法特異性、靈敏性的比較[%（n1/n2）]

3討論

目前，較多發(fā)達國家應用巴氏檢查或常規(guī)細胞學檢查法可降低宮頸癌的發(fā)病率。約有99%的宮頸癌患者與高危型病毒密切相關（HR-HPV）[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，從起初感染HR-HPV到進展為宮頸癌最少不低于8年，HR-HPV陰性的女性在5～7年內(nèi)不會進展為宮頸癌[5]。研究指出半年后再行細胞學檢查只檢測到部分高級別宮頸鱗狀上皮病變[6]。其中約有1/3的高級別宮頸鱗狀上皮病變持續(xù)感染最終診斷HR-HPV，HR-HPV多次檢測或重復細胞學檢驗對陰道鏡轉(zhuǎn)診率的下降效果不佳[7]。目前，臨床醫(yī)學已應用新型輔助檢查方式提高宮頸癌及癌前病變檢查的準確性[8]。有已發(fā)生癌變或出現(xiàn)癌變趨勢的細胞核酸增生異常，在細胞形態(tài)出現(xiàn)變化前已經(jīng)出現(xiàn)了核酸變化[9-10]。宮頸上皮DNA非整倍體缺少可用于評估臨床預后。以往文獻發(fā)現(xiàn)檢測DNA倍體的陽性預測值具有一定差異性，可能與標本的數(shù)量、標本的選擇密切相關[11]。

本研究探析輔助宮頸癌前病變診斷應用P16/Ki-67免疫細胞化學雙染檢測法的準確性，結果顯示，p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法的特異性為82.3%（696/846），敏感性為92.6（50/54），TCT檢查法的特異性為68.6%（580/846），敏感性為62.9%（34/54），p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法的特異性、敏感性顯著高于TCT法，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），與宋艷等[12]的研究結果大體一致，宮頸癌前病變的細胞學檢查是檢測其形態(tài)學，如形態(tài)改變則細胞學檢查則會出現(xiàn)一定的誤差性，重復診斷的結果不佳[13]。本研究結果顯示，以病理活檢為金標準，p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法的檢查準確率與病理活檢的準確率，均超過90%以上兩者比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而TCT的檢查陽性率為62.9%（34例）顯著低于病理活檢及p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法，p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法的檢查的特異性及敏感性更高，提示p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法和病理活檢的檢查準確性更高，且檢查方式對機體無創(chuàng)傷性[14]。臨床已用單染Ki-67/P16法輔助檢測宮頸鱗狀上皮病變組織學，但需與組織形態(tài)學檢測相結合，用于鑒別宮頸鱗狀上皮萎縮性變化、反應性變化、化生或病變[15]。過去應用P16或Ki-67細胞單染評估結果準確性較低，P16可用于評估宮頸癌Ⅰ級的預后[16]。本研究結果顯示，P16不僅在異常細胞上呈局限性表達，同時在健康的子宮化生、柱狀、內(nèi)膜細胞內(nèi)表達均正常。P16過度表達阻滯細胞周期，細胞標本顯示二者為雙標蛋白表達方式[17]。單個癌細胞會通過HPV基因蛋白可通過P16/Ki-67的雙陽性表達調(diào)控細胞周期[18-19]。在DNA倍體分析基礎上，有可重復的細胞學制片雙染P16/Ki-67可促使一過性感染的假陽性下降，可降低宮頸活檢及陰道鏡的創(chuàng)傷性檢查，提高高級別宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的陽性預測值，降低患者的經(jīng)濟負擔及心理壓力[20]。

綜上所述，P16/Ki-67免疫細胞化學雙染檢測可提高宮頸癌前病變診斷的準確性，效果確切，值得臨床推廣。

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（收稿日期：2018-01-23 本文編輯：崔建中）