曾燕霞 王四新 張 偉 劉 輝 張董燕 王雅民 季海峰 王 晶

(北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100097)

仔豬斷奶后的腹瀉可嚴(yán)重影響仔豬生長(zhǎng)性能和成活率，而仔豬飼養(yǎng)水平直接影響著養(yǎng)豬生產(chǎn)者的經(jīng)濟(jì)效益。因此，研究預(yù)防和緩解仔豬腹瀉對(duì)養(yǎng)豬生產(chǎn)者至關(guān)重要。乳酸菌作為一種新型的飼料添加劑，是目前研究較多且在動(dòng)物生產(chǎn)中發(fā)揮作用較好的一類(lèi)益生菌。乳酸菌具有調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、減少致病菌對(duì)腸道的感染等益生功能，可在一定程度上緩解致病菌等引起的仔豬腹瀉[1-2]。研究表明，乳酸菌的益生功能主要通過(guò)調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道屏障功能來(lái)實(shí)現(xiàn)[3-6]。豬腸道上皮細(xì)胞(IPEC-J2細(xì)胞)是維持其腸道屏

障功能的主要執(zhí)行者，其完整性和免疫調(diào)節(jié)功能是發(fā)揮其屏障作用的重要條件[7]。已有研究表明，不同菌株的乳酸菌對(duì)仔豬腸道細(xì)胞完整性有保護(hù)作用，能夠緩解脂多糖等引起的腸道細(xì)胞損傷，同時(shí)還能抑制有害菌引起的細(xì)胞炎癥反應(yīng)[8-9]。但目前豬源植物乳桿菌對(duì)IPEC-J2細(xì)胞影響的報(bào)道還較少。因此，本研究以IPEC-J2細(xì)胞為體外培養(yǎng)模型，研究植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞形態(tài)、存活和免疫應(yīng)答的影響，為其作用機(jī)理研究和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌株和細(xì)胞

本試驗(yàn)所用的豬源植物乳桿菌由北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究室分離自健康仔豬腸道，該菌株已保藏于微生物菌種保藏中心，分類(lèi)命名為植物乳桿菌ZLP001，保藏號(hào)為CGMCCNo.7370；大腸桿菌為產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(enteroinvasiveEscherichiacoli, ETEC)，血清型為O149∶K91∶K88ac；IPEC-J2細(xì)胞為仔豬腸道上皮細(xì)胞，購(gòu)自廣州吉妮歐生物科技有限公司。

1.1.2 主要試劑和儀器

主要試劑：DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基、熱滅活胎牛血清(FBS)、青/鏈霉素和0.25%胰酶-乙二胺四乙酸(EDTA)，均購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；吉姆薩染色液和4%臺(tái)盼藍(lán)染液，均購(gòu)自北京酷來(lái)搏(Coolaber)科技有限公司；Trizol試劑，購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；氯仿和異丙醇，均購(gòu)自北京化工廠(chǎng)；Quant cDNA第1鏈合成試劑盒、普通PCR試劑盒和SuperReal熒光定量預(yù)混試劑，均購(gòu)自天根生化科技有限公司。

主要儀器：HF151 UV CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，上海力申科學(xué)儀器有限公司；HZQ-F160全溫振蕩培養(yǎng)箱，哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；IX71倒置顯微鏡，日本OLYMPUS公司；TC20細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，美國(guó)Bio-Rad公司；熒光定量PCR Quant Studio 3，美國(guó)Thermo Fisher Scientic公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 IPEC-J2細(xì)胞的培養(yǎng)

IPEC-J2細(xì)胞采用75T培養(yǎng)瓶、DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)，并添加10% FBS、1%青/鏈霉素。將IPEC-J2細(xì)胞培養(yǎng)于5% CO2、95%相對(duì)濕度、37 ℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中，24 h換液1次。待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至80%～90%后用0.25%胰酶-EDTA消化，309×g離心5 min進(jìn)行傳代。細(xì)胞傳代3次后以5×105個(gè)/孔的量接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，此時(shí)所用培養(yǎng)液中除不含上述青/鏈霉素外，其他成分同傳代細(xì)胞培養(yǎng)液。待6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中細(xì)胞培養(yǎng)至單層細(xì)胞時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)[10]。

1.2.2 菌株的培養(yǎng)及菌體懸液的制備

1.2.2.1 菌株的培養(yǎng)

將植物乳桿菌凍存液以1%接種量接種于新鮮的液體乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基)中，37 ℃恒溫培養(yǎng)20 h，傳代2代備用。將大腸桿菌凍存液以1%接種量接于新鮮的液體溶菌肉湯培養(yǎng)基(LB培養(yǎng)基)中，37 ℃搖床培養(yǎng)8 h，傳代2代備用。

1.2.2.2 菌體懸液的制備

將生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期的植物乳桿菌和大腸桿菌經(jīng)3 300×g離心15 min，收集菌體。用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液(PBS，pH 7.2～7.4)洗滌2次后重懸于DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。通過(guò)顯微鏡計(jì)數(shù)和固體平板計(jì)數(shù)，將其制備成108CFU/mL的植物乳桿菌和107CFU/mL的大腸桿菌菌體懸液待用。

1.2.3 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞形態(tài)的影響

將IPEC-J2單層細(xì)胞用無(wú)菌PBS潤(rùn)洗2遍后，進(jìn)行以下處理：1)無(wú)處理的對(duì)照組；2)大腸桿菌處理組；3)植物乳桿菌處理組；3)植物乳桿菌+大腸桿菌處理組。分別處理1、2、3 h后，PBS清洗3遍，徹底洗去未黏附的菌體。之后用甲醇固定15 min，吉姆薩染液染色30 min。用蒸餾水清洗細(xì)胞2次后用倒置顯微鏡在200倍鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次[11]。

1.2.4 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞存活的影響

將IPEC-J2單層細(xì)胞用無(wú)菌PBS潤(rùn)洗2遍后，對(duì)IPEC-J2細(xì)胞的處理同1.2.3。分別處理1、2、3 h后，吸取上清于10 mL滅菌離心管內(nèi)。并用無(wú)菌PBS清洗細(xì)胞3遍，然后用300 μL 0.05%胰酶-EDTA對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化。終止消化后309×g離心5 min，棄上清，用500 μL DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)染色后在TC20細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次[11]。

1.2.5 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響

將IPEC-J2單層細(xì)胞用無(wú)菌PBS潤(rùn)洗2遍后，對(duì)IPEC-J2細(xì)胞的處理同1.2.3。處理結(jié)束后，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37 ℃分別培養(yǎng)1、2、3 h。培養(yǎng)結(jié)束后，棄上清，用無(wú)菌PBS清洗細(xì)胞3遍，6孔板每孔加入1 mL Trizol試劑，常溫下裂解5 min，吹打完全后轉(zhuǎn)移至1.5 mL無(wú)RNA酶離心管內(nèi)，-80 ℃保存。每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次。

按Trizol法提取細(xì)胞總RNA，接著按照Quant cDNA第1鏈合成試劑盒說(shuō)明書(shū)將其逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以cDNA為模板，按照普通PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行擴(kuò)增，摸索試驗(yàn)?zāi)康幕蚍磻?yīng)體系及程序，產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳鑒定。用于PCR的引物序列見(jiàn)表1。將普通PCR摸好反應(yīng)體系及程序的目的基因按照SuperReal熒光定量預(yù)混試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量熒光(real-time)PCR，用于檢測(cè)Toll樣模式識(shí)別受體(Toll-like receptors，TLRs)中Toll樣模式識(shí)別受體2(TLR2)、Toll樣模式識(shí)別受體6(TLR6)和NOD樣模式識(shí)別受體(NOD-like receptors，NLRs)中NOD樣模式識(shí)別受體1(NOD1)、NOD樣模式識(shí)別受體2(NOD2)以及細(xì)胞因子[白細(xì)胞介素-8(IL-8)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)]的mRNA相對(duì)表達(dá)量。

表1 用于PCR的引物序列

F：上游 forward；R：下游 reverse。

PCR反應(yīng)程序：95 ℃，5 min；95 ℃，30 s，退火(NOD1、NOD2為61 ℃，TNF-α為62.5 ℃，其余基因均為60 ℃)，30 s，72 ℃，20 s，32個(gè)循環(huán)；72 ℃，5 min。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2016初步整理后，采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，方差齊時(shí)用Tukey’s法進(jìn)行多重比較。P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。使用GraphPad Prism 5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞形態(tài)的影響

從圖1可以看出，正常的IPEC-J2細(xì)胞(對(duì)照組)由均勻的上皮樣細(xì)胞組成，細(xì)胞為不規(guī)則多邊形，互不重疊，呈鋪路石鑲嵌排列，細(xì)胞之間相互連接，細(xì)胞核呈卵圓狀，為典型的上皮樣單層細(xì)胞。從圖2可以看出，植物乳桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞1、2、3 h后，與對(duì)照組的正常IPEC-J2細(xì)胞形態(tài)相比，均未發(fā)生明顯變化。大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞1 h后，與對(duì)照組的正常IPEC-J2細(xì)胞形態(tài)相比，細(xì)胞出現(xiàn)了變小、邊緣化等微小變化；大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞2 h后，細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)了明顯的變化，即細(xì)胞皺縮變圓、染色質(zhì)濃縮、細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)很大的空泡、邊緣化、細(xì)胞形態(tài)不完整等；大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞3 h后，細(xì)胞形態(tài)受到嚴(yán)重?fù)p傷，甚至死亡脫落。植物乳桿菌與大腸桿菌共同處理IPEC-J2細(xì)胞1、2 h后，可以有效緩解大腸桿菌造成的細(xì)胞形態(tài)損傷；植物乳桿菌與大腸桿菌共同處理IPEC-J2細(xì)胞3 h后，植物乳桿菌雖可以緩解大腸桿菌引起的細(xì)胞形態(tài)損傷，但緩解作用沒(méi)有1、2 h明顯。

2.2 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞存活的影響

從圖3可以看出，植物乳桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞1、2、3 h后，細(xì)胞死亡率與對(duì)照組相比差異均不顯著(P>0.05)。大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞1、2、3 h后，細(xì)胞的死亡率均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，說(shuō)明大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞1、2、3 h會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞的存活。與大腸桿菌處理組相比，植物乳桿菌與大腸桿菌共同處理IPEC-J2細(xì)胞1、2 h后，可極顯著降低細(xì)胞死亡率(P<0.01)；植物乳桿菌與大腸桿菌共同處理IPEC-J2細(xì)胞3 h后，可顯著降低細(xì)胞死亡率(P<0.05)。

CONT：對(duì)照組 control group。下圖同。The same as below.

圖1正常的IPEC-J2細(xì)胞形態(tài)(1、2、3h)

Fig.1 The normal morphology of IPEC-J2 cells (1, 2 and 3 h, 200×)

ETEC：大腸桿菌處理組Escherichiacolitreated group；LP：植物乳桿菌處理組Lactobacillusplantarumtreated group；LP+ETEC：植物乳桿菌+大腸桿菌處理組Escherichiacoli+Lactobacillusplantarumtreated group。下圖同。The same as below.

圖2植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞形態(tài)的影響

Fig.2 Effects ofLactobacillusplantarumon morphology ofEscherichiacoliinfected IPEC-J2 cells (200×)

*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)。下圖同。

* indicated significant difference (P<0.05)，** indicated significant difference (P<0.01). The same as below.

圖3植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞存活的影響

Fig.3 Effects ofLactobacillusplantarumon survival ofEscherichiacoliinfected IPEC-J2 cells

2.3 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響

2.3.1 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞TLRs和NLRsmRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

由圖4可以看出，大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞后可以刺激細(xì)胞胞外模式識(shí)別受體TLR2、TLR6以及細(xì)胞胞內(nèi)模式識(shí)別受體NOD2 mRNA的表達(dá)。植物乳桿菌與大腸桿菌共同處理IPEC-J2細(xì)胞后，可以顯著或極顯著抑制大腸桿菌引起的TLR2(2、3 h)、TLR6(2、3 h)和NOD2(2 h) mRNA的過(guò)表達(dá)(P<0.05或P<0.01)，而對(duì)NOD1 mRNA的表達(dá)有顯著或極顯著的刺激作用(P<0.05或P<0.01)。植物乳桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞后，對(duì)NOD1(2 h)和NOD2(1 h)mRNA的表達(dá)有極顯著的刺激作用(P<0.01)。

2.3.2 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞細(xì)胞因子mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

由圖5可以看出，與對(duì)照組相比，大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞2 h后，細(xì)胞炎性因子IL-6和TNF-αmRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著提高(P<0.01)；大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞3 h后，細(xì)胞炎性因子IL-6、IL-8和TNF-αmRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著提高(P<0.01)。植物乳桿菌與大腸桿菌共處理IPEC-J2細(xì)胞2、3 h后，植物乳桿菌可以極顯著抑制大腸桿菌引起的細(xì)胞炎性因子的IL-6、IL-8 mRNA的過(guò)表達(dá)(P<0.01)。與對(duì)照組相比，各組TGF-β1 mRNA的表達(dá)量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

3 討 論

3.1 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞形態(tài)和存活的影響

腸道上皮細(xì)胞是豬腸道上皮屏障功能的主要執(zhí)行者，大約占據(jù)腸道上皮100 m2的區(qū)域，上皮細(xì)胞的完整性是維持其選擇通透性和抵御外源致病菌入侵等功能的首要條件[17]。Wine等[18]研究也表明，致病菌黏附或侵入腸道上皮細(xì)胞后大量繁殖，破壞腸道上皮結(jié)構(gòu)，同時(shí)引起細(xì)胞死亡，損傷腸上皮屏障功能。因此，本試驗(yàn)結(jié)合吉姆薩染色和臺(tái)盼藍(lán)染色，從形態(tài)學(xué)和存活率2個(gè)方面研究了植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞的損傷。結(jié)果表明，大腸桿菌單獨(dú)處理細(xì)胞一定時(shí)間后可嚴(yán)重影響細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，甚至引起細(xì)胞大量脫落死亡。而植物乳桿菌與IPEC-J2細(xì)胞共培養(yǎng)后，對(duì)細(xì)胞的形態(tài)和存活沒(méi)有明顯影響。植物乳桿菌與大腸桿菌共同處理IPEC-J2細(xì)胞后，可明顯緩解大腸桿菌引起的細(xì)胞形態(tài)損傷，還可顯著或極顯著抑制大腸桿菌引起的細(xì)胞死亡。楊俊等[19]試驗(yàn)結(jié)果表明，大腸桿菌處理腸道細(xì)胞后，可黏附于細(xì)胞損害細(xì)胞骨架，引起細(xì)胞間隙增大而損傷細(xì)胞，而將乳酸菌與大腸桿菌共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，乳酸菌可明顯減緩大腸桿菌引起的細(xì)胞損傷，與本研究結(jié)果一致。這說(shuō)明益生菌對(duì)腸道大腸桿菌的感染具有抑制作用。此外，趙毅博[20]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，食淀粉乳桿菌代謝產(chǎn)物也可抑制大腸桿菌等引起細(xì)胞形態(tài)的不完整。這也提示本研究中，植物乳桿菌在保護(hù)腸道細(xì)胞形態(tài)免受大腸桿菌損傷時(shí)，其代謝產(chǎn)物也可能發(fā)揮了作用，這需要進(jìn)一步的研究來(lái)驗(yàn)證。

圖4 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞TLRs和NLRs mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.4 Effects of Lactobacillus plantarum on TLRs and NLRs mRNA relative expression of Escherichia coli infected IPEC-J2 cells

圖5 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞細(xì)胞因子mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.5 Effects of Lactobacillus plantarum on cytokines mRNA relative expressions of Escherichia coli infected IPEC-J2 cells

3.2 植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染IPEC-J2細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響

豬腸道先天性免疫反應(yīng)系統(tǒng)對(duì)維護(hù)腸道屏障功能、避免致病菌引起的機(jī)體損傷等具有非常重要的作用。腸道免疫系統(tǒng)通過(guò)一個(gè)復(fù)雜的受體系統(tǒng)來(lái)識(shí)別病原微生物和宿主共生菌，其受體主要包括胞外的TLRs和胞內(nèi)的NLRs。一般情況下，適度免疫信號(hào)通過(guò)TLRs和NLRs產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子、趨化因子和抗炎因子等，調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答，對(duì)維持機(jī)體健康、抵抗疾病是有益的[21-22]。而機(jī)體受到病原菌等有害物質(zhì)刺激時(shí)，免疫刺激反應(yīng)會(huì)處于高度激活狀態(tài)，導(dǎo)致炎性細(xì)胞因子，如TNF-α，以及促炎性細(xì)胞因子，如IL-6、IL-8等的過(guò)量分泌，進(jìn)而引起免疫應(yīng)激。研究表明，益生菌可通過(guò)抑制腸道上皮細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的過(guò)表達(dá)而緩解大腸桿菌引起的細(xì)胞炎性損傷[23]。本試驗(yàn)研究表明，大腸桿菌單獨(dú)作用IPEC-J2細(xì)胞2、3 h后，可刺激炎性細(xì)胞因子IL-6、IL-8、TNF-αmRNA的表達(dá)，而植物乳桿菌與大腸桿菌共同處理IPEC-J2細(xì)胞2、3 h后，可以抑制大腸桿菌引起的細(xì)胞炎癥因子IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的過(guò)表達(dá)。此結(jié)果與Wang等[24]試驗(yàn)研究結(jié)果相一致。原因可能是大腸桿菌通過(guò)某個(gè)受體激活了細(xì)胞因子的表達(dá)通路，而植物乳桿菌緩解了這種過(guò)度免疫。此外，本試驗(yàn)還研究了植物乳桿菌對(duì)大腸桿菌感染的IPEC-J2細(xì)胞模式識(shí)別受體的影響。結(jié)果表明，大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞后可刺激細(xì)胞TLR2、TLR6和NOD2 mRNA的表達(dá)，而植物乳桿菌與大腸桿菌共同處理IPEC-J2細(xì)胞后可抑制大腸桿菌引起的TLR2、TLR6和NOD2 mRNA的過(guò)表達(dá)。這說(shuō)明植物乳桿菌可通過(guò)及時(shí)調(diào)節(jié)上述模式識(shí)別受體信號(hào)來(lái)維持機(jī)體免疫平衡，進(jìn)而可避免腸道上皮組織的炎性損傷。此外，本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌處理IPEC-J2細(xì)胞后不刺激NOD1 mRNA的表達(dá)，而植物乳桿菌卻促進(jìn)了NOD1 mRNA的表達(dá)。原因可能與Trinchieri等[25]研究中提到的模式識(shí)別受體具有特異性有關(guān)。這說(shuō)明NOD2很可能是植物乳桿菌發(fā)揮作用的主要胞內(nèi)模式識(shí)別受體，而TLR2、TLR6可能是植物乳桿菌發(fā)揮作用的主要胞外模式識(shí)別受體。另外，TGF-β1是IPEC-J2細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子相關(guān)基因，對(duì)細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)及免疫具有很重要的調(diào)節(jié)作用。本試驗(yàn)中TGF-β1 mRNA相對(duì)表達(dá)量在對(duì)照組、植物乳桿菌處理組、大腸桿菌處理組及植物乳桿菌+大腸桿菌處理組均差異不顯著。而侯成立[26]試驗(yàn)表明，羅伊氏乳桿菌處理細(xì)胞6 h后，可以顯著刺激轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β3 mRNA的表達(dá)，原因可能與試驗(yàn)菌株不同有關(guān)。

4 結(jié) 論

植物乳桿菌能夠緩解大腸桿菌引起的豬腸道上皮細(xì)胞形態(tài)損傷及死亡；可通過(guò)調(diào)節(jié)模式識(shí)別受體TLR2、TLR6和NOD2 mRNA的表達(dá)而緩解大腸桿菌引起的細(xì)胞炎癥因子IL-6、IL-8 mRNA的過(guò)表達(dá)。

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