劉卿，郭兵，秦娟

（1.貴州醫(yī)科大學(xué) 病理生理學(xué)教研室，貴州 貴陽 550004；2.貴州省貴陽市婦幼保健院，貴州 貴陽 550003）

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中位居第2位[1]。高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus,HPV）感染已被證實是導(dǎo)致宮頸病變和宮頸癌的首要因素[2]。高危型HPV目前有15種，如HPV16、18、31、33和35等，主要引起宮頸癌等惡性腫瘤[2]。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein 78,GRP78），亦稱免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白（Bip），系內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的一種應(yīng)激蛋白，其參與蛋白質(zhì)的修飾、折疊及轉(zhuǎn)運[3]。近期研究發(fā)現(xiàn)，GRP78與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其在神經(jīng)膠母細胞瘤、肺癌、食管癌、肝癌及胰腺癌等多種惡性腫瘤中都顯現(xiàn)高表達[4-6]。GRP78和增強子結(jié)合蛋白同源蛋白（enhancerbinding protein homologous protein,CHOP）是ERS的2個經(jīng)典標(biāo)志物[7]。C-Jun氨基末端激酶（C-Jun NH2-terminal kinase,JNK）是一類絲裂原活化蛋白激酶蛋白（mitogen-activated protein kinase，MAPK），JNK信號通路可被細胞因子、應(yīng)激等多種因素激活，其參與細胞的增殖與分化、形態(tài)維持、骨架構(gòu)建、細胞凋亡及惡變[8]。近來有研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白參與了腫瘤和炎癥疾病的發(fā)生與發(fā)展，其他內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白CHOP、JNK也有表達增高[9-12]。

本實驗選取HPV陽性的2個細胞系Hela（HPV18型）和Siha（HPV16型）以及HPV陰性的細胞系C33A，探討不同HPV感染狀態(tài)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78、JNK及CHOP表達之間的關(guān)系，為進一步分析HPV 感染誘導(dǎo)宮頸癌的內(nèi)在分子機制提供一定的實驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞來源 人宮頸癌細胞株3種：HPV18（+）Hela、HPV16（+）Siha及HPV（-）C33a（購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細胞庫）。

1.1.2 主要試劑 DMEM培養(yǎng)基、胰酶、胎牛血清（美國Gibco公司），一抗：JNK（兔抗人源）、GRP78（兔抗人）；CHOP（兔抗人）、內(nèi)參一抗 F-actin（兔來源）（英國Abcam公司），二抗：羊抗兔IgG（美國Sigma公司），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本TaKaRa公司），ELIVSIONTM試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）、Trizol（美國Invitrogen公司）。

1.2 主要方法

1.2.1 細胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及冷凍 Siha細胞系為HPV16型（HPV16+）宮頸腺癌細胞系，Hela細胞系為HPV18型（HPV18+）宮頸鱗癌細胞系，C33a為HPV陰性（HPV-）的宮頸鱗癌細胞系。細胞復(fù)蘇遵守快融的原則，先將水浴鍋調(diào)至37℃，從液氮罐里拿出凍存管迅速放入37℃水浴箱中，使其迅速融化，用吸管吸出細胞懸液，注入離心管并加入4 ml的完全培養(yǎng)液，以1 000 r/min離心5 min，棄上清液，加入適量的培養(yǎng)液吹打，使其形成懸浮液。Siha細胞、Hela細胞、C33a細胞培養(yǎng)條件均一致：將細培養(yǎng)于含10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素雙抗的DMEM培養(yǎng)基中，24～48 h換液1次，于37℃、5%二氧化碳CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞融合度達至90%左右時，在超凈工作臺上操作，棄除舊培養(yǎng)基，用PBS洗3次，25 cm培養(yǎng)瓶加入胰酶消化液約0.5～1.0 ml，置37℃培養(yǎng)箱約1.5 min，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入完全培養(yǎng)基3 ml，輕輕吹打成細胞懸液，收集至離心管中離心棄上清液，再加入完全培養(yǎng)液吹打成細胞懸液，按照1︰2的比例傳代至培養(yǎng)瓶內(nèi)，置37℃培養(yǎng)箱。細胞凍存時遵守慢凍的原則，選擇對數(shù)期生長的細胞，最好是已經(jīng)傳代培養(yǎng)4、5代后的細胞。離心，去上清液留細胞沉淀，加入凍存液（10%的DMSO+90%胎牛血清）后吹打混勻，以每管1 ml分裝到細胞冷凍保存管中。

1.2.2 細胞免疫組織化學(xué)法 取3個宮頸癌細胞系的細胞爬片各1張，1×PBS洗3次，2～3 min；4%多聚甲醛固定15 min（1滴），空氣干燥5 min；然后浸泡于0.5% Triton X-100中使細胞膜破裂，1×PBS洗3次，各2～3 min；3% 過氧化氫H2O21滴浸潤玻片20 min，1×PBS洗3次，2～3 min；滴入BSA（封閉血清）1滴，36℃溫箱孵育20 min，滴加一抗（JNK抗體、GRP78抗體、CHOP抗體，稀釋倍數(shù)1︰100）50 μl/孔板，置于濕盒內(nèi)，4℃過夜。1×PBS洗3次，各5 min。二抗工作液孵育（濕盒）37℃ 30 min。PBS清洗標(biāo)本3次，各5 min。C液（濕盒）37℃ 30 min。PBS清洗標(biāo)本3次，各5 min。操作完成后使用DAB顯色液顯色，用蒸餾水沖洗玻片以終止反應(yīng)，然后使用蘇木蘇復(fù)染以使細胞核著色，蒸餾水沖洗以及PBS沖洗玻片返藍，最后用中性樹脂封片，然后置于顯微鏡下觀察，拍照記錄實驗結(jié)果。以PBS代替JNK抗體、GRP78抗體、CHOP抗體作為對照，細胞核及細胞質(zhì)呈黃色為陽性表達。顯微鏡下進行觀察拍照，使用IPP6.0軟件進行計數(shù)。陽性細胞百分比=陽性細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100%，陽性細胞百分比評分判定標(biāo)準(zhǔn)：1分：陽性染色細胞數(shù)≤25%；2分：陽性染色細胞數(shù)占25%～49%；3分：陽性細胞數(shù)≥50%。染色強度評分：0分-無染色，1分-淡黃色，2分-黃色，3分-棕黃色。隨機選取5個視野的平均得分作為切片的最終評分，最終組織判斷評分=陽性細胞百分比評分×染色強度評分。根據(jù)最終組織判斷評分分為4個等級：0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），4～6分為陽性（++），7～9分為強陽性（+++）。

1.2.3 Western blot 從6孔版中收集細胞，加入細胞裂解液裂解將提取的蛋白質(zhì)用BCA蛋白定量試劑盒定量后分裝保存（-80℃）；12%的SDS-PAGE電泳（5μg上樣量）蛋白樣品分離后轉(zhuǎn)移至PVDF膜；封閉，雜交[用blocking buffer將目的抗體稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛龋豢梗ㄏ♂対舛?︰500，內(nèi)參一抗的稀釋濃度為1︰1 000），TBST漂洗（3次×5 min）]；用封閉液將二抗稀釋成一定濃度（1︰1 000），TBS-T漂洗（4次×5 min）；ECL顯色，曝光液按A液︰B液1︰1混勻后均勻覆蓋在整片膜上，反應(yīng)2 min放入曝光儀曝光檢測。以β-actin蛋白為內(nèi)對照，用ImageJ軟件分析GRP78、JNK及CHOP蛋白條帶與β-actin蛋白條帶像素灰度。

1.2.4 RNA的提取 將1 ml Trizol加到6孔板中裂解細胞，放置5 min，加入0.2 ml氯仿，混勻后室溫靜置3 min。10 000 r/min離心10 min。取上清，加入等體積的異丙醇，靜置10 min。10 000 r/min離心10 min。棄上清，加入1 ml 75%乙醇/管。7 500 r/min離心5 min。棄上清，用適量DEPC水溶解沉淀。使用紫外分光光度計（Nano Drop1000）測定RNA的濃度和純度。

1.2.5 RT-PCR ①按照TaKaRa公司逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書配制總體積20 μl的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系（2×RT buffer 10 μl，6N 隨機引物（100 pmol/ul）1 μl，RT-mix 1 μl，模板（RNA）5 μl，DEPC 水 3 μl）；②逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件的設(shè)置：25℃ 10 min，42℃ 50 min，85℃5 min；各組RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；③根據(jù)PCR反應(yīng)系統(tǒng)的組成和要求，設(shè)計20 μl的反應(yīng)體系（2×PCR premix Taq）10 μl，Primers F（10 μmol/ul）1 μl，Primers R（10 μmol/ul）1 μl，模板 *（c DNA）2 μl，DEPC水6 μl（引物序列見表1）；④PCR反應(yīng)條件：94℃ 3 min，94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 40 s（循環(huán) 28次），72℃ 5 min在PCR擴增儀上進行擴增。將15 μl PCR產(chǎn)物置于1.2%瓊脂糖凝膠（內(nèi)含0.5 μg/ml溴化乙啶Ethidium Bromide,EB）電泳分離后于凝膠成像儀中進行圖像處理，觀察各組目的基因的表達情況并將各電泳條帶做灰度分析定量分析實驗結(jié)果。

表1 引物序列及擴增片段長度

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間兩兩比較時先進行單因素方差齊性檢驗，方差齊性時采用Tukey HSD法；方差不齊時采用非參數(shù)檢驗中的兩獨立樣本秩和檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GRP78、JNK及CHOP蛋白的免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果可見：Siha細胞呈多角形，GRP78在細胞漿和細胞核染色均出現(xiàn)棕黃色顆粒（見圖1A），免疫組織化學(xué)評分為（8.400 0±1.341 6）分；Hela細胞形態(tài)與Siha類似，細胞胞漿染色主要為黃色，較Siha細胞稍弱（見圖1B），免疫組織化學(xué)評分為（5.200 0±1.095 5）分；C33a細胞較小，外形呈圓形且細胞核較大，GRP78在C33a細胞中的染色主要為淡黃色，胞核染色主要為淡黃色（見圖1C，1D），免疫組織化學(xué)評分為（2.200 0±0.836 7）分。

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果可見：Siha細胞也呈現(xiàn)多角形，JNK在細胞漿和細胞核內(nèi)染色，均出現(xiàn)棕黃色顆粒（見圖2A），免疫組織化學(xué)評分為（7.800 0±1.643 2）分；Hela細胞形態(tài)與Siha類似，胞漿染色較深，胞核的染色較Siha細胞稍弱（見圖2B），免疫組織化學(xué)評分為（4.800 0±1.095 5）分；C33A細胞較小，外形呈圓形且細胞核較大，JNK在C33A細胞中細胞漿和胞核染色均較弱（見圖2C），免疫組織化學(xué)評分為（1.800 0±0.836 7）分。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果可見：Hela細胞呈現(xiàn)多角形，CHOP在細胞漿和細胞核內(nèi)染色，均出現(xiàn)棕黃色顆粒，免疫組織化學(xué)評分為（7.200 0±1.643 2）分；Hela細胞形態(tài)與Siha類似，CHOP在Hela細胞系中的染色與Siha細胞的染色結(jié)果類似，胞漿染色較深，但胞核的染色較Siha細胞稍弱，免疫組織化學(xué)評分為（4.200 0±1.095 5）分；C33A細胞較小，外形呈圓形且細胞核較大，CHOP在C33A細胞中的染色極弱，細胞漿染色較弱（見圖3），免疫組織化學(xué)評分為（1.400 0±0.509 9）分。

GRP78、JNK及CHOP在3種細胞的免疫組織化學(xué)評分方差齊性（F=38.973、29.348和24.269，均P=0.000），Tukey HSD檢驗結(jié)果表明GRP78蛋白表達在HPV16（+）Siha中高于 HPV18（+）Hela、HPV（-）C33a，在HPV（-）C33a細胞中GRP78表達極低；同時內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白JNK和CHOP蛋白在宮頸癌細胞HPV16（+）的Siha表達也高于HPV18（+）Hela、HPV（-）C33a，見表2～4。

圖1 GRP78在3種細胞株中的表達 （×400）

圖2 JNK在3種細胞株中的表達 （×400）

圖3 CHOP在3種細胞株中的表達 （×400）

2.2 宮頸癌細胞中GRP78、JNK及CHOP蛋白的Western bolt檢測結(jié)果

從圖4和表5可知，GRP78蛋白在HPV16（+）Siha、HPV18（+）Hela表達強于HPV（-）C33a（P＜0.05），JNK和CHOP在HPV（+）的2個宮頸癌細胞系HeLa和Siha中表達強于HPV（-）的宮頸癌細胞C33A（P＜0.05）。從圖4灰度分析直方圖中可以更直觀地看出以上結(jié)果（灰度分析的數(shù)值為每個條帶的灰度值與相應(yīng)的β-actin灰度的比值）。

表2 GRP78在3種細胞株中表達水平的多重比較

表3 JNK在3種細胞株中表達水平的多重比較

表4 CHOP在3種細胞株中表達水平的多重比較

圖4 Western blot及灰度分析結(jié)果

表5 Western blot檢測結(jié)果 （±s）

表5 Western blot檢測結(jié)果 （±s）

組別 CHOP GRP78 JNK HPV（-）C33a 73.45±3.27 94.84±1.31 53.35±2.56 HPV16（+）Siha 134.93±7.85 140.63±10.65 127.82±7.20 HPV18（+）Hela 88.74±2.42 116.86±4.11 77.46±4.75

2.3 不同HPV亞型宮頸癌細胞中JNK、GRP78及CHOP mRNA表達結(jié)果

從圖5和表6可知，GRP78 mRNA在HPV16（+）Siha、HPV18（+）Hela表達高于HPV（-）C33a（P＜0.05），JNK 和 CHOP mRNA 表達在 HPV16（+）Siha、HPV18（+）Hela也高于 HPV（-）C33a（P＜0.05）。

圖5 RT-PCR及灰度分析結(jié)果

表6 RT-PCR檢測結(jié)果

3 討論

宮頸癌每年新發(fā)病50萬，其中40萬在發(fā)展中國家（80%）[13]。高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染已被證實是導(dǎo)致宮頸病變和宮頸癌的首要因素[13]。HPV病毒根據(jù)病毒致病力大小分為：低危型和高危型兩大類。高危型HPV目前有15種，如HPV16、18、31、33和35等，主要引起宮頸癌等惡性腫瘤。宮頸癌也是一種炎癥疾病，炎癥反應(yīng)是由感染、組織損傷以及組織內(nèi)環(huán)境的異常變化所激發(fā)的一種適應(yīng)性應(yīng)答反應(yīng)。慢性感染可造成機體發(fā)生反復(fù)的、繼發(fā)性損傷、修復(fù)反應(yīng)及組織內(nèi)環(huán)境的紊亂，調(diào)控腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細胞中一種重要的細胞器，外界的許多不良刺激會導(dǎo)致細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡，會出現(xiàn)蛋白質(zhì)未折疊或者錯誤折疊，它們聚集在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，會損傷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常生理功能，該現(xiàn)象即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）。近來有研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，這主要與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細胞凋亡有關(guān)[14]。

葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78亦稱免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白（Bip），系內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的一種應(yīng)激蛋白，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激下GRP78表達增高，通過表達的提高以維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)定從而保護細胞，其參與蛋白質(zhì)的修飾、折疊和轉(zhuǎn)運。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，GRP78可促進蛋白質(zhì)的正確折疊，維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)正常功能。當(dāng)ERS早期，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶蛋白GRP78表達上調(diào)促進錯誤折疊或者未折疊蛋白的正確折疊、恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+轉(zhuǎn)運，有助于增強細胞對損傷的抵抗力，促進細胞存活。但是，當(dāng)持續(xù)過強的ERS時，GRP78與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白雙鏈RNA依賴的蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶解離，啟動PERK/elF2α（真核轉(zhuǎn)錄起始因子2α）通路，活性轉(zhuǎn)錄因子4（ATF4）表達增強，ATF4與增強子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP）基因啟動子結(jié)合后，CHOP表達增高導(dǎo)致細胞色素C釋放增加，啟動Caspase凋亡級聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細胞凋亡。此外，GRP78也與1型跨膜蛋白激酶（RE1）脫離，IRE1發(fā)生自身磷酸化和二聚化而被激活，引起凋亡信號因子C-Jun氨基末端激酶（JNK）的活化，最終引起細胞凋亡。

近期研究發(fā)現(xiàn)，GRP78與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其在神經(jīng)膠母細胞瘤、肺癌、食管癌、肝癌及胰腺癌等多種惡性腫瘤中都顯現(xiàn)高表達。CHOP系內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)促凋亡蛋白和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性轉(zhuǎn)錄因子，其在哺乳動物細胞中廣泛表達。正常情況下，CHOP少量表達于真核細胞的細胞漿中，當(dāng)ERS時CHOP大量聚集并表達于細胞核中，通過啟動Caspase凋亡級聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細胞凋亡。有研究表明，CHOP在人腦膠質(zhì)瘤中高表達，正常腦組織中低表達[16]。C-Jun氨基末端激酶（JNK）系凋亡信號因子，它是一類絲裂原活化蛋白激酶蛋白，JNK信號通路可被應(yīng)激等多種因素激活，它參與細胞的增殖與分化、細胞凋亡及惡變。大量實驗表明，JNK信號通路在細胞分化、細胞凋亡、應(yīng)激反應(yīng)以及多種人類疾病發(fā)生與發(fā)展中起至關(guān)重要的作用，JNK信號通路功能失調(diào)可造成慢性炎癥、腫瘤等多種疾病。有研究報道，JNK在腫瘤組織中的活性明顯高于正常組織，表明JNK可能參與腫瘤的形成。綜上可知，GRP78、CHOP及JNK的表達與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展有緊密的相關(guān)性。

本研究從細胞學(xué)領(lǐng)域通過免疫組織化學(xué)方法、Western blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、JNK及CHOP的表達情況，RT-PCR檢測GRP78、JNK及CHOP mRNA表達，以及差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義。得出實驗結(jié)果：GRP78蛋白在高危型HPV16（+）、HPV18（+）感染的宮頸細胞中的蛋白含量高于HPV（-）感染的宮頸細胞，同時內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白JNK、CHOP在高危型 HPV16（+）Siha、HPV18（+）Hela中也有較高表達，進一步證實內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP及JNK與不同HPV亞型相關(guān)，由此可推理出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白可能參與宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展。

本文通過細胞實驗測定不同HPV亞型感染的宮頸癌細胞中GRP78、CHOP及JNK蛋白的表達，以及差異是否有統(tǒng)計學(xué)意義，提供GRP78、CHOP及JNK與HPV感染相關(guān)性的實驗室依據(jù)，結(jié)果提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能參與宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展，而且與高危型HPV感染相關(guān)，并可能廣泛參與宮頸癌的病理過程。

[1]BRIANTI P,DE FLAMMINEIS E,MERCURI S R.Review of HPV-related diseases and cancers[J].New Microbiol,2017,40(2):80-85.

[2]FRAENKEL P G.Anemia of inf l ammation: A review[J].Med Clin North Am,2017,101(2): 285-296.

[3]PRASAD M,PAWLAK K J,BURAK W E,et al.Mitochondrial metabolic regulation by GRP78[J].Sci Adv,2017,3(2): e1602038.

[4]LIZARDO M M,MORROW J J,MILLER T E,et al.Upregulation of glucose-regulated protein 78 in metastatic cancer cells is necessary for lung metastasis progression[J].Neoplasia,2016,18(11): 699-710.

[5]TSAI S F,TAO M,HO L,et al.Isochaihulactone-induced DDIT3 causes ER stress-PERK independent apoptosis in glioblastoma multiforme cells[J].Oncotarget,2017,8(3): 4051-4061.

[6]YANG H,FAN S,AN Y,et al.Bisdemethoxycurcumin exerts pro-apoptotic effects in human pancreatic adenocarcinoma cells through mitochondrial dysfunction and a GRP78-dependent pathway[J].Oncotarget,2016,7(50): 83641-83656.

[7]JIAN L,LU Y,LU S,et al.Chemical chaperone 4-phenylbutyric acid reduces cardiac ischemia/reperfusion injury by alleviating endoplasmic reticulum stress and oxidative stress[J].Med Sci Monit,2016(22): 5218-5227.

[8]KIM H I,HONG S H,KU J M,et al.Tonggyu-tang,a traditional Korean medicine,suppresses pro-inflammatory cytokine production through inhibition of MAPK and NF-kappaB activation in human mast cells and keratinocytes[J].BMC Complement Altern Med,2017,17(1): 186.

[9]WANG G,ZHANG T,SUN W,et al.Arsenic sulfide induces apoptosis and autophagy through the activation of ROS/JNK and suppression of Akt/mTOR signaling pathways in osteosarcoma[J].Free Radic Biol Med,2017(106): 24-37.

[10]HSIEH M J,CHEN J C,YANG W E,et al.Dehydroandrographolide inhibits oral cancer cell migration and invasion through NF-kappa B-,AP-1-,and SP-1-modulated matrix metalloproteinase-2 inhibition[J].Biochem Pharmacol,2017(130):10-20.

[11]ZHU Y,JIANG Y,SHI L,et al.7-O-Geranylquercetin induces apoptosis in gastric cancer cells via ROS-MAPK mediated mitochondrial signaling pathway activation[J].Biomed Pharmacother,2017(87): 527-538.

[12]MAXWELL T,CHUN S Y,LEE K S,et al.The anti-metastatic effects of the phytoestrogen arctigenin on human breast cancer cell lines regardless of the status of ER expression[J].Int J Oncol,2017,50(2): 727-735.

[13]WANG F,TANG Q,LV G,et al.Comparison of computed tomography and magnetic resonance imaging in cervical cancer brachytherapy: A systematic review[J].Brachytherapy,2017,16(2): 353-365.

[14]MAENG H J,SONG J H,KIM G T,et al.Celecoxib-mediated activation of endoplasmic reticulum stress induces de novo ceramide biosynthesis and apoptosis in hepatoma HepG2 cells mobilization[J].BMB Rep,2017,50(3): 144-149.

[15]ONO K,ISE M,IKEBE D,et al.Successful treatment with biweekly CHOP for bone marrow relapse of blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm[J].Rinsho Ketsueki,2017,58(2): 150-154.

[16]TUNGKUM W,JUMNONGPRAKHON P,TOCHARUS C,et al.Melatonin suppresses methamphetamine-triggered endoplasmic reticulum stress in C6 cells glioma cell lines[J].J Toxicol Sci,2017,42(1): 63-71.