苑靜，王紹云

(凱里學院，貴州 凱里 556011)

甜藤為茜草科雞矢藤屬多年生蔓性草質(zhì)藤本植物[Paederiascandens(Lour.)Meer.]，又稱雞矢藤、牛皮凍、臭藤、五香藤、母狗藤等，其廣泛分布于東亞、南亞、東南亞地區(qū)，在我國主要分布于長江流域及其南部地區(qū)[1]。甜藤揉爛時稍有雞屎味，但做成食品后，卻是清香四溢，鮮美可口。貴州野生甜藤資源豐富，貴州黔東南侗族人民用它作為食品的增甜劑和膨松劑，制成傳統(tǒng)的特色美食甜藤粑和侗果，將野生甜藤莖搗爛，放入水中浸泡過濾，用其濾液為原料加工制作而成。甜藤粑和侗果一般在清明時節(jié)制作，口感香甜柔軟，開胃潤腸，食而不膩，久置不硬，保質(zhì)時間較長[2]。

近年來，對甜藤植物的研究主要集中在其化學成分和臨床應(yīng)用等方面，研究發(fā)現(xiàn)甜藤中富含總氨基酸、總糖類化合物及多種生物活性物質(zhì)，具有預防心血管疾病、調(diào)節(jié)免疫、抗衰老等功效，其獨特的保健價值也逐漸得到人們的認可[3]。經(jīng)查閱文獻發(fā)現(xiàn)，研究不同的制備方法對甜藤莖中含量的影響比較少，本文采用紫外可見分光光度法檢測陰干、曬干、烘干的甜藤莖中有益成分含量，研究不同的干燥方法對甜藤莖中有益成分含量的影響，為甜藤的加工保存提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

將貴州省黔東南州凱里市下司鎮(zhèn)采摘的甜藤莖，挑選出無蟲蛀、無斑點的部位清洗，將分別用陰干、曬干、烘干方法干燥后的甜藤莖用粉碎機分別制成粉末，待用。

1.2 儀器

WK-1000A小型高速粉碎機 青州市精誠醫(yī)藥裝備制造有限公司；AR-2140型電子分析天平 奧豪斯國際貿(mào)易公司；SHZ-D Ⅲ型循環(huán)水式真空泵、KQ-B型干燥器 鞏義市英峪予華儀器有限責任公司；TD5M型低速離心機 長沙湘智離心機儀器有限公司；UV-2550型紫外-可見分光光譜儀 日本島津公司。

1.3 試劑

60% C2H5OH水溶液、5% NaNO2溶液、10% Al(NO3)3溶液、4% NaOH溶液、磷酸鹽緩沖溶液、2%茚三酮溶液、100 μg/mL蘆丁標準溶液(取蘆丁標準品0.0025 g 置于25 mL的容量瓶中，用60% C2H5OH溶解，定容至刻度)、50 μg/mL谷氨酸標準溶液(精密稱取0.0050 g谷氨酸標準品，用10 mL 0.02 mol/L的NaOH溶解，定容至100 mL)、8% HCl溶液、0.1 mg/mL維生素C標準溶液(取谷氨酸標準品0.0050 g 于50 mL燒杯中，加8% HCl溶液攪拌至溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用8% HCl溶液定容)。

1.4 方法

1.4.1 黃酮的提取及含量測定

準確稱取陰干、曬干、烘干(60 ℃)的甜藤粉樣品于3個錐形瓶中，按物料比1∶30加入提取劑(60% C2H5OH)，浸泡50 min，水浴溫度45 ℃，超聲提取40 min，離心沉淀(4000 r/s，10 min)后，真空抽濾，分別取濾液于50 mL容量瓶中，用60% C2H5OH定容至刻度制得甜藤莖提取液備用，測黃酮含量[4]。

取蘆丁標準溶液2 mL于10 mL的容量瓶中，加入0.30 mL 5% NaNO2溶液，搖勻，靜置6 min后加入0.30 mL 10% Al(NO3)3溶液，搖勻，靜置；6 min后再加入4.00 mL 4% NaOH溶液，混合均勻，用60% C2H5OH溶液定容，搖勻，靜置12 min后，以蒸餾水為參比，在紫外可見分光光度計上掃描，在506 nm處有最大吸收峰[5,6]。

取蘆丁標準溶液0，2.00，2.50，3.00，3.50，4.00 mL分別置于10 mL的容量瓶中，按照測最大吸收峰的方法配制溶液，在波長506 nm處測定其吸光度值。以蘆丁標準溶液的濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

移取甜藤莖黃酮提取液各2 mL分別置于編號為陰-1、陰-2、陰-3、曬-1、曬-2、曬-3、烘-1、烘-2、烘-3，容積為10 mL的9個容量瓶中，按照測最大吸收峰的方法配制溶液，在波長506 nm處測定樣品吸光度值，計算黃酮含量。

黃酮含量=C×V2×V總×10-6V1×m樣×100%。

式中：C為所測得的樣品濃度(μg/mL)；V1為所取樣品濾液體積(mL)；V2為稀釋后樣品的體積(mL)；V總為樣品液的總體積(mL)；m樣為所稱取的樣品質(zhì)量(g)。

1.4.2 維生素C的提取及含量測定

精密稱取烘干、陰干、曬干的甜藤粉末1.041，1.0005，2.0018 g分別置于250 mL錐形瓶中(按料液比1∶20)用水浸泡0.5 h，于65 ℃水浴中超聲40 min，離心沉淀10 min，真空抽濾收集濾液分別轉(zhuǎn)移到25 mL容量瓶中，加入1 mL 8% HCl，再用蒸餾水定容至刻度，制得甜藤莖提取液，搖勻備用，測維生素C含量。

移取維生素C標準溶液1.50 mL，8% HCl溶液1.00 mL，稀釋定容至25.00 mL棕色容量瓶中。用蒸餾水作參比溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)用紫外可見分光光譜儀掃描，確定最大吸收波長為243 nm。

準確移取維生素C標準溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL于5個25.00 mL棕色容量瓶中，用蒸餾水定容，得5個濃度的維生素C標準溶液。以蒸餾水作參比，在243 nm處測定吸光度值，得維生素C標準曲線[7,8]。

移取甜藤莖維生素C提取液0.20 mL于3個25.00 mL棕色容量瓶中，加入1 mL 8% HCl，用蒸餾水定容至刻度，用紫外可見分光光度計平行測定3次，通過維生素C標準曲線查得樣品維生素C濃度，計算其含量(同1.4.1黃酮含量計算方法)。

1.4.3 氨基酸的提取及含量測定

準確稱取事先干燥粉碎好的甜藤樣品各1.0000 g，并編號為“陰干、曬干、烘干”。按物料比1∶20加入提取劑(水)，浸泡35 min，超聲提取40 min，水浴溫度45 ℃，離心沉淀(4000 r/s，10 min)后真空抽濾，取濾液于編號為“陰干、曬干、烘干”的50 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度制得甜藤莖提取液，備用，測氨基酸含量。

精密移取谷氨酸標準溶液和氨基酸樣品液各5 mL于25 mL的容量瓶中，分別加1.0 mL 2%的茚三酮溶液、3.0 mL磷酸鹽緩沖溶液，置于沸水浴中加熱15 min，取出流水冷卻，用蒸餾水定容到刻度線，以試劑空白作參比，用紫外可見分光光度計在波長范圍為400～600 nm下進行掃描，在566 nm處有最大吸收峰。

分別精密移取50 μg/mL的谷氨酸標準溶液0，2，4，6，8，10 mL于6個25 mL的容量瓶中，按照測最大吸收峰的方法配制溶液，測吸光度。以谷氨酸標準溶液的濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

分別精密移取甜藤莖提取液各0.2 mL置于9個編號為陰-1、陰-2、陰-3、曬-1、曬-2、曬-3、烘-1、烘-2、烘-3，容積為25 mL的容量瓶中，按照測最大吸收峰的方法配制溶液，測吸光度，計算其含量(同1.4.1黃酮含量計算方法)。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃酮、氨基酸和維生素C標準曲線

黃酮含量在濃度為20.0～50.0 μg/mL時具有良好的線性關(guān)系(見圖1)，所得線性方程為：y=0.01116x+0.01233，R2=0.99985；維生素C在2.000～12.000 μg/mL的濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系(見圖2)，所得線性回歸方程為：y=0.0503x+0.0208，相關(guān)系數(shù)R2=0.9997；氨基酸在5.000～20.000 μg/mL的濃度范圍內(nèi)吸光度和濃度具有良好的線性關(guān)系(見圖3)，所得線性方程為：y=0.03032x-0.01173，R2=0.99960。

圖1 黃酮標準曲線Fig.1 Standard curve of flavonoid

圖2 維生素C標準曲線Fig.2 Standard curve of vitamin C

圖3 氨基酸標準曲線Fig.3 Standard curve of amino acid

2.2 黃酮、氨基酸和維生素C含量

表1 甜藤莖提取液中黃酮含量Table 1 The content of flavonoids in Paederia scandens(Lour.)Meer. stem

由表1可知，對于3種干燥方法制備的甜藤莖提取液中，用陰干方法制備的原料，黃酮平均含量(0.914%)最高，其次是烘干和曬干的原料，二者相差不大。3種干燥方法中陰干處理原料的溫度相對最低，烘干和曬干溫度相對較高，說明溫度對原料中黃酮含量的影響較大，最有利的保存方法是陰干。

表2 甜藤莖提取液中維生素C含量Table 2 The content of vitamin C in Paederia scandens(Lour.)Meer. stem

由表2可知，對于3種干燥方法制備的甜藤莖提取液中，用陰干方法制備的原料，維生素C平均含量(1.432%)最高，其次是烘干(1.341%)，曬干的原料維生素C含量(0.5314%)損失最大，高低含量相差2.69倍，曬干不利于維生素C的保存，說明3種處理原料的方法中陰干有利于有益成分的保存。

表3 甜藤莖提取液中氨基酸含量Table 3 The content of amino acid in Paederia scandens(Lour.)Meer. stem

由表3可知，對于3種干燥方法制備的甜藤莖提取液中，用陰干方法制備的原料，氨基酸平均含量(10.131%)最高，其次是曬干(9.574%)，烘干原料中氨基酸含量(9.161%)損失最大，高低含量相差近1%，烘干不利于氨基酸的保存，說明3種處理原料的方法中有利于有益成分的保存順序為陰干、曬干、烘干，最好的原料處理方法是陰干。

從以上3種成分含量的測試數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)，用陰干方法制備的原料有利于黃酮、維生素C和氨基酸有益成分的保存。

2.3 甜藤莖提取液中黃酮、氨基酸和維生素C含量的精密度試驗

移取甜藤莖提取液各2 mL分別置于編號為陰-1、陰-2、陰-3、陰-4、陰-5、曬-1、曬-2、曬-3、曬-4、曬-5、烘-1、烘-2、烘-3、烘-4、烘-5，容積為10 mL的15個容量瓶中，按照1.4中方法配制溶液，測定其吸光度，做精密度試驗，數(shù)據(jù)見表4～表6。

表4 甜藤莖提取液中黃酮含量精密度試驗Table 4 The precision test of flavonoids in Paederia scandens(Lour.)Meer. stem

由表4可知，相對標準偏差RSD數(shù)據(jù)均小于2.00%，測試方法的精密度較高。

表5 甜藤莖提取液中維生素C含量精密度試驗Table 5 The precision test of vitamin C in Paederia scandens(Lour.)Meer. stem

由表5可知，相對標準偏差RSD數(shù)據(jù)均小于2.00%，測試方法的精密度較高。

表6 甜藤莖提取液中氨基酸含量精密度試驗Table 6 The precision test of amino acid in Paederia scandens(Lour.)Meer. stem

由表6可知，相對標準偏差RSD數(shù)據(jù)均小于2.00%，測試方法的精密度較高。

2.4 甜藤莖提取液中黃酮、氨基酸和維生素C含量的加標回收試驗

2.4.1 黃酮含量的加標回收試驗

移取甜藤莖提取液各2 mL分別置于編號為陰-1、陰-2、陰-3、陰-4、陰-5、曬-1、曬-2、曬-3、曬-4、曬-5、烘-1、烘-2、烘-3、烘-4、烘-5，容積為10 mL的15個容量瓶中，分別加入0.1 mL蘆丁標準溶液，按照1.4中方法配制溶液測定其吸光度，做黃酮含量的加標回收試驗，見表7。

表7 甜藤莖提取液中黃酮含量的加標回收試驗Table 7 The content adding standard recovery test of flavonoids in Paederia scandens(Lour.)Meer. stem

由表7可知，陰干、曬干、烘干甜藤提取液中黃酮回收率分別為98.552%，100.012%，99.738%(n=5)，RSD分別為1.48%，1.30%，0.84%(n=5)，準確度滿足測定要求。

2.4.2 維生素C含量的加標回收試驗

在供試品溶液中加入維生素C標準品，按照1.4中方法配制溶液，測定其吸光度，做維生素C含量的加標回收試驗，見表8。

表8 甜藤莖提取液中維生素C含量的加標回收試驗Table 8 The content adding standard recovery test of vitamin C in Paederia scandens(Lour.)Meer. stem

由表8可知，陰干、曬干、烘干甜藤提取液中維生素C回收率分別為100.59%，100.72%，100.77%(n=5)，RSD分別為0.81%，0.60%，1.01%(n=5)，準確度滿足測定要求。

2.4.3 氨基酸含量的加標回收試驗

在供試品溶液中加入氨基酸標準品量為5 μg，按照1.4中方法配制溶液，測定其吸光度，做氨基酸含量的加標回收試驗，見表9。

表9 甜藤莖提取液中氨基酸含量的加標回收試驗Table 9 The content adding standard recovery test of amino acid in Paederia scandens(Lour.)Meer. stem

續(xù) 表

由表9可知，陰干、曬干、烘干甜藤提取液中氨基酸回收率分別為100.724%，100.030%，99.794%(n=5)，RSD分別為0.99%，1.16%，1.10%(n=5)，準確度滿足測定要求。

3 結(jié)論

研究結(jié)果顯示：干燥方法不同，甜藤提取液中各成分含量不同。陰干、烘干和曬干甜藤莖中的黃酮含量分別是0.914%，0.752%，0.716%；氨基酸含量分別是10.131%，9.161%，9.574%；維生素C含量分別是1.432%，1.341%，0.5314%。從以上3種成分含量的測試數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)，用陰干方法制備的原料有利于黃酮、維生素C和氨基酸有益成分的保存。

根據(jù)精密度和加標試驗驗證，采用紫外可見分光光度法研究陰干、曬干和烘干3種不同的干燥方法對甜藤莖中3種成分含量的影響，結(jié)果準確可靠，為甜藤的加工保存提供了一定的理論依據(jù)。

參考文獻：

[1]譚玉琴，山光強，陳志剛，等.雞屎藤的化學成分、提取工藝與藥理作用研究進展[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2016(1):18-21.

[2]王紹云，唐文華，文正康，等.貴州野生甜藤中水溶性糖及其微量元素硒分析測定[J].食品工業(yè)，2013，34(10):220-223.

[3]毛彩艷，申元英.云南雞屎藤研究現(xiàn)狀及臨床應(yīng)用[J].中國民族民間醫(yī)藥，2013(12)：15-17.

[4]苑靜，王紹云，王翔.貴州甜藤Vc、總糖、總氨基酸含量測定[J].中國食品添加劑，2016(5):116-120.

[5]陽小勇，唐榮平.紫外-可見分光光度法測定云南酸木瓜中總黃酮含量[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學，2016(5):104-106.

[6]李清林，陶鋒.浙江省不同產(chǎn)地金錢草總黃酮含量的測定[J].中國中醫(yī)藥科技，2017，24(1):49-50.

[7]楊晶晶，劉英，曲媛，等．不同方法測定三七花、莖葉中維生素C含量[J].食品工業(yè)科技，2014，35(24)：53-56．

[8]開啟余．紫外分光光度法測定VC銀翹片中維生素C含量[J].福建分析測試，2015，24(3)：35-37.