★ 李曉春 王莉芳 樊寶娟 徐長(zhǎng)根（陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院 西安 71 00 65）

金線草，為蓼科植物金線草Antenoron fi liforme（Thunb.）Roberty et Vantier的全草，別名重陽(yáng)柳、毛蓼、人字草、一串紅等。多年生草本，生于山地林緣、路旁陰濕處。分布于山東、河南、山西、陜西等地。夏秋采收，鮮用或曬干。味辛，性溫。具祛風(fēng)除濕，理氣止痛之功效。內(nèi)服外用皆可。常用于風(fēng)濕骨痛、咳血、便血、跌打損傷等的治療［1］。本研究以二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高、角叉菜膠致大鼠足腫脹和紙片致小鼠肉芽增生等經(jīng)典的炎癥模型，考察金線草的抗炎作用，以期為金線草的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠，雌雄兼用，體重18～22g；SD大鼠，雌雄兼用，體重180～220g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（陜）2012-003。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度22℃～26℃，相對(duì)濕度40%～70%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（陜）2013-001。

1.2 試藥 藥材由陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院樊寶娟副主任藥師鑒定為金線草Antenoron fi liforme的干燥全草。阿司匹林腸溶片（批號(hào)：BJ32774，拜耳醫(yī)藥保健有限公司）；吲哚美辛腸溶片（批號(hào)：G160402，山西云鵬制藥有限公司）；醋酸地塞米松片（批號(hào)：150408，浙江仙琚制藥股份有限公司）；伊文思藍(lán)（批號(hào)：QR12404，MP公司）；角叉菜膠（Sigma公司）；二甲苯（分析純，批號(hào)：20120208，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；醋酸（分析純，批號(hào)：20120831，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 儀器 YLS-25A電動(dòng)耳腫打耳器（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）；YLS-7C足趾容積測(cè)量?jī)x（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）；UV-2550雙光束紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）。

2 方法

2.1 金線草水提物的制備 取金線草全草，粉碎成粗粉，裝入紗布口袋，加10倍量水，浸泡1h，煎煮2次，每次2h，過(guò)濾，將濾液濃縮至高劑量含生藥量為0.8g/mL，中劑量含生藥量為0.4g/mL，低劑量含生藥量為0.2g/mL。

2.2 對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響［2-4］取健康昆明種小鼠，50只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為金線草水提物組低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組（阿司匹林0.5g/kg體重）、模型對(duì)照組（純凈水），灌胃給藥20mL/kg體重，每天給藥1次，連續(xù)7天。末次給藥1h后小鼠左耳廓兩面均勻涂抹致炎劑二甲苯20μL/只，右耳不做任何處理為正常耳。1h后小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下雙耳用7mm直徑打孔器分別在雙耳同一部位打下圓形耳片并稱重，計(jì)算耳腫脹度和耳腫脹抑制率。耳腫脹度=左耳片質(zhì)量（mg）-右耳片質(zhì)量（mg）。耳腫脹抑制率（%）=（模型對(duì)照組耳腫脹度-給藥組耳腫脹度）/模型對(duì)照組耳腫脹度×100%。

2.3 對(duì)醋酸致毛細(xì)血管通透性增高的影響［2］取健康昆明種小鼠，50只，雌雄各半，按2.2方法分組及給藥。末次給藥1h后，尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)0.1mL/10g體重，然后腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1mL/10g體重，30min后將小鼠脫頸椎處死，打開(kāi)腹腔并用5mL生理鹽水進(jìn)行沖洗，沖洗液3000 r/min離心5min，上清液于590nm處測(cè)其吸光度值（A），計(jì)算抑制率。抑制率=（模型組平均吸光度-給藥組平均吸光度）/模型組平均吸光度×100%。

2.4 對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響［2-4］取健康SD大鼠，50只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為金線草水提物低、中、高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組（地塞米松10mg/kg體重）、模型對(duì)照組（純凈水），灌胃給藥20mL/kg體重，每天給藥1次，連續(xù)7天。末次給藥1h后，于右后足跖皮下注射1%角叉菜膠生理鹽水溶液0.1mL。用大鼠足趾容積測(cè)量?jī)x對(duì)致炎前和致炎后1，2，3，4h的足趾容積進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算足趾腫脹度及腫脹抑制率。足趾腫脹度=致炎后足趾容積（mL）-致炎前足趾容積（mL）。腫脹抑制率=（模型對(duì)照組足趾腫脹度－給藥組足趾腫脹度）/模型對(duì)照組足趾腫脹度×100%。

2.5 對(duì)紙片致小鼠肉芽增生的影響［2，4］取健康昆明種小鼠，50只，雌雄各半，按2.2方法分組及給藥，陽(yáng)性藥為吲哚美辛（20mg/kg）。小鼠乙醚麻醉后，無(wú)菌條件下，將一個(gè)經(jīng)滅菌并稱重的濾紙片植入左側(cè)鼠蹊部，隨即縫合。于次日各組小鼠灌胃給予相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)7天。末次給藥后1h，脫頸椎處死小鼠，打開(kāi)原切口剝離并取出紙片肉芽腫組織，60℃下烘干，稱重，減去原紙片重量即為肉芽腫凈重，計(jì)算肉芽腫抑制率。肉芽腫抑制率＝（模型對(duì)照組肉芽腫凈重－給藥組肉芽腫凈重）/模型對(duì)照組肉芽腫凈重×100%。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組資料的比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析法，多組間兩兩比較采t檢驗(yàn)，以P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 金線草水提物對(duì)小鼠耳腫脹的影響 陽(yáng)性對(duì)照組和金線草水提物高劑量組小鼠耳腫脹度與模型對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05或P<0.01），中、低劑量組小鼠耳腫脹度小于模型組，但無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 金線草水提物對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響（，n=10）

表1 金線草水提物對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響（，n=10）

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

組別 劑量/g·kg-1 耳腫脹度/mg 耳腫脹抑制率/%模型對(duì)照組 - 11.29±1.22 -陽(yáng)性對(duì)照組 0.5 9.89±0.94** 12.40低劑量組 4 10.58±0.90 6.29中劑量組 8 10.51±0.67 6.91高劑量組 16 10.12±0.59* 10.36

3.2 金線草水提物對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響 陽(yáng)性對(duì)照組和金線草水提物中、高劑量組均可抑制醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加，與模型對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 金線草水提物對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響（，n=10）

表2 金線草水提物對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響（，n=10）

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

組別 劑量/g·kg-1 A值 抑制率/%模型對(duì)照組 - 0.52±0.087 -陽(yáng)性對(duì)照組 0.5 0.26±0.058** 50.0低劑量組 4 0.47±0.073 9.62中劑量組 8 0.43±0.062* 17.3高劑量組 16 0.43±0.062* 17.3

3.3 金線草水提物對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響 致炎前，各組大鼠的足趾體積均無(wú)顯著性差異（P>0.05）。陽(yáng)性對(duì)照組在致炎后1h、2h、3h、4h對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹有抑制作用，與模型對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.01）；

金線草水提物中劑量組在致炎后2h對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹有抑制作用，與模型對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05）；金線草水提物高劑量組在致炎后1h、2h能減輕大鼠足趾腫脹，與模型對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05），但在致炎后3h、4h足趾腫脹度與模型對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 金線草水提物對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響（，n=10）

表3 金線草水提物對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響（，n=10）

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

組別 劑量/g·kg-1腫脹度（抑制率）/mL（%）致炎前足趾體積 1h 2h 3h 4h模型對(duì)照組 - 0.86±0.04 1.11±0.13 1.23±0.14 1.28±0.11 1.03±0.15陽(yáng)性對(duì)照組 0.01 0.87±0.06 0.58±0.11** 0.57±0.07** 0.61±0.07** 0.65±0.09**（47.75） （53.66） （52.34） （36.89）低劑量組 4 0.87±0.06 1.02±0.17 1.03±0.17 1.12±0.25 0.91±0.13（8.11） （16.26） （12.5） （11.65）中劑量組 8 0.86±0.05 0.92±0.22 0.96±0.27* 1.07±0.32 0.90±0.19（17.12） （21.95） （16.41） （12.62）高劑量組 16 0.87±0.05 0.88±0.19* 0.97±0.27* 1.01±0.39 0.91±0.20（20.72） （21.14） （21.09） （11.65）

3.4 金線草水提物對(duì)小鼠肉芽增生的影響 陽(yáng)性對(duì)照組肉芽腫凈重與模型對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05），金線草水提物低、中、高劑量組可以減輕肉芽腫凈重，但與模型對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 金線草水提物對(duì)紙片致小鼠肉芽增生的影響（，n=10）

表4 金線草水提物對(duì)紙片致小鼠肉芽增生的影響（，n=10）

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

組別 劑量/g·kg-1肉芽腫凈重/mg 肉芽腫抑制率/%模型對(duì)照組 - 1.58±0.13 -陽(yáng)性對(duì)照組 0.02 1.39±0.22* 12.03低劑量組 4 1.51±0.07 4.43中劑量組 8 1.44±0.12 8.86高劑量組 16 1.43±0.13 9.49

4 討論

炎癥是機(jī)體對(duì)有害刺激和損傷所產(chǎn)生的一種防御性應(yīng)答，是一種常見(jiàn)的病理過(guò)程。常用的抗炎實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)致炎性質(zhì)不同分為二大類：一類是非特異性炎癥模型，使用的致炎因子有異性蛋白（如雞蛋清）、顆粒性異物（角叉菜膠、棉球、紙片等）以及某些化學(xué)物質(zhì)（二甲苯等）。另一類是免疫性炎癥模型，包括細(xì)胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)性炎癥和免疫復(fù)合物介導(dǎo)的炎癥模型。其中，非特異性炎癥模型包括以血管通透性、白細(xì)胞游走為主要改變的各種急性炎癥模型和以肉芽組織增生為指標(biāo)的各種慢性炎癥模型［4］。本研究所采用的炎癥動(dòng)物模型均屬于非特異性炎癥反應(yīng)范疇，如二甲苯致小鼠耳腫脹模型、醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高模型、角叉菜膠致大鼠足腫脹模型都屬于急性炎癥模型，以局部組織腫脹、毛細(xì)血管通透性增加、白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)為特點(diǎn)；紙片致小鼠肉芽增生屬于慢性炎癥模型，由于紙片的刺激作用而引起結(jié)締組織增生，生成肉芽組織，模擬某些炎癥后期的病理改變。

本研究在前期研究基礎(chǔ)上系統(tǒng)評(píng)價(jià)了金線草的抗炎功效。結(jié)果顯示，金線草水提物（16g生藥/kg體重）可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹，耳腫脹抑制率達(dá)到10.36%；金線草水提物（8、16g生藥/kg體重）可降低醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性，減少急性、早期炎癥的滲出，抑制率達(dá)到17.3%；金線草水提物（16g生藥/kg體重）可減輕角叉菜膠致炎后1、2h的大鼠足趾腫脹，2h的抑制率達(dá)到21.14%；金線草水提物可減輕肉芽組織增生，但缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

以上結(jié)果提示，金線草水提物對(duì)于急性炎癥有一定的抑制作用，但是對(duì)于慢性炎癥無(wú)抑制作用?？紤]到角叉菜膠引起足趾腫脹的特點(diǎn)是致炎局部前列腺素合成增加，并與血管活性物質(zhì)和激肽類一起誘發(fā)水腫［3］，這將成為作者研究金線草抗炎作用機(jī)制的重點(diǎn)方向，同時(shí)對(duì)于金線草抗炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，也將在后續(xù)的研究中進(jìn)行探討。

［1］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].第1版.上海:上海人民出版社,1977.

［2］陳奇. 中藥藥理研究方法學(xué)[M]. 第1版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,1994:271-273, 305-307.

［3］張均田. 現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法[M]. 第1版. 北京:北京醫(yī)科大學(xué)/中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社, 1998:1382-1384.

［4］徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 第2版. 北京:人民衛(wèi)生出版社, 1991:713-719, 722-723.