劉金威　祝英杰　阮友琴

【摘 要】循環(huán)腫瘤細(xì)胞指進(jìn)入人體外周血的腫瘤細(xì)胞，通常是通過自發(fā)或因診療操作而從原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶釋放進(jìn)入外周血循環(huán)，是導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的主要原因。因?yàn)橥庵苎蠧TC含量極少，需要高敏感性及特異性的檢測方法，這限制了CTC作為“液體活檢”在臨床的實(shí)時監(jiān)測功能及應(yīng)用，但大量研究顯示，檢測CTC在早期發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移，發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)，制定個體化治療方案，評估預(yù)后等方面具有重要的臨床意義，近幾年已逐漸成為臨床研究熱點(diǎn)。本文簡要探討近年來CTC檢測的研究進(jìn)展及其在臨床的主要應(yīng)用現(xiàn)狀。

【關(guān)鍵詞】循環(huán)腫瘤細(xì)胞；微轉(zhuǎn)移；檢測；臨床應(yīng)用

【中圖分類號】R737.14 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1672-3783（2018）05-03--02

目前，我們對于惡性腫瘤的治療方案主要是手術(shù)，放療，化療以及靶向治療等，而我們對于腫瘤的檢測及發(fā)現(xiàn)方式主要是靠影像學(xué)方法，血清標(biāo)志物以及相應(yīng)的臨床表現(xiàn)，多數(shù)腫瘤確診的金標(biāo)準(zhǔn)則是手術(shù)之后的病理檢查，但這些方法對于早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)防腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的作用往往不大，且不能夠及時有效指導(dǎo)我們制定個體化治療方案，我們需要一種更簡便精確的方法，可以在腫瘤形成早期即可檢測到腫瘤的發(fā)生，在腫瘤轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的早期便可發(fā)現(xiàn)其微轉(zhuǎn)移，以利于更積極主動的采取應(yīng)對方案，進(jìn)而改善腫瘤患者預(yù)后。1896年，澳大利亞學(xué)者Ashworth首次在一例因癌癥死亡患者的外周血中發(fā)現(xiàn)并提出了循環(huán)腫瘤細(xì)胞的概念[1]，循環(huán)腫瘤細(xì)胞是由腫瘤最初的原發(fā)灶或后來的轉(zhuǎn)移灶脫落，繼而進(jìn)入外周血循環(huán)的腫瘤細(xì)胞，研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者外周血循環(huán)中每106～107個白細(xì)胞中才能發(fā)現(xiàn)一個CTC。后來人們發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)移灶形成前的很長一段時間，這種細(xì)胞在血液和骨髓中就已經(jīng)存在。人們逐漸開始在CTC對腫瘤患者的腫瘤微轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)的早期發(fā)現(xiàn)、療效評估和預(yù)后評價等方面做了大量的研究。隨著腫瘤細(xì)胞的增殖，一些腫瘤細(xì)胞可以通過產(chǎn)生某種抑制粘附因子表達(dá)的物質(zhì)，這種物質(zhì)可以增加其自身運(yùn)動能力并可使之從母體腫瘤脫落，這些脫落的腫瘤細(xì)胞再產(chǎn)生某種蛋白溶解酶，來破壞宿主周圍結(jié)締組織進(jìn)而侵入血液循環(huán)系統(tǒng)。

雖然外周血中的CTC含量極少，若我們有敏感度和特異度均較高的檢測技術(shù)，將有可能在腫瘤剛剛形成微轉(zhuǎn)移時就捕獲到腫瘤發(fā)生的信息，這樣就可能早期監(jiān)測到腫瘤轉(zhuǎn)移的情況，成為腫瘤的“液態(tài)活檢”。由此，我們就可實(shí)現(xiàn)對腫瘤向外侵襲的早期發(fā)現(xiàn)、對治療效果的準(zhǔn)確監(jiān)測以及對預(yù)后的正確評估。

1 CTC常用的檢測方法

由于外周血中的CTC數(shù)量極少，若要檢測外周血CTC，首先要進(jìn)行CTC的富集（分離和純化），即基于密度、體積或免疫磁性等物理化學(xué)原理特異性地將這些細(xì)胞富集起來，以提高檢測CTC時的敏感性。研究時常用的富集方法包括密度梯度離心法，膜濾過分離法，陽性和陰性免疫磁珠分離法等。富集之后，依靠細(xì)胞學(xué)方法或核酸檢測技術(shù)，利用腫瘤特異性檢測標(biāo)志物來檢測發(fā)現(xiàn)CTC[2]，常用的檢測技術(shù)包括免疫細(xì)胞化學(xué)法，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，流式細(xì)胞術(shù)，光導(dǎo)纖維陣列掃描技術(shù)，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)術(shù)，鐳射掃描細(xì)胞計數(shù)器，生物芯片技術(shù)等。

2 CTC的檢測在臨床中的應(yīng)用前景

雖然目前CTC的檢測方法限制了CTC在臨床上的應(yīng)用，但近年來的大量研究顯示CTC在臨床應(yīng)用上有巨大的參考價值。目前，CTC在臨床上的應(yīng)用主要概括如下幾個方面。

2.1 CTC與腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā) 轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是腫瘤患者死亡的主要原因，但我們對于腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的發(fā)生發(fā)展過程知之甚少，目前研究顯示，腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移主要通過淋巴及血液系統(tǒng)播散。即使從外周血中檢測到了CTC并不意味著一定存在或?qū)纬蛇h(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶，但可以預(yù)測轉(zhuǎn)移灶形成的概率會大大增加。腫瘤細(xì)胞通過脫落、侵襲、滲入等一系列活動進(jìn)入血液循環(huán)或淋巴管，然后種植于遠(yuǎn)處器官[3]，并進(jìn)行增殖，最后形成微轉(zhuǎn)移灶，可能是腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的早期事件，研究結(jié)果顯示，外周血中CTC水平與腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。因此，可以認(rèn)為腫瘤的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移有CTC的參與，CTC可能成為臨床監(jiān)測早期轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的指標(biāo)。

2.2 CTC與個體化治療 個體化治療是指醫(yī)生針對每一個不同的腫瘤病人制定出不同的治療方案。目前在臨床上，很少有醫(yī)師做嚴(yán)格的個體化治療方案，一般是基于患者的一般情況、腫瘤的大小、性質(zhì)、病理分期、淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等情況而選擇的綜合治療。近年來對CTC的大量研究顯示，檢測CTC有助于臨床醫(yī)師制定個體化治療方案[4]。隨著腫瘤患者化療藥物的使用，腫瘤細(xì)胞基因的表達(dá)及突變可發(fā)生變化，從而導(dǎo)致對藥物敏感性的改變。所以在個體化治療的過程中應(yīng)該對腫瘤的基因表達(dá)及突變進(jìn)行實(shí)時監(jiān)測，但是臨床的實(shí)際情況卻限制了腫瘤細(xì)胞的及時獲取。而近年來開發(fā)的CTC的檢測及收集技術(shù)為解決這一難題提供了可能。

2.3 CTC與腫瘤預(yù)后 臨床上常用的診斷轉(zhuǎn)移的影像學(xué)方法以及顯微鏡方法能夠確定存在腫瘤轉(zhuǎn)移時，事實(shí)上已經(jīng)發(fā)生了腫瘤細(xì)胞向外周血及骨髓等處的播散，可見這些方法不能很好的顯示患者的存活時間。CTC的檢測及應(yīng)用使人們第一次可以以一個量化的指標(biāo)告訴醫(yī)生和患者他的存活時間。CTC可以成為判斷肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因子[5-6]，與臨床傳統(tǒng)的影像學(xué)檢查相比，可以更早期、更敏感的預(yù)測患者的OS，且可檢測的重復(fù)性好[7-8]。以上研究顯示惡性腫瘤外周血中CTC的數(shù)量是判斷腫瘤患者預(yù)后的一個重要的預(yù)測因子，將來會對臨床患者治療效果及預(yù)后的評估有巨大的研究價值。

結(jié)論與展望CTC在臨床具有巨大的潛在價值，盡管目前CTC的檢測方法的敏感性和特異性等有限，限制了CTC在臨床作為“液體活檢”的實(shí)時監(jiān)測功能，但隨著檢測方法越來越成熟，CTC有望成為一種新型非侵入性診斷工具。腫瘤患者在抗腫瘤治療前后，監(jiān)測外周血中CTC的數(shù)量，以判斷腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)情況，治療效果，未來可能的預(yù)后情況等。這在將來也許是臨床抗腫瘤治療過程中的一項(xiàng)有效評估指標(biāo)。這個研究領(lǐng)域的不斷發(fā)展，有利于腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的早期發(fā)現(xiàn)，有利于臨床腫瘤的治療方案的制定，并有助于評估腫瘤患者的治療效果及預(yù)后以確定進(jìn)一步治療手段，進(jìn)而提高患者生活質(zhì)量和預(yù)期壽命。

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