王梓桐 林海

摘 要：云芝免疫調(diào)節(jié)多糖是云芝中生物調(diào)節(jié)活性突出的一類物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)前人研究的基礎(chǔ)上參考真菌活性的提取工藝，分析液氮和機(jī)械破碎對(duì)云芝多糖的影響，選取出提取云芝多糖的最佳工藝。結(jié)果表明，在液氮研磨的條件下80℃時(shí)200目是最佳的工藝條件。

關(guān)鍵詞：云芝 液氮 多糖 蛋白

中圖分類號(hào)：G63 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2018）01（a）-0245-02

云芝的藥效成分有多種，云芝活性物質(zhì)有免疫調(diào)節(jié)蛋白和多糖，目前云芝蛋白和多糖有很多種提取方法，一般的方法常先用水提醇沉獲得粗提物，然后在此基礎(chǔ)上采用酶解、微波、超聲波，膜處理和機(jī)械粉碎等方法進(jìn)行輔助提取或精制[1-2]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)液氮研磨和機(jī)械粉碎兩種方式對(duì)云芝子實(shí)體進(jìn)行處理，并在不同目數(shù)和不同溫度條件下用水提法提取多糖進(jìn)行初步研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

云芝實(shí)體、液氮，苯酚、濃硫酸、甲醇、磷酸。

篩子：40目篩，100目篩，200目篩（浙江上虞市道墟儀器篩具產(chǎn)）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

取一定量云芝實(shí)體兩份，50℃烘干后分成兩份。一份粉碎機(jī)處理。另一份液氮研磨至粉末狀。然后分別過(guò)40目篩、100目篩和200目篩。

取上述制備的兩種粉末各5g，分別加入200mL雙蒸水，37℃、80℃條件下提取3h，每隔15min取1.5mL反應(yīng)液。離心后取上清待測(cè)；在100℃條件下，提取3次每次60min，每次加水150mL離心合并上清。定容至500mL，每次取樣1.5mL待測(cè)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：稱取于50mg葡萄糖，加水溶解得1mg/mL的對(duì)照品溶液。精密量取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL于50mL容量瓶定容、搖勻。分別精密吸取以上對(duì)照品溶液1.0mL，加5%苯酚試液0.5mL，搖勻，迅速加濃硫酸2.5mL，振搖2min。另量取1.0mL蒸餾水按上述方法操作，作為空白對(duì)照。在490nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，葡萄糖濃度C為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Abs=11.48C+0.01，R2=0.9981.結(jié)果表明，葡萄糖在0.02～0.10mg/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，重現(xiàn)性良好（見(jiàn)圖1）。

子實(shí)體樣品總糖含量測(cè)定：取上述200μL多糖樣品溶液，5倍稀釋后，再加0.5mL 5%苯酚的溶液，迅速加2.5mL濃硫酸并搖勻，在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論

本研究中，我們發(fā)現(xiàn)采用不同的預(yù)處理方式，云芝多糖的提取率均不相同。在相同溫度下，隨著時(shí)間的變化云芝多糖的釋放速度也有一定的變化趨勢(shì)（見(jiàn)圖2～3）。

由圖2和圖3可知，在37℃條件下云芝多糖的提取率有穩(wěn)定上升趨勢(shì)，在80℃條件下，相較于37℃條件下云芝整體的提取率有明顯優(yōu)勢(shì)。在該條件下，100～200目的樣品，云芝多糖的提取率相對(duì)200目以上及40～100目為最低。200目以上液氮預(yù)處理?xiàng)l件下相對(duì)于其他樣品有極其明顯的優(yōu)勢(shì)，達(dá)到了最高值。而且對(duì)于不同目數(shù)的顆粒，預(yù)處理方式對(duì)多糖的提取影響均不同。100～200目之間，二者差異最小。40～100目機(jī)械粉碎方式相對(duì)占有優(yōu)勢(shì)。200目以上，液氮研磨要更好一些。

4 結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)液氮研磨和機(jī)械粉碎兩種方式對(duì)云芝子實(shí)體進(jìn)行處理，并在不同目數(shù)和不同溫度條件下用水提法提取多糖，通過(guò)這一系列的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)提取最佳條件是80℃條件下，液氮研磨的，顆粒大小在200目以上。

參考文獻(xiàn)

[1] 孟慶虹，張守文.真菌多糖的研究進(jìn)展[J].糧食與食品工業(yè)，2003（3）：42-44.

[2] 李小定，榮建華，吳謀成.真菌多糖生物活性研究進(jìn)展[J].食用菌學(xué)報(bào)，2002，9（4）：50-58.