， ，

血管性癡呆(vascular dementia，VD)是指由缺血性卒中、出血性卒中和造成記憶、認知和行為等腦區(qū)低灌注腦血管疾病所致的嚴重認知功能障礙綜合征，以記憶、認知、言語、情感、性格等方面的能力減退和消失為主要表現(xiàn)，是老年人群的常見病、多發(fā)病，僅次于阿爾茨海默病[1]。西醫(yī)通常以改善腦細胞代謝、改善腦血液循環(huán)等對癥治療為主，目前無特效的治療方法及藥物[2]。交通任督法具有培元固本、通經(jīng)活絡、醒腦開竅的作用，臨床證實對VD病人效果明顯?，F(xiàn)代醫(yī)學臨床、基礎研究結果證實，中樞神經(jīng)系統(tǒng)膽堿能系統(tǒng)功能損害與VD病人認知功能障礙密切相關，本實驗觀察交通任督法對VD大鼠學習記憶功能及海馬乙酰膽堿酯酶(AchE)活性的影響，探討其治療機制。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 成年SD雄性大鼠40只，體重400 g±10 g[動物由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，許可證號：SCXK(京)2014-0004]，實驗動物篩選剔除后隨機分為假手術組、模型組、交通任督法針刺組、西藥對照組，每組10只。

1.2 儀器 Morris水迷宮(中國醫(yī)學科學院藥物研究所DMS-2，山西省中醫(yī)藥研究院中心實驗室提供)；YL-3型石蠟切片機(上海儀表廠)；4號手術絲線[強生(中國)醫(yī)療器械有限公司]，眼科用手術剪(上海醫(yī)療器械廠)，眼科用手術鑷(上海醫(yī)療器械廠)。

1.3 藥品及試劑 水合氯醛(國藥集團上?；瘜W試劑公司)，尼莫同(由德國拜耳公司提供)，硝普鈉(北京雙鶴藥業(yè)股份有限責任公司)，注射用青霉素鈉(華北制藥有限公司)，生理鹽水、乙酰膽堿酯酶測定試劑盒(南京建成生物工程研究所生產)。

1.4 針具 “漢醫(yī)牌”一次性針灸針(0.25 mm×25 mm)：北京漢醫(yī)醫(yī)療器械中心。

1.5 造模方法 大鼠進行常規(guī)喂養(yǎng)適應5 d后，進行Morris水迷宮預實驗篩選，統(tǒng)計所有大鼠潛伏期均值，剔除太快及太慢的，將剩余大鼠根據(jù)潛伏期分為3組：0～20 s、20 s～40 s、40 s～60 s，從每組隨機選出3只或4只大鼠，共10只作為假手術組(空白組，手術期間可能存在大鼠死亡)，余為造模組。

采用兩血管阻斷加硝普鈉降壓法復制VD模型[3-5]：將大鼠用10%的水合氯醛(0.35 mL/100 g)腹腔注射麻醉后，仰臥位固定在手術臺上，常規(guī)消毒，頸正中切口，分離雙側頸總動脈；腹腔注射硝普鈉(3.5 mg/kg體重)后，隨即用無創(chuàng)動脈夾夾閉雙側頸總動脈，夾閉10 min再通10 min，反復3次，再通后在手術處撒適量青霉素粉末，縫合傷口，放回籠中保溫飼養(yǎng)。假手術組麻醉及手術過程同上，但不阻斷頸總動脈及注射硝普鈉。

1.6 治療方法 術后第7天切口愈合，存活大鼠再次進行Morris水迷宮測試(除假手術組)，存在顯著學習記憶障礙的大鼠為VD大鼠模型(以第1次水迷宮檢測的大鼠逃避潛伏期均值作為參考值，計算造模后大鼠逃避潛伏期均值和參考值之差與參考值的比值，大于20%為癡呆大鼠)。將第2次水迷宮實驗選出的造模組大鼠隨機分為交通任督法針刺組、西藥對照組、模型組，每組10只。假手術組及模型組未予任何治療。

1.6.1 交通任督法針刺組 針刺模型大鼠“風府”“百會”“人中”“關元”穴(取穴參照林文注等編著的《實驗針灸學》[6])，深度約0.5寸，平補平瀉，留針30 min，每日1次，連續(xù)15 d。

1.6.2 西藥對照組 模型大鼠給予尼莫同12 mg/kg(尼莫同每片30 mg，10片，先用少量溫水制成混懸液，再加蒸餾水至500 mL，即為0.6 mg/mL的尼莫同混懸液)，按20 mL/kg體重灌胃，每日1次，連續(xù)15 d。

1.7 檢測方法

1.7.1 行為學觀測 Morris水迷宮定位航行試驗：治療結束后，進行水迷宮測試。水迷宮為高50 cm、直徑150 cm的圓形水池，水深30 cm，水溫保持在(20±2)℃。將水池等分為4個象限，任選一象限作為第一象限，并在其正中離池壁30 cm處放一直徑為9 cm的圓形平臺，平臺頂?shù)陀谒? cm。自動攝像系統(tǒng)同步記錄大鼠運動軌跡，整個訓練期間迷宮外參照物保持不變，避免時間、光線等外界條件的干擾。將大鼠置于平臺10 s，再將其從平臺對側象限面對池壁入水，開始自由游動，記錄1 min內尋找平臺時間(逃避潛伏期)。若大鼠在1 min內找到平臺，記錄其實際逃避潛伏期及游泳路程；若大鼠在1 min內未找到平臺，由測試者將其引上平臺并停留10 s，逃避潛伏期記錄為1 min，觀察3 d，每日2次。以3 d找到平臺的平均逃避潛伏期和平均游泳路程評價動物的學習記憶能力[7]。

1.7.2 海馬AchE測定 大鼠斷頭后快速取出全腦，置于冰盒上，分離海馬并稱重。按照重量和體積1︰10的比例，加入生理鹽水冰浴勻漿，4 ℃離心(3 000 r/min，10 min)，取上清液，酶聯(lián)免疫吸附法測定，操作遵照試劑盒說明進行。

2 結 果

2.1 對VD大鼠學習記憶能力的影響 大鼠逃避潛伏期和游泳路程比較，假手術組、交通任督法針刺組和西藥對照組均短于模型組(P<0.01)。詳見表1。

組別n逃避潛伏期(s)游泳路程(cm)假手術組 1010.55±2.131)112.27±20.631) 模型組 1057.07±6.40 938.66±246.83 交通任督法針刺組1019.64±8.651)228.39±106.471)西藥對照組 1018.93±9.031)227.39±105.891) 與模型組比較,1)P<0.01。

2.2 各組大鼠海馬組織AchE活性表達 大鼠海馬AchE含量比較，假手術組、交通任督法針刺組、西藥對照組均高于模型組(P<0.01)。詳見表2。

組別 nAchE假手術組 10500.51±35.651)模型組 10420.05±15.22 交通任督法針刺組10466.87±22.551)西藥對照組 10471.77±18.631) 與模型組比較,1)P<0.01。

3 討 論

交通任督法是指取任督二脈之經(jīng)穴為主 ，施以相應的針刺手法，以達到調整人身陰陽、通暢經(jīng)絡氣血、祛除疾病目的。郭耀康老師從事針灸臨床工作40余年，認為人體疾病發(fā)生的根本為陰陽失調，如《素問· 陰陽應象大論》曰：“ 陰陽者，天地之道也，萬物之綱紀，變化之父母，生殺之本始，神明之府也” 。而任督二脈為人身陰陽的總匯，兩者一源而二歧，督則由會陰而行背，任則由會陰而行腹，最后交接于口周。督脈總督一身之陽，任脈總督一身之陰，任督二脈共同構成一個陰陽循環(huán)的體系，故任督二脈經(jīng)氣循環(huán)通暢，對于五臟六腑、十二經(jīng)脈起重要的影響和治療作用[8]。

VD屬于中醫(yī)“癡呆”的范疇，較早有認識，《靈樞·海論》曰：“髓海不足，腦轉耳鳴，脛酸眩冒，目無所見，懈怠安臥”?！鹅`樞·調經(jīng)論》曰：“血并于上，氣并于下，亂而喜忘”；《臨證指南醫(yī)案》指出：“中風初起，神呆遺尿。老人厥中顯然”；《雜病源流犀燭·中風》更進一步指出：“有中風后善忘”。其病位在腦，病機為髓海不足，氣、火、痰、瘀內阻于腦。癡呆的發(fā)生與任督二脈密切相關，從循行分布上看，《難經(jīng)·二十八難》記載：“督脈者……起于下極之腧，并于脊里，上至風府，入屬于腦”“任脈者，起于中極之下，以上至毛際，循腹里……入目絡舌”；又如《素問：骨空論》記載督脈的分支“上額交巔上，入絡腦”“督脈、任脈和諸陽皆起于頭”。從功能角度上看，腦位于顱內，為髓之海，其功能的發(fā)揮依賴任脈的氣血津液濡養(yǎng)；督脈則通髓達腦。因此，任、督脈對治療腦部疾病有重要意義，運用任督二脈的腧穴，可有效調整人體陰陽平衡[9]。郭耀康老師治療癡呆常選用任督二脈之關元、中脘、承漿、人中、百會、風府。交通任督法的取穴：關元是人體的強壯要穴，可鼓舞人體正氣；中脘穴為任脈上六腑經(jīng)氣交會之處，可振奮脾胃功能，使人體氣血調和，經(jīng)脈通暢；承漿穴是任督二脈交會之處，又是足陽明經(jīng)左右交叉之地，可用于“卒中惡死”“偏風半身不遂，口眼歪斜，暴暗不能言”等；人中穴為督脈、手足陽明之會穴，可調節(jié)腦內氣血的偏盛偏衰；百會是督脈要穴，針刺可疏通督脈經(jīng)氣；風府穴為督脈入屬于腦之處，故腦部疾病常用。以上各穴合用，共奏調理陰陽、疏通經(jīng)絡之效[10]。

隨著社會人口老齡化及腦血管病發(fā)病率不斷上升，致使當前VD的發(fā)病率、致死率逐年增加[11]。 尤其在世界多數(shù)發(fā)展中國家，VD已成為繼阿爾茨海默病后導致老年性癡呆的第二大原因[12]。由于VD病人除神經(jīng)系統(tǒng)定位損害的癥狀和體征，其還存在不同程度的記憶、計算、思維、定向和判斷等能力障礙，同時病人的生活質量有不同程度下降，給病人及家庭帶來沉重的心理負擔，同時也加重社會負擔，而VD作為目前唯一一種可預防的癡呆類型，若病人及早發(fā)現(xiàn)、早期診斷明確、及時干預治療，VD是可以防治的，是可逆的[5]。

現(xiàn)代醫(yī)學認為海馬組織是學習記憶的高級活動中樞，其膽堿能神經(jīng)元膽堿(Ach)的含量與記憶功能密切相關，Ach在膽堿乙酰轉移酶(ChAT)催化下合成，釋放后被AchE迅速水解，ChAT與AchE共同維持Ach的動態(tài)平衡，因此通過測量AchE含量可了解Ach的代謝狀況[11-12]。由本實驗結果表明：VD模型組大鼠AchE含量較假手術組降低，學習記憶能力下降；而針刺組、西藥組大鼠AchE含量較VD模型組大鼠升高，學習記憶能力增強。證實交通任督針法可提高VD大鼠的學習記憶能力，提高VD大鼠海馬組織AchE的含量，其作用機制可能與調節(jié)AchE的代謝有關。

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