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        不同植物提取物對(duì)番茄花葉病毒病的防治效果研究

        2018-06-04 10:51:23龐梓辰穆淑媛張燦剛
        中國(guó)果菜 2018年5期
        關(guān)鍵詞:效果

        龐梓辰,穆淑媛,張燦剛

        (1.山東省泰安第一中學(xué),山東泰安 271018;2.泰安市泰山林業(yè)科學(xué)研究院,山東泰安 271000;3.泰安市植物源農(nóng)藥工程技術(shù)研究中心,山東泰安 271033)

        植物中蘊(yùn)藏著豐富的抗病毒天然活性物質(zhì),是開(kāi)發(fā)抗植物病毒制劑的重要資源[1]。魚(yú)腥草、馬齒莧、商陸的次生代謝產(chǎn)物中有抗病毒、抗菌的活性成分,魚(yú)腥草的主要化學(xué)成分中含有癸酰乙醛(也叫魚(yú)腥草素)、黃酮類(lèi)等活性物質(zhì)[2];馬齒莧的主要成分包括酸類(lèi)、花色苷類(lèi)、揮發(fā)油、生物堿、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖和黃酮類(lèi)等活性物質(zhì)[3];商陸主要化學(xué)成分有商陸多糖、商陸蛋白、三萜皂甙等活性物質(zhì)[4],這些活性成分無(wú)毒、無(wú)殘留、不污染環(huán)境、不殺傷天敵、對(duì)人畜安全,具有廣譜抗菌作用。

        番茄花葉病毒病主要表現(xiàn)為葉片花葉,嚴(yán)重時(shí)凹凸不平;新葉較小且細(xì)長(zhǎng),皺縮、畸形,病株易矮化,花芽分化下降,花、蕾大量脫落,果實(shí)少且小,花臉,極大影響產(chǎn)量,減產(chǎn)可達(dá)30%以上[5,6]。有研究發(fā)現(xiàn),植物源抗病毒制劑對(duì)防治植物病毒病有明顯效果[2],本研究通過(guò)超聲波高效提取魚(yú)腥草、馬齒莧、商陸中次生代謝產(chǎn)物,研制出植物源抗病毒制劑,用于防控番茄花葉病毒病。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 儀器設(shè)備

        JYT-LC型超聲波提取濃縮機(jī)組(該機(jī)組包括100L超聲波提取、夾層蒸汽發(fā)生罐、60L芳香油收集罐、60L負(fù)壓蒸發(fā)罐、60L濃縮罐、160L溶劑回收罐組合而成),濟(jì)寧雙和超聲設(shè)備有限公司生產(chǎn)。

        1.1.2 材料

        魚(yú)腥草,購(gòu)于泰安市宏康藥店;馬齒莧全草、商陸根,采自泰安市徂徠山林場(chǎng),切片(段),80℃烘干,粉碎過(guò)孔徑為0.38mm的篩備用。20%病毒A(生產(chǎn)常用抗病毒化學(xué)藥劑),齊齊哈爾華豐化工有限公司生產(chǎn)。

        1.2 方法

        1.2.1 植物粗提物的三種提取方法

        超聲波提取法:將魚(yú)腥草粉、馬齒莧全草粉、商陸根,按重量比 1∶1∶1混合均勻,稱取混合粉 20kg,進(jìn)行超聲波室溫提取,提取條件為超聲波頻率30kHz、80%乙醇、料液比為1∶15、提取時(shí)間15min。提取液過(guò)濾,共提取2次,合并濾液,濃縮,定容至3000mL,搖勻備用,定為A提取液。

        煎煮法:稱取魚(yú)腥草、馬齒莧全草、商陸根混合粉20kg,加水 300L,浸泡 30min,水沸后煎 80min,過(guò)濾,共煎煮兩次,合并濾液,濃縮,定容至3000mL,搖勻備用,定為B提取液。

        連續(xù)回流提取法:稱取魚(yú)腥草、馬齒莧全草、商陸根混合粉20kg,加80%乙醇300L,沸后回流80min,過(guò)濾,共提取兩次,合并濾液,濃縮,定容至3000mL,搖勻備用,定為C提取液。

        1.2.2 接種用病毒制備方法

        病毒的制備方法是:采感染病毒病的番茄鮮葉,按鮮病葉∶緩沖液 =1∶3(g∶mL)加緩沖液,緩沖液種類(lèi)為 OPBS,緩沖液的酸堿度pH7。將上述混合體用石英砂碾磨成勻漿,用紗布過(guò)濾,摩擦接種。

        1.3 防治番茄花葉病毒病試驗(yàn)

        1.3.1 田間預(yù)防效果試驗(yàn)

        2016年5月在泰安市岱岳區(qū)房村鎮(zhèn)番茄種植園進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)番茄苗出現(xiàn)第一片真葉(破心)時(shí),噴施藥劑,每個(gè)處理噴施番茄苗100株。之后間隔7d噴一次,連噴3次。藥劑處理為A提取液、B提取液、C提取液、20%病毒A(生產(chǎn)常用抗病毒化學(xué)藥劑)對(duì)照、清水對(duì)照,共5個(gè)處理,藥劑使用濃度均為50μg/mL,每個(gè)處理3次重復(fù),隨機(jī)排列。藥劑噴施完畢后,接種病毒。接種10d后調(diào)查病情。計(jì)算病情指數(shù)及預(yù)防效果。

        1.3.2 田間治療效果試驗(yàn)

        當(dāng)番茄苗第一花序現(xiàn)蕾,接種病毒,接種方法同上。接種48h后噴施藥劑,藥劑處理和噴施方法同上。每次噴藥前以及第3次噴藥后第7d后調(diào)查病情。

        1.4 測(cè)量指標(biāo)與方法

        1.4.1 病毒病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

        0級(jí)—無(wú)病癥;1級(jí)—葉片明顯呈花葉或黃化,有瘡斑;3級(jí)—葉片凹凸不平,變小且畸形;5級(jí)—植株形成叢枝,大量落花落蕾;7級(jí)—整個(gè)植株矮化、果小質(zhì)劣,果實(shí)花臉。

        1.4.2 計(jì)算方法

        式中:CK0—對(duì)照區(qū)用藥前病情指數(shù);

        CK1—對(duì)照區(qū)用藥后病情指數(shù);

        CL0—處理區(qū)用藥前病情指數(shù);

        CL1—處理區(qū)用藥后病情指數(shù)。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 田間預(yù)防效果

        表1 抗病毒制劑對(duì)番茄花葉病毒病的預(yù)防效果Table 1 Preventive effect of antiviral agents on tomato virus disease

        由表1可以看出,三種提取液對(duì)番茄花葉病毒病均有一定的預(yù)防效果。A提取液預(yù)防效果為87.01%,C提取液次之,預(yù)防效果為77.78%,均高于常用抗病毒化學(xué)藥劑20%病毒A;B提取液的預(yù)防效果最差,僅為55.06%,低于20%病毒A。綜合分析,超聲波提取的A提取液,其成本低、抗病毒效果好,較為理想。

        2.2 田間治療效果

        由表2可以看出,三種提取液通過(guò)3次使用后,均取得了一定的治療效果。A提取液具有較好的治療效果,相對(duì)防效為74.36%,顯著高于相對(duì)防效為50.32%的C提取液,相對(duì)防效為43.03%的B提取液,及相對(duì)防效為50.36%的對(duì)照20%病毒A的治療效果。綜合分析,A提取液使用濃度50μg/mL具有較好的治療效果。

        表2 抗病毒制劑對(duì)番茄花葉病毒病的治療效果Table 2 Treatment effect of antiviral agents on tomato virus disease

        3 討論

        植物活性物質(zhì)提取方法已有許多報(bào)道,如煎煮法、酶解法、浸漬法、連續(xù)回流法、微波提取法和超聲波提取法等[7],其中,超聲波提取法的效率最高。本研究運(yùn)用三種方法提取魚(yú)腥草、馬齒莧、商陸混合提取物,通過(guò)提取物對(duì)番茄花葉病毒病防治效果的田間對(duì)比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),超聲波提取液對(duì)番茄花葉病毒病具有較好的預(yù)防和治療效果,分別達(dá)到87.01%和74.36%,均高于煎煮法提取物、連續(xù)回流提取物和常用抗病毒化學(xué)藥劑20%病毒A的防治效果。說(shuō)明三種植物的超聲波混合提取物均具有較高的抗病毒活性,是天然的抗病毒劑,為植物病毒病的生物防控,以及果蔬的安全生產(chǎn)開(kāi)辟新的途徑。

        [1] 張豐強(qiáng).臨床大本草[M].北京∶華夏出版社,2002.

        [2] 孫謙,胡中海,孫志高,等.魚(yú)腥草的生物活性及其機(jī)理研究進(jìn)展[J].食品科學(xué),2014,35(23)∶354-358.

        [3] 牛廣財(cái),朱丹.馬齒莧化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,33(6)∶1090.

        [4] 王鵬程,王秋紅,趙珊,等.商陸化學(xué)成分及藥理作用和臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中草藥,2014,45(18)∶2722-2731.

        [5] 趙璇.番茄病毒病的發(fā)生規(guī)律及無(wú)公害綜合治理 [J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,(02)∶71-72.

        [6] 鄭旭東,許偉東,方振興,等.露地番茄病毒病無(wú)公害綜合防治技術(shù)[J].農(nóng)業(yè)科技通訊,2011,(06)∶209-211.

        [7] 夏日照,廖曉蘭.農(nóng)用植物活性成分提取技術(shù)研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通報(bào),2015,31(03)∶49-56.

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