包長龍

(內(nèi)蒙古通遼市食品藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

波仁-12(保腎散)的處方由鹿茸、紫河車、杜仲、龜甲(制)、關(guān)黃柏、麥冬、冬蟲夏草、巴戟天、鎖陽、黨參、千年健、續(xù)斷等12味單藥組成的散劑。主要用于各種腎病及早期尿毒癥[1]。本試驗對波仁-12(保腎散)中關(guān)黃柏藥材中所含的藥用成分鹽酸小檗堿利用HPLC法進(jìn)行含量測定，結(jié)果，測定準(zhǔn)確，方法可行，可作為波仁-12(保腎散)的質(zhì)量控制方法。

1 儀器和試劑

1.1 儀器：島津LC-10AT型高效液相色譜儀(日本產(chǎn))，SPD-VP紫外檢測器，CLASS-VP色譜工作站，TP-300超聲波清洗機(jī)，色譜柱：shim-pack VP-ODS C18柱(250×4.6mm，粒度5μm)。

1.2 試劑與試藥： 甲醇、乙腈(色譜純，天津天大化學(xué)試劑廠)；水為試驗用高純水。其它試劑均為分析純。鹽酸小檗堿對照品(編號：110713-201212，供含量測定用，純度98.1%計)：由中國食品藥品檢定研究院提供；供試品由內(nèi)蒙古通遼市科左中旗蒙醫(yī)院提供。批號為: 20081106、20090205、20090508。

2 方法學(xué)考察

2.1 色譜條件： 流動相：乙腈-0.05%磷酸二氫鉀溶液(氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)PH值至5.0)(30:70)為流動相；流速1.0mL/min；柱溫25℃；檢測波長為346nm；進(jìn)樣量：10μL[2]。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備： 精密稱取鹽酸小檗堿對照品13.12mg(實際為13.12mg×98.1%=12.87mg)，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1mL含鹽酸小檗堿25.74μg)。

2.2.2 供試品溶液的制備： 精密稱取本品約2g，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇(1:100)溶液25mL，稱重，密塞，加熱回流30分鐘，放冷，再稱重，用鹽酸-甲醇(1:100)溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 ： 精密量取上述對照品溶液各1、3、5、7、9、10mL，分別置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。各精密吸取10μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，記錄譜圖及峰面積值，以進(jìn)樣量(W:μg)為縱坐標(biāo)，以峰面積值(A)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果鹽酸小檗堿在0.05148～0.5148μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=4.2E+6X-8620.7，r=1.0000。

2.4 精密度試驗 ： 精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液(25.74μg /mL)10μL，連續(xù)進(jìn)5次，測定對照品溶液峰面積，結(jié)果峰面積平均值為1065205，RSD為0.72%。

2.5 穩(wěn)定性試驗： 精密量取同一批供試品溶液10μl，每間隔0、4、8、14h注入色譜儀中，測定記錄峰面積值，結(jié)果平均峰面積值為1061875，RSD為2.0%，表明供試品溶液在1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重現(xiàn)性實驗： 取同一批號為20081106供試品溶液6份，研細(xì)，精密稱取約2g，按上述色譜條件測定每份樣品含量。按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果平均含量(mg/g)為0.312，RSD為1.4%，表明本試驗重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率試驗： 加樣回收試驗：精密稱取含量為0.32mg/g的供試品6份，各約1.0g，精密加入用甲醇配制的濃度為0.1287mg/mL的鹽酸小檗堿對照品溶液3mL，再精密加入甲醇22mL，分別按含量測定項下的方法測定每份供試品含量，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗結(jié)果

3 樣品含量測定

樣品含量測定 取3批供試品(批號為20081106、20090205、20090508)按供試品2.2.2 項下的方法處理并測定，3批樣品的測定，結(jié)果見表2。該條件下鹽酸小檗堿的保留時間為15.8min。

表2 樣品中鹽酸小檗堿含量測定結(jié)果

4 陰性對照試驗

取按處方量并以相同工藝制備的陰性樣品(關(guān)黃柏藥材為陰性)，操作同樣品分析項下方法，測得結(jié)果為：陰性對照品色譜圖中在與鹽酸小檗堿對照品色譜相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其它組分對波仁-12中鹽酸小檗堿的測定無干擾,對照品樣品和陰性樣品色譜峰見圖1、2、3。

5 討論

5.1 檢測波長的選擇：用紫外分光光度儀測定鹽酸小檗堿的吸收光譜，其最大吸收波長在346nm處，與文獻(xiàn)值一致[3,4]，故確定測定波長為346nm。

5.2 系統(tǒng)適用性試驗： 理論塔板數(shù)：N≥2000；拖尾因子：1.48。檢測過程中系統(tǒng)比較穩(wěn)定。

5.3 樣品測定試驗： 樣品測定試驗中RSD≤2.0。波仁-12中鹽酸小檗堿的含量較低，影響檢測的靈敏度，使得RSD值為偏高。

5.4 本操作法簡便、靈敏、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，故認(rèn)為可作控制波仁-12(保腎散)的檢測方法。

[1]內(nèi)蒙古食品藥品監(jiān)督管理局.內(nèi)蒙古蒙藥制劑規(guī)范(第一冊)[M].呼和浩特：人民出版社2007：168.

[2]國家藥典委員會.中國藥典一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3]黃海衛(wèi).川黃柏中鹽酸小檗堿的含量測定研究[J].湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報,2003,9(4)：86-87.

[4]馮果.香連丸中鹽酸小檗堿的含量測定[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報.2011,33(4):7-9.