周敏 丁云暉 陳紅霞

摘 要 目的： 建立HPLC 法測(cè)定甲磺酸雷沙吉蘭片有關(guān)物質(zhì)的方法。方法：采用Eclipse XDB-C18柱、乙腈-高氯酸溶液為流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm等條件下進(jìn)行HPLC測(cè)定。結(jié)果：在該色譜條件下，主藥和有關(guān)物質(zhì)能較好地分離，雷沙吉蘭濃度和峰面積在0.008 2～3.2 mg/ml內(nèi)線性關(guān)系良好（r = 0.999 5，n=8），而雜質(zhì)A和B的濃度和峰面積分別在0.001 6～3.2 mg/ml和0.002 1～3.2 mg/ml內(nèi)呈良好的線性關(guān)系 （r =0.999 6，n=8）。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可行、精密度高，可用于甲磺酸雷沙吉蘭片有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 甲磺酸雷沙吉蘭 HPLC 有關(guān)物質(zhì)

中圖分類號(hào)：R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2018）09-0077-04

Determination of the related substances in rasagiline mesylate tablets by HPLC

ZHOU Min*， DING Yunhui， CHEN Hongxia

（Shanghai Zhongxi Pharmaceutical （Group） Co.， Ltd.， Shanghai 201806， China）

ABSTRACT Objective： To establish a method for the determination of the related substances in rasagiline mesylate tablets by HPLC. Methods： HPLC was performed on Eclipse XDB-C18 column with acetonitrile-perchloric acid solution as a mobile phase at the detected UV wavelength of 210 nm. Results： The resolution between rasagiline mesylate and the other peaks met the requirements. The standard curves of rasagiline mesylate and the related substance A and B showed a good linearity over the range of 0.008 2～3.2 mg/ml， 0.001 6～3.2 mg/ml and 0.002 1～3.2 mg/ml， respectively. Conclusion： This method is simple， accurate and feasible with higher precise， and can be used as quality control of the related substances in rasagiline mesylate tablets.

KEy WORDS rasagiline mesylate； HPLC； related substances

雷沙吉蘭是一種有效的、不可逆的、選擇性單胺氧化酶B（MAO-B）抑制劑，能使紋狀體細(xì)胞外多巴胺含量升高[1-3]。雷沙吉蘭在多巴胺能神經(jīng)運(yùn)動(dòng)障礙中的療效，可能是間接通過(guò)升高多巴胺含量及因此而提高多巴胺能活性所實(shí)現(xiàn)[4]。與其他抗帕金森藥物不同的是，甲磺酸雷沙吉蘭還具有保護(hù)神經(jīng)元和長(zhǎng)期增效作用[5-6]。本品適用于治療特發(fā)性帕金森氏?。ú缓嫌米笮喟桶罚┗蜃鳛檩o助治療（與左旋多巴胺合用）治療伴有劑末波動(dòng)的帕金森氏病[1]。

而本研究建立一個(gè)檢測(cè)時(shí)間短、且使用的溶劑相對(duì)環(huán)保的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法。經(jīng)驗(yàn)證，該方法精密度高，專屬性強(qiáng)，適合其有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1100及1200型高效液相色譜儀、紫外檢測(cè)器、1200型DAD檢測(cè)器和色譜工作站（美國(guó)Agilent公司）；AL104電子天平（梅特勒-托利多公司）；乙腈（色譜純，Merck公司）；純化水、氨水（分析純）、高氯酸（優(yōu)級(jí)純）均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。甲磺酸雷沙吉蘭工作用對(duì)照品（批號(hào)：GB17-001，含量99.8%）、2，3-二氫-1H-茚-1-酮 （簡(jiǎn)稱：雜質(zhì)A，純度 99.9%，水分未檢出）、2，3-二氫-1H-茚-1-胺鹽酸鹽（簡(jiǎn)稱：雜質(zhì)B，純度99.96%，水分1.15%）、甲磺酸雷沙吉蘭片（批號(hào)：T111001、T111002、T111003、20170809，規(guī)格：每片1 mg）均由上海中西三維藥業(yè)有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 mm）；流動(dòng)相：緩沖液（高氯酸溶液4.2 ml，加入水1 000 ml，用濃氨水調(diào)節(jié)至 pH 2.5）-乙腈（75∶25））；流速：1.0 ml/min ；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；進(jìn)樣量：50 ml；柱溫：25 ℃。

1.2.2 溶液配制

1）供試品溶液 稱取本品細(xì)粉適量，加水適量，超聲處理使甲磺酸雷沙吉蘭溶解并制成每1 ml 中約含雷沙吉蘭0.13 mg 的溶液，離心，取上清液用0.45 μm 濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。

2）對(duì)照溶液 精密吸取供試品溶液1 ml 置100 ml量瓶中，用水釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

3）系統(tǒng)適用性溶液 分別稱取甲磺酸雷沙吉蘭對(duì)照品與雜質(zhì)A、 B對(duì)照品適量，加流動(dòng)相適量溶解并用水稀釋制成每1 ml 中分別約含2 μg 的混合溶液，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。

1.2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

1）樣品 取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于甲磺酸雷沙吉蘭5 mg），置25 ml 量瓶中，加2 mol/L 鹽酸溶液1 ml，80 ℃條件下水浴加熱3 h，冷卻后，加2 mol/L 氫氧化鈉溶液1 ml 中和，作為酸破壞樣品；加2 mol/L 氫氧化鈉溶液1 ml，室溫放置3.5 h，加2 mol/L 鹽酸溶液1 ml 中和，作為堿破壞樣品；加水適量溶解后，80℃條件下水浴加熱5 h，放冷，作為高溫破壞樣品；加3%雙氧水1 ml，室溫放置5 h，作為氧化破壞樣品；加水適量溶解后，置紫外光（4 500 lx）下直接照射5 h，作為光照破壞樣品；上述樣品均用水稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液用0.45 mm 濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液50 ml進(jìn)樣，記錄色譜圖。

2）空白輔料 取空白輔料適量，加水制成每 1 ml中約含空白輔料 8 mg 的溶液，采用上述樣品專屬性試驗(yàn)方法，對(duì)空白輔料用強(qiáng)光照射、高溫、酸水解、堿水解和氧化的方法進(jìn)行加速破壞，處理后的樣品取續(xù)濾液進(jìn)行HPLC分析，以研究輔料是否干擾樣品有關(guān)物質(zhì)檢查。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)樣測(cè)定，在上述色譜條件下，理論板數(shù)按雷沙吉蘭峰計(jì)10 898，甲磺酸雷沙吉蘭峰與雜質(zhì)A、B峰間的分離度分別為22.88和10.42（圖1）。

2.1.2 輔料干擾

空白輔料在相對(duì)保留時(shí)間0.5之前出峰，不干擾主藥的測(cè)定。

2.1.3 檢測(cè)限定量限

精密稱取甲磺酸雷沙吉蘭、雜質(zhì)A、B對(duì)照品，分別不斷地稀釋后進(jìn)樣測(cè)定，按信噪比S/N=3 計(jì)算檢測(cè)限，按信噪比S/N=10 計(jì)算定量限（表1）。

2.1.4 線性關(guān)系

分別精密稱取甲磺酸雷沙吉蘭對(duì)照品與雜質(zhì) A 和B 適量，分別加水適量使溶解，并用水稀釋成數(shù)個(gè)濃度的供試品溶液，精密吸取 50 ml 注入液相色譜儀中測(cè)定，結(jié)果見表2。

2.1.5 校正因子

以表2中的線性方程，計(jì)算雜質(zhì)A、B相對(duì)于甲磺酸雷沙吉蘭的校正因子，結(jié)果顯示：雜質(zhì)A、B校正因子范圍均在0.2～5.0之內(nèi)、0.9～1.1之外[8]（表2），可以采用加校正因子主成分自身對(duì)照法計(jì)算不在范圍內(nèi)的雜質(zhì)A、B的含量。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品的供試品溶液、對(duì)照溶液各6份進(jìn)行HPLC測(cè)定，經(jīng)計(jì)算雜質(zhì)總量平均為0.015%，RSD為3.8%，具有良好的重復(fù)性。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品溶液，在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣測(cè)定，考察供試品中雜質(zhì)峰面積的穩(wěn)定性，結(jié)果表明供試品溶液在10 h 內(nèi)雜質(zhì)個(gè)數(shù)沒(méi)有增加，雜質(zhì)總量也基本穩(wěn)定（表3）。

2.1.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取雜質(zhì)A、雜質(zhì)B及甲磺酸雷沙吉蘭對(duì)照品適量，按處方量加入輔料，加適量流動(dòng)相溶解，并用水稀釋至以有關(guān)物質(zhì)對(duì)照溶液濃度 50%為基準(zhǔn)濃度的50%、100%、150%溶液。進(jìn)樣進(jìn)行液相色譜測(cè)定，并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、甲磺酸雷沙吉蘭的測(cè)得量和回收率（表4）。結(jié)果表明，雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、甲磺酸雷沙吉蘭的回收率良好。

2.1.9 專屬性試驗(yàn)

對(duì)破壞后的樣品進(jìn)行液相色譜分析，結(jié)果表明，甲磺酸雷沙吉蘭片在堿、酸、氧化破壞中有明顯降解，在光照和高溫條件下表現(xiàn)出較穩(wěn)定（圖2）。各破壞條件下物料守恒，產(chǎn)生的雜質(zhì)峰能與主峰有效分離。經(jīng)破壞后的空白輔料溶液，均不干擾樣品中雜質(zhì)的檢查。說(shuō)明該色譜條件專屬性較強(qiáng)，可有效檢出各破壞的雜質(zhì)（表5）。

2.1.10 耐用性試驗(yàn)

取同一批供試品溶液各50 ml 分別于0.8 、1.0 、1.2 ml/min 流速下進(jìn)樣，測(cè)定的有關(guān)物質(zhì)分別為0.48%、0.47%、0.44% ；調(diào)節(jié)流動(dòng)相比例為80∶20與70∶30條件下進(jìn)樣，所測(cè)定的有關(guān)物質(zhì)含量分別為 0.49%、0.46% ；將色譜柱更換為Platisil ODS 柱（4.6 mm× 250 mm，5 mm），測(cè)定的有關(guān)物質(zhì)含量為0.50%，表明該方法的系統(tǒng)耐用性良好。

2.2 有關(guān)物質(zhì)檢查

按自身對(duì)照法檢測(cè)并計(jì)算三批樣品雜質(zhì)含量，結(jié)果顯示，四批樣品雜質(zhì)A和B均小于0.50%、總雜質(zhì)均小于1.0%（表6）。

3 討論

本研究與文獻(xiàn)[7]比較，檢測(cè)時(shí)間較短，且使用的溶劑相對(duì)環(huán)保。對(duì)雜質(zhì)A、B和甲磺酸雷沙吉蘭對(duì)照品溶液進(jìn)行DAD掃描，結(jié)果表明雜質(zhì)A、B和甲磺酸雷沙吉蘭均在210 nm處有最大紫外吸收，故選擇210 nm為紫外檢測(cè)波長(zhǎng)。

單純的酸破壞條件下主峰幾乎沒(méi)有降解，故在酸破壞時(shí)，增加了80 ℃條件下水浴加熱3 h。在本法的高溫、酸、堿、氧化、光破壞實(shí)驗(yàn)中，均有雜質(zhì)A、B生成，產(chǎn)生的雜質(zhì)峰能與主峰有效分離，樣品主峰和各破壞性試驗(yàn)樣品主峰的純度因子均大于990，表明本法適用于有關(guān)物質(zhì)的檢查。

對(duì)有關(guān)物質(zhì)檢查方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證表明，該方法能較好地分離雜質(zhì)峰與主峰并能夠定量雜質(zhì)。本驗(yàn)證內(nèi)容符合藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則附錄[9]374，且驗(yàn)證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。

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