劉 星，劉云鵬，付 慧，劉 雪，姜曉亮，楊志偉(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院比較醫(yī)學(xué)中心，北京 100021)

鈉水代謝障礙是導(dǎo)致高血壓等多種心腦血管疾病的重要病因[1 - 3]。腎臟多巴胺D5受體(D5R)通過(guò)調(diào)節(jié)腎臟鈉鉀ATP酶(Na+, K+-ATPase)、鈉氫交換體(Na+/H+exchanger 3，NHE3)的活性在鈉水代謝和血壓調(diào)節(jié)中起重要作用[4]。胃泌素(gastrin)是一種重要的胃腸激素，已被證實(shí)在調(diào)節(jié)機(jī)體鈉水代謝中起重要作用[5]。Gastrin由胃和十二指腸內(nèi)的G細(xì)胞分泌，并釋放到血液循環(huán)中。與其他胃腸激素相比gastrin能夠被腎皮質(zhì)腎小管大量吸收，通過(guò)與其受體CCKBR結(jié)合參與鈉離子調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)運(yùn)[6]。有研究發(fā)現(xiàn)D5R與CCKBR在腎臟近曲小管上皮細(xì)胞共表達(dá)，并通過(guò)相互調(diào)節(jié)參與機(jī)體鈉水代謝[7]，但其機(jī)制并不清楚。

微管(microtubule)是構(gòu)成細(xì)胞骨架的主要成分，由α和β兩種類型的微管蛋白亞基構(gòu)成二聚體，在細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)壬磉^(guò)程中發(fā)揮重要作用[8]。β-tubulin是抗微管藥物的主要靶點(diǎn)，是構(gòu)成細(xì)胞骨架重構(gòu)的關(guān)鍵蛋白[9]，其表達(dá)異常與心肌損傷、癌癥等多種疾病的發(fā)展密切相關(guān)。研究證明,有功能和活性的多巴胺受體在細(xì)胞質(zhì)膜上是動(dòng)態(tài)變化的，且需要完整的微管網(wǎng)絡(luò)的介導(dǎo)[10]。微管蛋白抑制劑nocodazole可以破壞微管蛋白網(wǎng)絡(luò)和并阻斷循環(huán)利用的多巴胺受體遷移至細(xì)胞膜[11]，但目前關(guān)于β-tubulin參與D5R和CCKBR的轉(zhuǎn)運(yùn)的研究甚少。本研究擬探討β-tubulin在CCKBR和D5R相互作用及鈉水代謝中的作用，并比較其在正常人和高血壓患者中的表達(dá)差異。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

正常人腎近曲小管細(xì)胞(NT16)和高血壓患者腎近曲小管細(xì)胞(HT14)由安徽醫(yī)科大學(xué)教授惠贈(zèng)。

1.2 主要試劑與儀器

胃泌素(南京金斯瑞生物科技有限公司，RP12740)，fenoldopam(Sigma公司，SML0198)，小鼠抗人多巴胺D5R抗體(Novus公司，NB110-60019)，兔抗人CCKBR抗體(Santa Cruz公司，SC-33221)，兔抗人Na+, K+-ATP酶抗體(Santa Cruz公司，SC-28800)，β-tubulin抗體(杭州華安公司，M1305-2)，羊抗小鼠IgG(Abcam 公司，Ab175473)。激光共聚焦掃描顯微鏡(Leica TCS SP2，德國(guó))，化學(xué)發(fā)光凝膠成像儀(Tanon-5500)，CO2培養(yǎng)箱(Thermo 公司，F(xiàn)ORMA 371)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)分組

正常人腎近曲小管細(xì)胞(NT16)和高血壓患者腎近曲小管細(xì)胞(HT14)用DMED/F12培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)基中含有表皮生長(zhǎng)因子EGF(10 ng/mL)，地塞米松(36 ng/mL)，三碘甲狀腺氨酸T3(2 ng/mL)，胰島素鐵硒傳遞蛋白ITS(1×)，青霉素/鏈霉素(10 000 U/mL)，胎牛血清(2%)，細(xì)胞長(zhǎng)滿后用胰酶消化傳代培養(yǎng)。

1.3.2 免疫熒光檢測(cè)蛋白表達(dá)定位

細(xì)胞長(zhǎng)至合適濃度，計(jì)數(shù)后調(diào)整濃度為2 × 104個(gè)/mL，接種于無(wú)菌蓋玻片，長(zhǎng)至50%進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。吸凈培養(yǎng)基，無(wú)血清培養(yǎng)基洗一遍，分別加入gastrin、fenoldopam、nocodazole，37℃處理(分組如下)，將正常人腎近曲小管細(xì)胞(NT16)分為四組：第一組：gastrin(10-8mol/L，30 min)組；第二組：nocodazole(10-4mol/L，30 min)+ gastrin(10-8mol/L，30 min)組，第三組：fenoldopam(10-6mol/L，30 min)組；第四組：nocodazole(10-4mol/L，30 min)+ fenoldopam(10-6mol/L，30 min)組。將高血壓患者腎近曲小管細(xì)胞(HT14)分為兩組：第一組：gastrin(10-8mol/L，30 min)組；第二組：fenoldopam(10-6mol/L，30 min)組。處理后加入PBS洗三遍，4%多聚甲醛常溫固定20 min，PBS洗三遍，1% Triton 100破膜15 min，PBS洗三遍，10% FBS常溫封閉30 min，β-tubulin抗體、D5R抗體、CCKBR抗體，4℃過(guò)夜，PBS洗三遍，羊抗小鼠IgG 1∶200室溫1 h，PBS洗三遍，滴一滴DAPI，將圓形玻片取出，小心扣于載玻片上，封片，熒光顯微鏡觀察。

1.3.3 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)

兩種細(xì)胞分別按2 × 104個(gè)/mL濃度接種于100 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，37℃、5% CO2生長(zhǎng)至合適濃度，無(wú)血清培養(yǎng)基漂洗一次，分為五組，第一組：對(duì)照組；第二組：fenoldopam(10-6mol/L，24 h)組；第三組：nocodazole(10-4mol/L，30 min)+ fenoldopam(10-6mol/L，24 h)組；第四組：gastrin(10-8mol/L，24 h)組；第五組：nocodazole(10-4mol/L，30 min)+ gastrin(10-8mol/L，24 h)組，37℃、5% CO2過(guò)夜培養(yǎng)，PBS洗三遍，胰酶消化細(xì)胞，PBS洗三遍，提取膜蛋白，測(cè)定蛋白濃度，制樣，40 μg蛋白量10% SDS-PAGE電泳，2000 mA NC膜轉(zhuǎn)移1 h，5%脫脂奶粉室溫封閉3 h，分別與小鼠抗人D5R抗體、兔抗人CCKBR抗體、兔抗人Na+, K+-ATP酶抗體4℃過(guò)夜反應(yīng)，二抗為羊抗小鼠IgG抗體(1∶5000)，羊抗兔IgG(1∶5000)，反應(yīng)1 h，HRP-GAPDH為內(nèi)參抗體(1∶10 000)，化學(xué)發(fā)光，曝光。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 腎臟近曲小管細(xì)胞中CCKBR和D5R的相互作用

給予正常人近曲小管細(xì)胞(NT16)fenoldopam處理后細(xì)胞膜CCKBR的表達(dá)量顯著增加，同樣，給予細(xì)胞gastrin后細(xì)胞膜D5R的表達(dá)量顯著增加(P< 0.05，圖1A)。本課題組前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)D5R和CCKBR間存在相互作用共同參與鈉水代謝[7]，但其相互作用的機(jī)制并不清楚。因此本研究使用微管抑制劑nocodazole預(yù)處理再加入fenoldopam，細(xì)胞膜CCKBR的表達(dá)量與對(duì)照組相比增加不顯著(P< 0.05，圖1A)，同樣使用nocodazole預(yù)處理再加入gastrin處理后，細(xì)胞膜D5R的表達(dá)量與對(duì)照組相比無(wú)差異，Na+, K+-ATP酶的表達(dá)也與對(duì)照組無(wú)異。該結(jié)果顯示腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)D5R和CCKBR的相互作用與微管蛋白密切相關(guān)。

然而對(duì)高血壓患者腎臟近曲小管細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，兩種受體激動(dòng)劑的加入對(duì)于D5R和CCKBR的相互作用并沒有顯著的促進(jìn)作用，給予nocodazole預(yù)處理后細(xì)胞膜CCKBR及D5R的表達(dá)量差異無(wú)顯著性(P> 0.05，圖1B)。該結(jié)果提示高血壓患者較正常人腎近曲小管細(xì)胞中D5R和CCKBR的相互作用存在顯著差異，其機(jī)制可能與微管蛋白功能缺失有關(guān)，因此影響到相關(guān)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)和鈉水代謝。

注：A：正常人腎臟近曲小管細(xì)胞(NT16)；B：高血壓病人腎臟近曲小管細(xì)胞(HT14)。FEN： fenoldopam(D5R激動(dòng)劑)；GAS：胃泌素gastrin(CCKBR激動(dòng)劑)。與對(duì)照組相比，* P< 0.05；與FEN組相比，# P< 0.05；與GAS組相比，& P< 0.05。圖1 人腎臟近曲小管細(xì)胞中CCKBR和D5R的相互作用Note.A: Normotensive renal proximal tubule cells (NT16). B: Hypertensive renal proximal tubule cells (HT14). FEN: fenoldopam (D5R agonist); GAS: gastrin (CCKBR agonist). Compared with the control group,* P< 0.05. Compared with the FEN group,# P< 0.05. Compared with the GAS group,& P< 0.05.Fig.1 Microtubules are involved in the interaction between the cholecystokinin B receptor and dopamine D5 receptor in human renal proximal tubule cells

2.2 正常人與高血壓患者腎近曲小管細(xì)胞微管蛋白β-tubulin差異

為了檢測(cè)正常人與高血壓患者腎臟近曲小管細(xì)胞微管蛋白是否存在表達(dá)差異，本研究通過(guò)免疫熒光方法，標(biāo)記微管蛋白β-tubulin。如圖2所示，NT16細(xì)胞的微管蛋白在細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)清晰的束網(wǎng)狀分布，多聚集于細(xì)胞內(nèi)部向細(xì)胞膜延伸；但HT14細(xì)胞的微管蛋白結(jié)構(gòu)混亂，無(wú)序，在細(xì)胞膜上分布明顯變多。有研究顯示高血壓病人紅細(xì)胞中微管蛋白向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移[12]。本研究則發(fā)現(xiàn)HT14細(xì)胞的微管蛋白同樣表現(xiàn)出異常行為，可能是造成細(xì)胞中D5R和CCKBR等蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)障礙的重要原因之一。

注：NT16：正常人腎臟近曲小管細(xì)胞；HT14：高血壓病人腎臟近曲小管細(xì)胞。圖2 微管蛋白在正常人和高血壓病人腎臟近曲小管細(xì)胞中的表達(dá)Note.NT16: Normotensive renal proximal tubule cells; HT14: Hypertensive renal proximal tubule cells.Fig.2 Tubulin expression in normotensive and hypertensive renal proximal tubule cells

2.3 微管蛋白促進(jìn)CCKBR和D5R在正常腎臟近曲小管細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)

已有研究發(fā)現(xiàn)多巴胺受體等多種蛋白在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中的動(dòng)態(tài)位移需要微管蛋白系統(tǒng)的介導(dǎo)[10]。為了進(jìn)一步研究微管蛋白參與CCKBR和D5R的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，本研究通過(guò)免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，fenoldopam處理NT16細(xì)胞后，D5R和CCKBR表達(dá)聚集在細(xì)胞膜上(圖3A)，nocodazole預(yù)處理再給予fenoldopam后，由激動(dòng)劑誘發(fā)的D5R及CCKBR向細(xì)胞膜上的移動(dòng)均無(wú)法發(fā)生，細(xì)胞膜上相應(yīng)的受體蛋白表達(dá)也沒有明顯增加(圖3C)。同樣nocodazole能夠阻斷gastrin誘導(dǎo)的D5R和CCKBR向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移(圖3F)，說(shuō)明腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)D5R和CCKBR的轉(zhuǎn)運(yùn)與廣泛存在的微管蛋白密切相關(guān)，當(dāng)微管結(jié)構(gòu)被破壞以后，受體間的招募活動(dòng)無(wú)法完成，從而影響受體表達(dá)及對(duì)鈉水代謝的調(diào)節(jié)功能。

高血壓患者腎小管近曲小管HT14細(xì)胞使用fenoldopam和gastrin刺激后，D5R和CCKBR并未出現(xiàn)明顯的細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移，細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)仍然較多(圖3B和圖3D)。該結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，高血壓病人較正常人腎近曲小管細(xì)胞微管蛋白可能存在功能上的缺失，從而導(dǎo)致D5R和CCKBR等蛋白遷移至細(xì)胞膜的能力變?nèi)?，因此影響到相關(guān)蛋白的表達(dá)以及發(fā)揮生物學(xué)功能。

注：NT16：正常人腎臟近曲小管細(xì)胞；HT14：高血壓病人腎臟近曲小管細(xì)胞。FEN： fenoldopam(D5R激動(dòng)劑)；GAS：胃泌素gastrin(CCKBR激動(dòng)劑)；nocodazole：微管抑制劑。圖3 微管蛋白促進(jìn)CCKBR和D5R在人腎臟近曲小管細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)Note.NT16: Normotensive renal proximal tubule cells; HT14: Hypertensive renal proximal tubule cells. FEN: fenoldopam (D5R agonist); GAS: gastrin (CCKBR agonist); nocodazole: microtubule inhibitor.Fig.3 Microtubules improve the interaction between the cholecystokinin B receptor and dopamine D5 receptor in human renal proximal tubule cells

3 討論

鈉水代謝障礙是導(dǎo)致高血壓和心血管疾病的重要原因之一[2 - 3]，機(jī)體內(nèi)的鈉水代謝受到胃腸道和腎臟的共同調(diào)控。胃泌素作為重要的胃腸道激素，通過(guò)與其受體CCKBR結(jié)合參與鈉水代謝的調(diào)節(jié)[13]。胃泌素能被腎臟近曲小管細(xì)胞吸收從而調(diào)節(jié)腎臟鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)[6]。胃泌素也能夠抑制小腸粘膜鈉離子的轉(zhuǎn)運(yùn)，增加鈉排泄[14]，因此本課題組首次通過(guò)人群實(shí)驗(yàn)證實(shí)胃泌素與高血壓的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[15]，并且通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)CCKBR能夠與D5R相互作用參與機(jī)體鈉水代謝調(diào)節(jié)和鹽敏感性高血壓的發(fā)展[7]。在對(duì)具體作用機(jī)制的進(jìn)一步研究中，本課題組發(fā)現(xiàn)細(xì)胞骨架中的微管蛋白起著非常重要的調(diào)節(jié)作用。

微管是細(xì)胞骨架的主要成分之一，幾乎存在于所有真核生物細(xì)胞之中。近年來(lái)，由于其在細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分裂及分化等生理過(guò)程中的重要作用，已成為多種疾病治療的新靶點(diǎn)[8, 16]。β-tubulin是重要的微管蛋白，它作為鈣離子相關(guān)蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[17]。研究顯示，糖尿病大鼠心肌細(xì)胞中β-tubulin表達(dá)增多。ATⅡ拮抗劑可有效阻斷RAAS通路，抑制β-tubulin表達(dá)，從而對(duì)糖尿病心肌起到保護(hù)作用[18]。高血壓患者的紅細(xì)胞中微管蛋白向細(xì)胞膜移動(dòng)，并與Na+, K+-ATP酶結(jié)合，導(dǎo)致酶活性受到抑制。應(yīng)用諾考達(dá)唑治療高血壓患者的紅細(xì)胞，引起細(xì)胞膜上乙?；奈⒐艿鞍诇p少，使Na+, K+-ATP酶激活[12]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫熒光檢測(cè)腎臟近曲小管細(xì)胞中β-tubulin的表達(dá)，同樣發(fā)現(xiàn)正常人的微管蛋白β-tubulin在細(xì)胞中成清晰的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而高血壓患者腎臟細(xì)胞中的β-tubulin表達(dá)雜亂無(wú)章，微管網(wǎng)絡(luò)不清晰，有向細(xì)胞膜移動(dòng)的趨勢(shì)，顯示高血壓患者腎小管細(xì)胞中的微管蛋白表達(dá)異常。而研究顯示，微管網(wǎng)絡(luò)參與并且調(diào)控多巴胺受體由細(xì)胞內(nèi)向細(xì)胞質(zhì)膜的遷移，并在細(xì)胞質(zhì)膜上保持動(dòng)態(tài)變化，從而發(fā)揮調(diào)節(jié)鈉水代謝等生理功能[19 - 20]。也有研究顯示微管蛋白對(duì)于D5R及CCKBR等G蛋白偶聯(lián)受體的轉(zhuǎn)運(yùn)起十分重要的作用[21 - 22]。高血壓患者腎臟多巴胺系統(tǒng)表達(dá)異常，鈉水代謝障礙[23 - 24]。因此微管蛋白可能成為調(diào)控CCKBR和D5R間相互作用，參與鈉水代謝和血壓調(diào)節(jié)的新靶點(diǎn)。

本研究通過(guò)給予正常人腎臟近曲小管細(xì)胞(NH16)CCKBR激動(dòng)劑gastrin和D5R激動(dòng)劑fenoldopam后，D5R及CCKBR均可以向細(xì)胞膜上移動(dòng)，其在細(xì)胞膜上的表達(dá)量也有所增加。nocodazole可以破壞微管蛋白網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)而影響受體遷移至細(xì)胞膜的能力，因此在對(duì)正常人腎小管近曲小管細(xì)胞進(jìn)行nocodazole預(yù)處理后，激動(dòng)劑并沒有增加細(xì)胞膜上D5R及CCKBR的表達(dá)量，免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)D5R及CCKBR仍然聚集在細(xì)胞內(nèi)部，并沒有向細(xì)胞膜移動(dòng)。該結(jié)果證實(shí)微管蛋白在D5R及CCKBR相互作用中起重要作用，并且發(fā)現(xiàn)高血壓患者體內(nèi)腎臟近曲小管細(xì)胞中微管蛋白的異?？赡苁怯绊慏5R及CCKBR相互作用及鈉水代謝的重要原因之一。目前研究發(fā)現(xiàn)nocodazole能夠抑制PKC的激活[10]。腎臟D5R可以激活磷脂酶C(PLC)-PKC途徑[25]，胃泌素能夠與CCKBR結(jié)合激活PI3K/PKC途徑[26]。因此，微管網(wǎng)絡(luò)可能通過(guò)抑制PKC激活從而抑制D5R及CCKBR相互作用，也是本課題組下一步研究的內(nèi)容。

綜上所述，本研究首次發(fā)現(xiàn)微管蛋白β-tubulin參與腎臟近曲小管細(xì)胞內(nèi)D5R與CCKBR相互作用及Na+, K+-ATP酶的調(diào)節(jié)，從而參與鈉水代謝調(diào)節(jié)；同時(shí)發(fā)現(xiàn)高血壓患者腎小管內(nèi)β-tubulin存在表達(dá)和功能上的缺失，從而影響D5R與CCKBR相互作用及對(duì)鈉水代謝的調(diào)節(jié)，可能成為鹽敏感高血壓治療的新靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 水克冬, 祁華金, 陸昀, 等. 2002年和2012年我國(guó)成人高血壓患病和治療情況比較分析 [J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2016, 13(24): 170-173.

[2] Frame AA, Wainford RD. Renal sodium handling and sodium sensitivity [J]. Kidney Res Clin Pract, 2017, 36(2): 117-131.

[3] Hall JE. Kidney dysfunction mediates salt-induced increases in blood pressure [J]. Circulation, 2016, 133(9): 894-906.

[4] Cuevas S, Villar VA, Jose PA, et al. Renal dopamine receptors, oxidative stress, and hypertension [J]. Int J Mol Sci, 2013, 14(9): 17553-17572.

[5] Jose PA, Yang Z, Zeng C, et al. The importance of the gastrorenal axis in the control of body sodium homeostasis [J]. Exp Physiol, 2016, 101(4): 465-470.

[6] Melis M, Krenning EP, Bernard BF, et al. Renal uptake and retention of radiolabeled somatostatin, bombesin, neurotensin, minigastrin and CCK analogues: species and gender differences [J]. Nucl Med Biol, 2007, 34(6): 633-641.

[7] Jiang X, Chen W, Liu X, et al. The synergistic roles of cholecystokinin B and dopamine D5 receptors on the regulation of renal sodium excretion [J]. PLoS One, 2016, 11(1): e0146641.

[8] Sève P, Isaac S, Trédan O, et al. Expression of class III β-tubulin is predictive of patient outcome in patients with non-small cell lung cancer receiving vinorelbine-based chemotherapy [J]. Clin Cancer Res, 2005, 11(15): 5481-5486.

[9] Aquila-Pastir LA, DiPaola NR, Matteo RG, et al. Quantitation and distribution of β-tubulin in human cardiac myocytes [J]. J Mol Cell Cardiol, 2002, 34(6): 1513-1523.

[10] Kruse MS, Adachi S, Scott L, et al. Recruitment of renal dopamine 1 receptors requires an intact microtubulin network [J]. Pflugers Arch - Eur J Physiol, 2003, 44(5): 534-539.

[11] 禚銀玲, 郭其森. 下調(diào)βIII-tubulin逆轉(zhuǎn)肺腺癌A549/Taxol細(xì)胞株紫杉醇耐藥 [J]. 中國(guó)肺癌雜志, 2014, 1(8): 581-587.

[12] Amaiden MR, Santander VS, Monesterolo NE, et al. Tubulin pools in human erythrocytes: altered distribution in hypertensive patients affects Na+, K+-ATPase activity [J]. Cell Mol Life Sci, 2011, 68(10): 1755-1768.

[13] Koh TJ. Extragastric effects of gastrin gene knock-out mice [J]. Pharmacol Toxicol, 2002, 91(6): 368-374.

[14] von Schrenck T, Ahrens M, de Weerth A, et al. CCKB/gastrin receptors mediate changes in sodium and potassium absorption in the isolated perfused rat kidney [J]. Kidney Int, 2000, 58(3): 995-1003.

[15] Jiang X, Wang W, Ning B, et al. Basal and postprandial serum levels of gastrin in normotensive and hypertensive adults [J]. Clin Exp Hypertens, 2013, 35(1): 74-78.

[16] Bhattacharya R, Cabral F. A ubiquitous beta tubulin disrupts microtubule assembly and inhibits cell proliferation [J]. Mol Biol Cell, 2004, 15(7): 3123-3131.

[17] 袁致海, 賀曉生, 陳延, 等. 大鼠創(chuàng)傷性腦損傷后腦組織β-微管蛋白表達(dá)及意義 [J]. 中華神經(jīng)外科疾病研究雜志, 2013, 12(2): 134-137.

[18] 鐘雯, 曾姣娥, 文重遠(yuǎn), 等. 糖尿病大鼠心肌β-微管蛋白的表達(dá)及纈沙坦的保護(hù)性作用 [J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志, 2011, 27(14): 2526-2528.

[19] Padia SH, Kemp BA, Howell NL, et al. Mechanisms of dopamine D1 and angiotensin AT2 receptor interaction in natriuresis [J]. Hypertension, 2012, 59(2): 437-445.

[20] Brismar H, Asghar M, Carey RM, et al. Dopamine-induced recruitment of dopamine D1 receptors to the plasma membrane [J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 1998, 95(10): 5573-5578.

[21] Brown D. Targeting of membrane transporters in renal epithelia: when cell biology meets physiology [J]. Am J Physiol, 2000, 278(2): F192-F201.

[22] Holtback U, Brismar H, DiBona GF, et al. Receptor recruitment: a mechanism for interactions between G protein-coupled receptors [J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 1999, 96(13): 7271-7275.

[23] Armando I, Konkalmatt P, Felder RA, et al. The renal dopaminergic system: novel diagnostic and therapeutic approaches in hypertension and kidney disease [J]. Transl Res, 2015, 165(4): 505-511.

[24] 張艷榮, 全雄志, 董偉, 等. 多巴胺D5受體轉(zhuǎn)基因小鼠的建立 [J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 28(5): 54-58.

[25] Nowicki S, Kruse MS, Brismar H, et al. Dopamine-induced translocation of protein kinase C isoforms visualized in renal epithelial cells [J]. Am J Physiol, 2000, 279(6): C1812-C1818.

[26] Tripathi S, Flobak A, Chawla K, et al. The gastrin and cholecystokinin receptors mediated signaling network: a scaffold for data analysis and new hypotheses on regulatory mechanisms [J]. BMC Syst Biol, 2015, 24(7): 29-40.