□ 張虹艷 王小喬 吳福祥 蘭州市食品藥品檢驗所

1 材料與方法

1.1 試驗儀器與設備

液相色譜-質譜聯(lián)用儀（安捷倫6460）、天平（梅特勒MS105DU）。

氯霉素對照品（Dr純度98.5%）、Quechers（ EMR-Lipid萃取管、EMRLipid Polish反萃取管）。

1.2 試驗方法

1.2.1 供試樣

稱取2 g均質樣品于50 mL離心管中，加入 5mL酸化乙腈（含有5%甲酸），蓋緊瓶蓋在機械振蕩器中劇烈振搖2 min，4 000轉離心10 min，加入5 mL緩沖液（5 mmol/L乙酸銨）至15 mL EMR-Lipid dspE管中搖勻，再移取樣品上清液至15 mL EMRLipid dspE管中，立即混合使樣液分散，在渦旋儀上渦旋1 min， 4 000轉離心10 min，移取上清液至EMRLipid Polish反萃管中，漩渦混合后離心，取上層ACN層濃縮至近干，用20%甲醇水定容至1.00 mL，過0.22 μm的濾膜，待測。

1.2.2 標準溶液測定

精密稱取氯霉素對照品13.42 mg至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到132.2 μg/mL的標準溶液。再精密移取上述溶液1.00 mL至100 mL容量瓶中，得到1.322 μg/mL的標準溶液，精密吸取上述標準溶液0.10、0.20、0.40、0.60、1.60、3.00 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻靜置，配制成系列標準曲線溶液。

2 數(shù)學模型和不確定度來源分析

2.1 測量模型

其中：X——試樣中氯霉素的含量（μg/kg）；c——樣品濃度（ng/mL）；V——試樣定容體積（mL)；m——試樣稱樣量 (g)；f——稀釋倍數(shù)；1000——換算系數(shù)。

2.2 檢測結果

重復測定樣品中氯霉素含量6次，稱樣2.003 g，測定結果為71.22、77.84、74.07、77.41、79.66、74.84 μg/kg。

3 不確定度的來源識別和分析

3.1 不確定度的A類評定

按貝塞爾公式計算得標準偏差：

S(x)=U(x)=3.051 μg/kg

測定結果的標準不確定度值為：

相對標準不確定度：

3.2 不確定度的B類評定

3.2.1 樣品稱重m引入的相對標準不確定度

（1）試樣質量m稱量引入的標準不確定度評定。天平經(jīng)檢定合格，根據(jù)檢定證書提供的數(shù)據(jù)，天平的擴展不確定度為U=0.1 mg，k=2。則標準不確定度u1(m)=U/K=0.1 mg/2=0.05 mg。本實驗中稱樣量為2 g，樣品質量引入的相對不確定度：

3.2.2 樣品定容體積V的相對標準不確定度評定

（1）移液槍的校準：1 000 μL微量移液器移取1 000 μL液體時，系統(tǒng)相對誤差為0.01%，偶然誤差為0.18%，相對標準不確定度為：

（2）溫度引起的不確定度 假設定容在（20+3）℃條件下進行，甲醇體積膨脹系數(shù)為1.1×10-3/℃，假定為平均分布，則不確定度為：

則：測定用樣液V的相對不確定度為：

3.3 由標準溶液引入的不確定度

由標準曲線求得結果A引入的不確定度，包括氯霉素標準溶液的配制和擬合標準曲線非線性所引入的不確定度。

3.3.1 氯霉素標準溶液引入的不確定度

（1）對照品引入的不確定度

氯霉素對照品由Dr.Ehrenstorfer提供，純度為99.3%，標準證書給出的相對擴展不確定度為0.5%，包含因子為2，則其引入的相對標準不確定度為：

（2）稱量產生的不確定度

用天平準確稱取對照品13.42 mg，并用甲醇定容至100 mL，根據(jù)3.2.1，天平引入的不確定度為：

urel（s2）=0.05 mg/13.42 mg=0.003 73

（3）對照品溶液稀釋引入的不確定度

第一次定容：（100±0.1）mL容量瓶服從三角分布，標準不確定度為：

甲醇的體積膨脹系數(shù)為1.1×10-3，故溫度引起的不確定度為：

則第一次定容產生的不確定度為：

第一次移液：（1±0.015）mL移液管服從三角分布，計算同上，產生的不確定度為：

第二次定容同第一次：則第二次定容產生的不確定度為：

標曲第一、第二、第三、第四個點分別用（1±0.015）mL移液管移取，不確定度同：

標曲第五、第六個點使用5 mL移液管，（5±0.030）mL移液管服從三角分布，產生的不確定度為：

標曲第五、六個點定容引入的不確定度為：

故配制標準曲線引入的不確定度計算如下：

（4）合成標準溶液配置引入的不確定度。

3.4 由標準曲線擬合引入的不確定度

由標準曲線擬合引入的標準偏差可由下式標示：

則標準曲線擬合引入的不確定度為：

根據(jù)A類不確定度評定，因重復性引入的相對不確定度為：

3.5 合成不確定度

U=x×urel=0.075 8×0.065 6=0.004 97 mg/kg擴展不確定度U=ku，置信概率為95%，k=2。則U=2×0.004 97=0.009 94 mg/kg 。即稱樣量約為2 g時，氯霉素測定結果為（0.075 8+0.009 94）mg/kg。

4 結論與討論

從試驗方法和計算公式可知，氯霉素含量的不確定度來源于以下幾個因素：①重復測量引入的不確定度，屬于A類不確定度；②稱樣質量引入的不確定度；③樣品定容體積引入的不確定度，受移液槍校正以及溫度對操作過程的影響；④對照品溶液配制引入的不確定度，受容量瓶校正和稀釋因子的影響；⑤標準曲線引入的不確定度。