譚 詩，李春莉，陳 霞，易四維△

(重慶市婦幼保健院：1.檢驗科；2.遺傳與生殖研究所 401147)

珠蛋白生成障礙性貧血是由于珠蛋白基因突變，使α鏈與非α鏈的合成不平衡，導致血紅蛋白(Hb)成分發(fā)生改變而引起的一類小細胞低色素性貧血[1]。廣東、廣西等地均為高發(fā)區(qū)，以α-、β-珠蛋白生成障礙性貧血最常見，而重慶地區(qū)由于地域遷徙的原因，其檢出率也較高，被相關部門定為高發(fā)省份[2-3]。眾所周知，重型珠蛋白生成障礙性貧血治療較困難，費用昂貴，盡管骨髓移植可治愈，但風險大且難以廣泛開展，給家庭及社會帶來嚴重的經濟負擔。因珠蛋白生成障礙性貧血雖難治但可防，故提倡育齡夫婦把珠蛋白生成障礙性貧血作為孕前或產前常規(guī)檢測，確定高風險對象，擴大優(yōu)生優(yōu)育，降低該疾病患兒的出生率，提高出生人口素質。目前的篩查診斷方法主要有血常規(guī)、Hb電泳、基因檢測等，基因檢測費用昂貴、要求條件高。作為公共衛(wèi)生項目，應綜合考慮經濟水平、成本、效能、可操作性等，以選擇最適宜的產前篩查方案。因此，現探討血常規(guī)及Hb電泳聯(lián)合檢測，提高珠蛋白生成障礙性貧血產前篩查的檢出率。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年1月至2017年1月該院婦保、產科、遺傳生殖門診就診的育齡期夫婦，經基因檢測確診珠蛋白生成障礙性貧血患者922例，年齡20～40歲，平均年齡(31.0±4.3)歲。

1.2方法

1.2.1血細胞分析 采用日本Sysmex XN全自動血細胞分析儀，檢測紅細胞平均體積(MCV)、紅細胞平均血紅蛋白(MCH)、Hb、紅細胞分布寬度(RDW)等參數，嚴格按照儀器標準操作規(guī)程進行標本與質控檢測，保證每批檢測質控均在控，質控物由四川邁克公司提供。MCV正常參考區(qū)間為82～100 fL；MCH為27～34 pg；Hb為男性：130～175 g/L、女性：115～150 g/L；RDW<14.6%。

1.2.2Hb電泳 儀器為法國Sebia公司的Capillarys 2全自動電泳儀，質控物為Sebia公司原裝配套。診斷截斷值為HbA2<2.5%或>3.5%，HbF>2.0%或者存在異常Hb條帶(HbCS、HbH、HbBart′s)等。

1.2.3基因診斷 提取抗凝全血DNA進行基因檢測。采用深圳亞能公司的試劑盒進行α-和β-珠蛋白基因分析；使用跨越裂口聚合酶鏈反應(Gap-PCR)檢測α-珠蛋白基因--SEA、-α3.7和-α4.23種常見缺失；應用PCR結合反向斑點雜交法(RDB)檢測β-珠蛋白基因17個常見突變位點和α-珠蛋白基因αCS、αQS、αWS3種點突變類型。按照試劑盒說明書進行操作和結果判定。

2 結 果

2.1基因檢測結果 922例患者α-珠蛋白生成障礙性貧血541例(58.7%)，β-珠蛋白生成障礙性貧血363例(39.4%)，α-和β-復合珠蛋白生成障礙性貧血18例(1.9%)。α-珠蛋白生成障礙性貧血患者標準型(--SEA) 221例，靜止型(-α3.7、-α4.2)278例，HbH 4例。β-珠蛋白生成障礙性貧血患者CD17(111/363)和CD41-42(99/363)2種基因突變最常見。見表1。

2.2血常規(guī)指標的篩查結果 β-珠蛋白生成障礙性貧血患者MCV、MCH、Hb最低，RDW最高。α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型患者MCV為(84.49±4.85)fL，MCH為(27.22±1.83)pg，Hb為(132.64±17.89)g/L，RDW為(13.58±1.19)%，均在正常參考值范圍。見表2。

表1 α-珠蛋白生成障礙性貧血與β-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型

表2 血常規(guī)指標的篩查結果

表3 Hb電泳的檢測結果

表4 各指標單獨檢測的漏檢率結果

2.3Hb電泳的檢測結果 α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型患者HbA2為(2.51±0.24)%，屬于正常參考范圍；α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型患者HbA2為(2.31±0.22)%，僅稍低于正常參考范圍；β-珠蛋白生成障礙性貧血患者的Hb電泳結果顯示，HbA2達到(5.21±0.74)%，顯著高于α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型及輕型(P=0.000)。見表3。

2.4各指標單獨檢測的漏檢率結果 MCV、MCH、Hb電泳單獨檢測對α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型患者的漏檢率較高，分別為66.55%、44.24%、61.87%，而對β-珠蛋白生成障礙性貧血患者的漏檢率為15.70%、16.25%、2.48%。見表4。

2.5各指標聯(lián)合檢測的漏檢率結果 各指標聯(lián)合檢測為任何1種出現陽性結果即判為陽性，MCH與Hb電泳聯(lián)合檢測對各型珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率最低，對α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型為27.34%、α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型為13.78%、β-珠蛋白生成障礙性貧血為0.28%。見表5。

表5 各指標聯(lián)合檢測的漏檢率結果

3 討 論

珠蛋白生成障礙性貧血是全球最常見的單基因隱性遺傳病，已成為我國南方地區(qū)一個重大的公共衛(wèi)生問題，其中α-珠蛋白生成障礙性貧血是導致圍產兒病死和產科并發(fā)癥的原因之一[4-5]。目前在南方10省開展珠蛋白生成障礙性貧血產前預防控制項目，重慶則于2015年正式啟動該項目，重型珠蛋白生成障礙性貧血的產前篩查和早期干預是其主要內容之一。

本研究結果表明，α-珠蛋白生成障礙性貧血占58.7%，β-珠蛋白生成障礙性貧血占39.4%，α-和β-復合珠蛋白生成障礙性貧血占1.9%。α-珠蛋白生成障礙性貧血的標準型(--SEA、-α3.7、-α4.2)所占比例依次處于前3位；β-珠蛋白生成障礙性貧血的(CD17、CD41-42)2種基因突變最多(見表1)，與杜偉等[3]研究的重慶9區(qū)12縣珠蛋白生成障礙性貧血基因分布基本一致。臨床分型顯示，α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型(-α3.7、-α4.2)所占比例最大，其次是輕型(包括--SEA、-α3.7/-α3.7、-α3.7/-α4.2)。

本研究結果顯示，α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型患者血常規(guī)各參數及Hb電泳結果均在正常參考值范圍，因此各指標單獨檢測對該類患者的漏檢率較高。有研究建議，以血常規(guī)MCV、MCH作為珠蛋白生成障礙性貧血尤其是靜止型α-珠蛋白生成障礙性貧血的篩查手段時應以一種平行實驗作為初篩，即2項指標中任一項陽性則視為篩查陽性，該方法能提高篩查的靈敏度，降低漏檢率[6]。本研究結果也證實，靜止型α-珠蛋白生成障礙性貧血患者MCV單獨檢測的漏檢率為66.55%，MCH為44.24%，而兩者聯(lián)合檢測的漏檢率降至39.21%。

本研究聯(lián)合檢測結果表明，血常規(guī)與Hb電泳聯(lián)合檢測后可不同程度地降低各型珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率。與單獨檢測比較，MCV與MCH聯(lián)合檢測除了能降低靜止型α-珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率外(P<0.05)，對其他型珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率并不顯著(P>0.05)。與MCV單獨檢測比較，MCV與HbA2聯(lián)合檢測后可降低α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型、β-珠蛋白生成障礙性貧血、α-和β-復合珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率；MCH與HbA2聯(lián)合檢測的漏檢率最低，對α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型為27.34%、α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型為13.78%，α-和β-復合珠蛋白生成障礙性貧血為5.56%、而β-珠蛋白生成障礙性貧血僅為0.28%，HbA2是β-珠蛋白生成障礙性貧血的良好檢出指標[7]。因此，MCH與Hb電泳聯(lián)合檢測可用于珠蛋白生成障礙性貧血的產前篩查。

本研究結果還發(fā)現，MCH與Hb電泳聯(lián)合檢測盡管能顯著降低α-珠蛋白生成障礙性貧血靜止型及β-珠蛋白生成障礙性貧血的漏檢率，但對α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型的漏檢率并不明顯。根據遺傳規(guī)律，如果夫妻雙方均為α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型患者，則子代有1/4的概率為重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒。因此，提高α-珠蛋白生成障礙性貧血輕型的檢出率至關重要，后續(xù)工作中還有待深入研究。

綜上所述，目前治療重型珠蛋白生成障礙性貧血費用昂貴且療效有限，預防和控制重癥珠蛋白生成障礙性貧血患兒出生顯得尤其重要。在高發(fā)地區(qū)加強育齡人群的知識普及與宣教，建立高效的篩查機制及完善的孕前咨詢、產前診斷是減少重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒出生最有效的措施。除了對珠蛋白生成障礙性貧血漏檢率的分析外，還需要進一步探討各指標聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度，尋找合適的篩查截斷值，提高產前篩查效率。

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