劉文靜,蘇 龍,劉曉亮,譚業(yè)輝,劉 宇,趙楊祉,宋 飛,高素君

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院 血液科，吉林 長(zhǎng)春130021)

異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)是唯一有望治愈某些惡性血液系統(tǒng)疾病的治療手段。盡管同種異體反應(yīng)性T細(xì)胞可有效控制原發(fā)病的復(fù)發(fā)，但其亦可攻擊受者的正常細(xì)胞、組織或器官，導(dǎo)致急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的發(fā)生。allo-HSCT后aGVHD的發(fā)生率約為30%-50%[1,2]。雖然有多種藥物與藥物組合用于預(yù)防或治療aGVHD，但是至今尚無(wú)任何藥物或藥物組合能夠顯著改善aGVHD患者的預(yù)后[3]。aGVHD的成功治療在于早期識(shí)別與早期干預(yù)。

白介素-2(interleukin-2,IL-2)在T細(xì)胞增殖、活化及效應(yīng)功能方面均發(fā)揮十分重要的作用。已有研究報(bào)道IL-2可溶性受體(soluble IL-2 receptor,sIL-2R)與aGVHD的發(fā)生有關(guān)[4-6]，但不同研究觀察時(shí)間點(diǎn)不盡相同。本課題組于移植后規(guī)律時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測(cè)sIL-2R水平變化，并分析其對(duì)aGVHD的預(yù)測(cè)意義，同時(shí)確定具有較高敏感性與特異性的截點(diǎn)值，以便快速實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化。現(xiàn)將研究結(jié)果做一報(bào)道。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象回顧分析2014年9月至2016年6月于吉林大學(xué)第一醫(yī)院血液科接受異基因造血干細(xì)胞移植患者12例。患者中位年齡34歲(6-64歲)，其中男性6例，女性6例。本研究得到吉林大學(xué)第一醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并獲得患者知情同意。

1.2預(yù)處理方案及aGVHD的預(yù)防患者allo-HSCT移植類(lèi)型包括同胞全相合移植及親緣單倍體移植，具體預(yù)處理方案及aGVHD預(yù)防方案見(jiàn)課題組前期報(bào)道[7]。

1.3細(xì)胞因子檢測(cè)患者移植前、移植后+14天、+28天、+42天、+60天、+90天采集外周血標(biāo)本3 ml，1000rpm離心5 min，吸取上層血清，凍存于-80℃?zhèn)溆?。?xì)胞因子檢測(cè)采用美國(guó)R&D公司的人sIL-2R ELISA試劑盒，具體操作過(guò)程參照樣品說(shuō)明書(shū)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理本研究采用SPSS(17.0版)軟件包處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(正態(tài)分布且整體方差齊)或Mann-Whitney檢驗(yàn)(偏態(tài)分布或整體方差不齊)。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1患者一般資料本組患者中急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)6例，急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)4例，骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes,MDS)2例。6例發(fā)生aGVHD，6例未發(fā)生aGVHD，患者aGVHD發(fā)生情況見(jiàn)表1。發(fā)生aGVHD患者經(jīng)激素聯(lián)合環(huán)孢素或他克莫司治療，1例患者采用第三方間充質(zhì)干細(xì)胞輸注治療(例4)。其中4例治愈，2例因重度移植物抗宿主病而死亡(例3與例4)。

表1 Allo-HSCT后發(fā)生aGVHD的患者情況

2.2血清sIL-2R檢測(cè)本研究檢測(cè)了allo-HSCT患者移植前、移植后+14d、+28天、+42天、+60天與+90天血清sIL-2R水平，試劑盒健康人參考值為<1 000 pg/ml。ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)下圖1。

圖1 ELISA檢測(cè)血清sIL-2R標(biāo)準(zhǔn)曲線

全部患者檢測(cè)血清sIL-2R水平為986-6957 pg/ml。按照移植后不同時(shí)間點(diǎn)及是否發(fā)生aGVHD將患者的檢測(cè)結(jié)果列為圖2。由圖2可見(jiàn)，發(fā)生aGVHD與未發(fā)生aGVHD的患者移植前、移植后+14天及+90天血清sIL-2R有明顯差別(均P<0.05)。

圖2 異基因造血干細(xì)胞移植后不同時(shí)間點(diǎn)sIL-2R水平檢測(cè)

2.3移植后+14天血清sIL-2R對(duì)aGVHD的預(yù)測(cè)意義見(jiàn)圖3。考慮到aGVHD常于移植后1個(gè)月左右開(kāi)始出現(xiàn)，因而移植后早期指標(biāo)預(yù)測(cè)aGVHD更有意義。我們采用移植后第+14天血清sIL-2R預(yù)測(cè)aGVHD，ROC曲線下面積為0.95，cutoff值為3658 pg/ml，大于此值者發(fā)生aGVHD風(fēng)險(xiǎn)明顯增加(敏感性為100%，特異性為80%，P=0.027)。

圖3 移植后+14天sIL-2R水平預(yù)測(cè)aGVHD發(fā)生

3 討論

aGVHD是限制allo-HSCT成功的關(guān)鍵因素之一，也是移植相關(guān)死亡的主要原因之一。早期診斷與治療是aGVHD有效治療的保證。目前aGVHD的診斷主要依據(jù)臨床表現(xiàn)，尚缺乏早期、敏感、特異的診斷指標(biāo)，而常用的aGVHD分級(jí)系統(tǒng)存在觀察者主觀差異、初始分級(jí)并不能完全反映疾病嚴(yán)重程度等缺陷。因此，如何通過(guò)生物標(biāo)志物水平變化預(yù)測(cè)aGVHD的發(fā)生及其嚴(yán)重程度是國(guó)內(nèi)外研究者關(guān)注的熱點(diǎn)之一。盡管目前有不同研究探究多種生物標(biāo)志物與aGVHD的相關(guān)性[8-10]，但大部分研究結(jié)果仍需進(jìn)一步在臨床中驗(yàn)證。已有研究報(bào)道移植后sIL-2R水平與aGVHD的發(fā)生有關(guān)[11-13]。研究者通過(guò)allo-HSCT后早期監(jiān)測(cè)sIL-2R水平，發(fā)現(xiàn)移植后早期即可出現(xiàn)sIL-2R水平的升高，2-4周達(dá)峰值。此外，發(fā)生aGVHD患者sIL-2R峰值水平明顯高于未發(fā)生aGVHD的患者，而sIL-2R水平的高低可能與aGVHD的嚴(yán)重程度有關(guān)[11-13]。與報(bào)道一致，本研究也發(fā)現(xiàn)移植后+14d發(fā)生aGVHD患者的sIL-2R水平顯著高于無(wú)aGVHD患者。本研究還發(fā)現(xiàn)發(fā)生aGVHD患者移植前sIL-2R水平明顯高于無(wú)aGVHD患者，與報(bào)道不一致[6]；我們發(fā)現(xiàn)移植后+90天發(fā)生aGVHD的患者sIL-2R水平亦明顯升高。上述結(jié)果可能與本研究樣本較少有關(guān)，且鑒于大部分此類(lèi)研究樣本量均較少，上述結(jié)果仍需擴(kuò)大樣本研究證實(shí)。

既往研究及本研究均發(fā)現(xiàn)移植后早期sIL-2R水平與aGVHD發(fā)生有關(guān)，但是sIL-2R預(yù)測(cè)aGVHD發(fā)生的最佳截點(diǎn)目前并不清楚，這也可能部分解釋了sIL-2R預(yù)測(cè)aGVHD尚未實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化。本研究通過(guò)ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，移植后+14天血清sIL-2R預(yù)測(cè)aGVHD的最佳截點(diǎn)值為3658 pg/ml，且具有高敏感性與特異性。因此，通過(guò)檢測(cè)allo-HSCT后+14天sIL-2R水平可能作為預(yù)測(cè)aGVHD發(fā)生的指標(biāo)之一，為aGVHD早期干預(yù)提供參考依據(jù)。

有研究報(bào)道allo-HSCT后sIL-2R水平的升高程度與供者類(lèi)型及干細(xì)胞來(lái)源有關(guān)[14]。在我中心及中國(guó)造血干細(xì)胞移植登記中心，親緣單倍體已成為我國(guó)主要(60%-70%)的allo-HSCT移植類(lèi)型，因此，同胞全相合及親緣單倍體移植患者中sIL-2R水平變化規(guī)律、最佳截點(diǎn)值有無(wú)區(qū)別，尚需研究探索。血清sIL-2R升高程度是否可預(yù)測(cè)aGVHD的嚴(yán)重程度仍需研究證實(shí)。此外，本研究?jī)H采用研究組，尚缺乏驗(yàn)證組進(jìn)一步優(yōu)化研究結(jié)果。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)allo-HSCT后早期sIL-2R水平的升高與移植后aGVHD的發(fā)生相關(guān)，并且初步確定了+14天用于預(yù)測(cè)aGVHD發(fā)生的截點(diǎn)值，這可能為今后深入研究sIL-2R預(yù)測(cè)aGVHD發(fā)生及對(duì)其早期分層干預(yù)提供參考。

作者簡(jiǎn)介：劉文靜(1986-)，女，在讀碩士，主要從事造血干細(xì)胞基礎(chǔ)與臨床研究;高素君(1963-)，女，醫(yī)學(xué)博士，博士研究生導(dǎo)師，主要從事造血干細(xì)胞基礎(chǔ)與臨床研究。

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