姚其勝　孫永喜　陳仁燕

[摘要]目的 建立HPLC法測(cè)定香麻寒喘貼所含鹽酸麻黃堿的含量。方法 采用Thermo C18色譜柱，以0.01 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5）-甲醇（96︰4）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為210 nm，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為5 μl。結(jié)果 鹽酸麻黃堿在15.20～91.17 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9997），鹽酸麻黃堿平均回收率為98.78%，RSD為0.59%。測(cè)定3批香麻寒喘貼，平均含量為3.20 mg/100 cm2，RSD為0.31%。結(jié)論 本方法簡單方便、準(zhǔn)確率高、專屬性強(qiáng)，可以作為檢測(cè)鹽酸麻黃堿含量的有效方法。

[關(guān)鍵詞]香麻寒喘貼；HPLC；鹽酸麻黃堿

[中圖分類號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）2（c）-0017-04

[Abstract]Objective To establish a HPLC method in the determination of ephedrine hydrochloride in Xiangma Hanchuantie.Methods 0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate （adjusted to pH 2.5 with phosphoric acid）-methanol （96︰4） was used as the mobile phase with a Thermo C18 column and the detection wavelength was 210 nm.The column temperature was 25℃ and the sampling amount was 5 μl.Results A good linear relationship of ephedrine hydrochloride was shown in the range of 15.20-91.17 μg/ml （r=0.9997）.The average recovery of ephedrine hydrochloride was 98.78% and the RSD was 0.59%.Determination of 3 batches samples，the total content of ephedrine hydrochloride was 3.20 mg/100 cm2 and the RSD was 0.31%.Conclusion The results show that this method is simple，convenient and accurate.It can be employed as an effective method for the determination of ephedrine hydrochloride content.

[Key words]Xiangma Hanchuantie；HPLC；Ephedrine hydrochloride

香麻寒喘貼是由麻黃、芥子、丁香、細(xì)辛、矮地茶、生姜六味中藥材制成的貼膏劑，具有宣肺平喘、化痰止咳的作用，用于兒童輕、中度哮喘急性發(fā)作期寒飲停肺證的輔助治療[1-2]。近年來，貼劑以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)逐漸得到人們的重視，其不僅具有良好的靶向和性價(jià)高的生物利用度，而且還可隨時(shí)給藥，簡單方便[3-4]，人們不斷地對(duì)貼劑進(jìn)行改進(jìn)，在研究如何促進(jìn)其滲透吸收、制備工藝等方面也做了很多相關(guān)工作[5-7]。貼劑的臨床應(yīng)用[8-9]非常廣泛，現(xiàn)已普遍用于肩周炎[10]、頸椎病[11-12]、哮喘[13-14]、鎮(zhèn)痛[15-16]等。為了保證貼劑的療效與質(zhì)量，本文對(duì)香麻寒喘貼中鹽酸麻黃堿含量[17-20]進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)該含量測(cè)定方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)顯示，該方法簡單，可以有效地檢測(cè)香麻寒喘貼中鹽酸麻黃堿的含量，準(zhǔn)確地控制貼劑有效成分，保證產(chǎn)品質(zhì)量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器，型號(hào)：G1314F，美國安捷倫公司），MS105DU型電子天平。鹽酸麻黃堿（批號(hào)：171241-201508）對(duì)照品來源于中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，來源于美國天地有限公司；水為純化水，其他試劑均為分析純。香麻寒喘貼樣品來源于翔宇藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)160601、160602、160603。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱為Thermo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為0.01 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5）-甲醇（96︰4），檢測(cè)波長210 nm，流速1.0 mol/min，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為5 μl。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。

2.2溶液的制備

2.2.1供試品溶液的制備 取160601批樣品6片，精密測(cè)量，除去蓋襯，置于帶塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，浸泡過夜。超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾即得。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備 取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，用甲醇溶解，制成500 μg/ml的鹽酸麻黃堿作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。用甲醇稀釋，制成50 μg/ml的鹽酸麻黃堿作為對(duì)照品溶液。

2.2.3陰性供試品溶液制備 取不含麻黃藥材的陰性樣品6片，精密測(cè)量，同供試品溶液制備處理方法，制成陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗(yàn)

分別精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各5 μl，用高效液相色譜儀測(cè)定（圖1）。在該色譜條件下陰性樣品對(duì)樣品峰無干擾；主峰保留時(shí)間在22 min左右，理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算>1000，提示該方法專屬性良好。

2.4鹽酸麻黃堿溶液線性關(guān)系試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量分別置于10 ml量瓶中，加甲醇溶液稀釋制成濃度分別為15.20、30.39、50.65、60.78、75.98、91.17 μg/ml的線性溶液，依法測(cè)定。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。由試驗(yàn)結(jié)果可知，鹽酸麻黃堿含量為15.20～91.17 μg/ml，線性方程為A=11.576C+2.3606，r=0.9997（n=6）（表1），峰面積和濃度均呈現(xiàn)良好線性關(guān)系（圖2）。

2.5鹽酸麻黃堿溶液精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)5次，并記錄色譜圖。結(jié)果顯示，峰面積的RSD值為1.13%（表2），提示該方法的系統(tǒng)精密度良好。

2.6鹽酸麻黃堿重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取樣品（批號(hào)：160601）6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算含量為3.13 mg/100 cm2，含量RSD為1.10%（表3），提示該方法的重復(fù)性較好。

2.7鹽酸麻黃堿溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

將供試品溶液于室溫條件下放置12 h，每隔1 h測(cè)定1次。結(jié)果顯示，在室溫條件下放置12 h內(nèi)，測(cè)得供試品峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.70%（表4），提示供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8鹽酸麻黃堿溶液回收率試驗(yàn)

取160601批樣品（含量為3.13 mg/100 cm2）27片，平均分成9份，每份3片，精密測(cè)量，除去蓋襯，置9個(gè)帶塞錐形瓶中分為3組，分別加入適量對(duì)照品溶液與供試品中待測(cè)成分含量之比為0.5︰1、1︰1、1.5︰1，依法測(cè)定（表5）。由試驗(yàn)結(jié)果可知，含量測(cè)定各濃度下平均回收率為98.0%～101.0%，回收率RSD為0.59%，提示該方法準(zhǔn)確度良好。

2.9鹽酸麻黃堿耐用性試驗(yàn)

2.9.1柱溫 在20、25、30℃柱溫條件下，分別測(cè)定含量。結(jié)果顯示，柱溫在20～30℃變化時(shí)，鹽酸麻黃堿含量為3.13 mg/100 cm2，RSD為0.69%，柱溫變化對(duì)測(cè)定結(jié)果無明顯的影響。

2.9.2流速 在流速為0.8、1.0、1.2 ml/min條件下，分別測(cè)定含量。結(jié)果提示，流速在0.8～1.2 ml/min變化時(shí)，鹽酸麻黃堿含量為3.17 mg/100 cm2，RSD為1.06%，流速對(duì)測(cè)定結(jié)果無明顯的影響。

2.9.3流動(dòng)相比例 在流動(dòng)相磷酸二氫鉀與乙腈的比例為94︰6、96︰4、98︰2條件下，分別測(cè)定含量。結(jié)果提示，流動(dòng)相比例在94︰6～98︰2變化時(shí)，鹽酸麻黃堿含量為3.16 mg/100 cm2，RSD為0.71%，流動(dòng)相比例變化對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響較小。

2.9.4流動(dòng)相pH值 在流動(dòng)相pH值為2.3、2.5、2.7條件下，分別測(cè)定含量。結(jié)果提示，pH值在2.3～2.7變化時(shí)，鹽酸麻黃堿含量為3.17 mg/100 cm2，RSD為0.89%，流動(dòng)相pH值對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響較小。

2.9.5檢測(cè)波長 在檢測(cè)波長為208、210、212 nm條件下，分別測(cè)定含量。結(jié)果提示，檢測(cè)波長在208～212 nm變化時(shí)，鹽酸麻黃堿含量為3.17 mg/100 cm2，RSD為0.91%，檢測(cè)波長耐用性較好。

2.9.6色譜柱 采用Inertsil ODS-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）、Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），分別測(cè)定含量。結(jié)果提示，使用不同型號(hào)的色譜柱，鹽酸麻黃堿含量為3.25 mg/100 cm2，RSD為2.82%，色譜柱的耐用性較好。

2.10香麻寒喘貼樣品鹽酸麻黃堿含量測(cè)定結(jié)果

取3批香麻寒喘貼，依法測(cè)定鹽酸麻黃堿含量，結(jié)果如下（表7）。

3討論

近年來，經(jīng)皮給藥制劑飛速發(fā)展，貼劑以其操作簡單、安全方便的特點(diǎn)越來越受到醫(yī)藥行業(yè)的重視。香麻寒喘貼是純中藥制劑，安全有效、副作用小，普遍用于宣肺平喘、化痰止咳。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，香麻寒喘貼含量測(cè)定的方法鮮有報(bào)道，為進(jìn)一步控制藥品質(zhì)量，本文對(duì)香痳寒喘貼中鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定方法進(jìn)行研究。

采用甲醇為溶劑，對(duì)樣品進(jìn)行超聲溶解，操作過程簡單、毒性低，用高效液相色譜法對(duì)香麻寒喘貼中鹽酸麻黃堿的含量進(jìn)行測(cè)定，常見含量測(cè)定方法有薄層色譜法、紫外色譜法及高效液相色譜法等，其中高效液相色譜法準(zhǔn)確性高，并對(duì)該方法進(jìn)行了專屬性、線性、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率及耐用性驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高，能精確控制藥品質(zhì)量，保證藥物的準(zhǔn)確有效。

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（收稿日期：2017-12-18 本文編輯：祁海文）