陳文強　熊怡

【摘要】 目的：探討遺傳性耳聾基因篩查對遲發(fā)性耳聾的預(yù)防作用。方法：選取2015年1月-2017年

3月在本院出生的新生兒5 547例，采集其足跟末梢靜脈血，提取DNA，采用耳聾基因芯片技術(shù)檢測4個耳聾基因（GJB2、GJB3、SLC26A4、12SrRNA）的9個突變位點，同時進(jìn)行聽力篩查。結(jié)果：5 547例受檢新生兒中耳聾基因異常者228例，其中GJB2基因雜合突變3.10%（172/5 547）；GJB3基因雜合突變0.13%（7/5 547）；SLC26A4基因雜合突變0.54%（30/5 547）；線粒體12SrRNA突變0.27%（15/5 547）；雙雜合突變0.05%（3/5 547），其中299 del AT和2168 A>G 1例，235 del C和538 C>T 2例；176 del 16純合突變0.02%（1/5 547）。聽力篩查檢測通過的5 363例新生兒中，耳聾基因檢測異常0.88%（47/5 363）。結(jié)論：遺傳性耳聾基因篩查有利于遲發(fā)性耳聾的及早發(fā)現(xiàn)及干預(yù)，彌補了單獨進(jìn)行新生兒聽力篩查所存在的不足，具有良好的臨床應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】 新生兒； 聽力篩查； 耳聾基因； 遺傳性耳聾

Analysis of the Preventive Effect of Genetic Deafness Gene Screening on Delayed Deafness/CHEN Wenqiang，XIONG Yi.//Medical Innovation of China，2018，15（03）：120-122

【Abstract】 Objective：To investigate the preventive effect of gene screening for genetic deafness in patients with delayed deafness.Method：A total of 5 547 newborns born in our hospital from January 2015 to March 2017 were selected，and their heel vein blood were collected，DNA was extracted，9 mutation sites of 4 deaf genes（GJB2，GJB3，SLC26A4 and 12SrRNA） were detected by deafness gene chip technology，and hearing screening was performed at the same time.Result：Of the 5 547 newborns，there were 228 cases of deafness gene abnormalities，the GJB2 gene heterozygous mutation was 3.10%（172/5 547）；GJB3 gene heterozygous mutation was 0.13%（7/5 547）；SLC26A4 gene heterozygous mutation was 0.54%（30/5 547）；mitochondrial 12SrRNA mutation was 0.27%（15/5 547）；double heterozygous mutation was 0.05%（3/5 547），included 1 case of 299 del AT and 2168 A>G，2 cases of 235 del C and 538 C>T；176 del 16 homozygous mutation was 0.02%（1/5 547）.Of the 5 363 newborns passing through the hearing screening test，the abnormal detection of deafness gene was 0.88%（47/5 363）.Conclusion：Genetic deafness gene screening is conducive to early detection and intervention of delayed deafness，which makes up for the shortcomings of neonatal hearing screening alone，and has good clinical application value.

【Key words】 Newborn； Hearing screening； Deafness gene； Genetic deafness

First-authors address：The Boai Hospital of Zhongshan City，Zhongshan 528400，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.03.033

我國幅員遼闊，是人口大國，出生人口相當(dāng)多。同時，我國先天性出生缺陷疾病發(fā)生率也相當(dāng)高，先天性耳聾已成為第二大致殘疾病，嚴(yán)重降低了我國出生人口素質(zhì)[1-2]。在目前的體力篩查模式中，無論瞬態(tài)聲耳聲發(fā)射檢查或耳聲發(fā)射檢查，僅僅反映了當(dāng)時的聽覺功能狀態(tài)，無法發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性耳聾患兒，而遲發(fā)性耳聾患兒得不到有效的干預(yù)措施保護(hù)，有很大的可能造成永久性聽力損失[3-4]。對于遲發(fā)性耳聾基因攜帶新生兒，正確分析病因，給予預(yù)防指導(dǎo)，是降低其耳聾發(fā)生的有效途徑[5-6]。為此，本院開展遺傳性耳聾基因篩查對遲發(fā)性耳聾的預(yù)防作用分析研究，旨在為遲發(fā)性耳聾的防治提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月-2017年3月在本院出生的新生兒5 547例，其中男2 628例，女2 919例；日齡2～5 d，平均（3.68±0.34）d，在其監(jiān)護(hù)人知情同意的情況下，采集其足跟血2滴并密封保存，提取DNA，進(jìn)行耳聾基因檢測。本研究已經(jīng)由院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 聽力篩查 新生兒在出生48 h使用美國Bio-logic（伯勞克）耳聲發(fā)射儀進(jìn)行畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射（DPOAE）檢查；DPOAE未通過者于42 d采用natus-alGo3i自動聽性腦干誘發(fā)電位儀進(jìn)行自動聽性腦干反應(yīng)（AABR）檢查；第一次AABR未通過者于2周后進(jìn)行復(fù)篩，復(fù)篩未通過者可判斷為聽力檢查未通過。

1.3 耳聾基因芯片檢測方法 應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測GJB2（35 del G、176 del 16、235 del C、

299 del AT）、GJB3（538 C>T）、SLC26A4（IVS7-2A>G、2168 A>G）、12SrRNA（1555 A>G、1494 C>T）等4個耳聾基因，共9個突變位點。耳聾基因芯片檢測的技術(shù)路線，包括血片DNA的提取、PCR擴(kuò)增、芯片雜交、芯片洗滌、芯片掃描，詳細(xì)步驟參照Lux-ScanTM10K-B微陣列芯片掃描儀和基因芯片雜交盒（博奧生物有限公司提供）操作說明書。測序結(jié)果使用Chromas軟件分析。

1.4 結(jié)果判讀 芯片掃描顯示同位點中探針W出現(xiàn)陽性信號，M出現(xiàn)陰性信號，判讀為該位點野生型；W出現(xiàn)陽性信號，M出現(xiàn)陽性信號，判讀為該位點突變雜合型；W出現(xiàn)陰性信號，M出現(xiàn)陽性信號，判讀為該位點突變純合型。

2 結(jié)果

2.1 5 547例受檢新生兒耳聾基因及聽力篩查檢測結(jié)果 5 547例受檢新生兒中，有228例檢出4個耳聾基因的8種突變類型，突變耳聾基因攜帶率為4.11%（228/5 547）。耳聾基因異常者228例中GJB2基因雜合突變172例，GJB3基因雜合突變7例，SLC26A4基因雜合突變30例，線粒體12SrRNA突變15例；雙雜合突變3例，其中299 del AT和2168 A>G 1例，235 del C和538 C>T 2例；176 del 16純合突變1例。見表1。

2.2 5 547例受檢新生兒聽力篩查檢測結(jié)果 5 547例受檢新生兒中，DPOAE通過率為95.93%（5 321/

5 547）；DPOAE未通過226例進(jìn)行AABR，通過率為18.58%（42/226）；AABR未通過184例進(jìn)行AABR復(fù)篩，無一例通過。聽力篩查檢測通過的5 363例新生兒中，耳聾基因檢測異常47例，占0.88%（47/5 363）。

3 討論

據(jù)不完全統(tǒng)計，在先天性耳聾疾病中遺傳性耳聾約占60%，其中常染色體隱性遺傳約占80%，常染色體顯性遺傳約占10%，生育部分為X-連鎖隱性遺傳和線粒體遺傳[7-9]。耳聾的遺傳因素已得到臨床的確立。近年，隨著基因芯片技術(shù)的發(fā)展，新生兒遺傳性耳聾基因篩查有了技術(shù)上的保障[10]。流行病學(xué)研究指出，我國遺傳性耳聾者以GJB2、GJB3、SLC26A4基因雜合突變和線粒體12SrRNA突變?yōu)橹鱗11-13]。為此，本研究采用耳聾基因芯片技術(shù)對5 547例新生兒的4個耳聾基因的9個突變位點進(jìn)行了檢測。

本研究結(jié)果顯示，5 547例新生兒基因類型依高低順序排列分別為野生型、GJB2基因雜合突變、SLC26A4基因雜合突變、線粒體12SrRNA突變、GJB3基因雜合突變、雙雜合突變（299 del AT和2168 A>G，235 del C和538 C>T）、純合突變（176 del 16），與左路杰等[14]研究者的研究結(jié)果相一致。本研究結(jié)果顯示，聽力篩查檢測通過的5 363例新生兒中，耳聾基因檢測異常47例，占0.88%，故該47例耳聾基因檢測異常新生兒具有較大的耳聾潛在風(fēng)險。線粒體12SrRNA突變與SLC26A4基因突變均為遲發(fā)性耳聾，線粒體12SrRNA突變可認(rèn)為是藥物性耳聾突變，本研究228例耳聾基因檢測異常新生兒中，線粒體12SrRNA突變15例。既往遺傳學(xué)研究指出，1494 C>T、1555 A>G的線粒體12SrRNA突變者對接觸氨基糖甙類藥物的敏感性增強，可造成永久性聽力損失[15-17]。因此有必要對線粒體12SrRNA突變新生兒的監(jiān)護(hù)人進(jìn)行防聾知識的宣傳，告知其該患兒必須終生禁用氨基糖甙類藥物。SLC26A4基因突變新生兒可變現(xiàn)為無聽力損失，本研究228例耳聾基因檢測異常新生兒中，SLC26A4基因突變新生兒30例。既往遺傳學(xué)研究指出，SLC26A4基因突變與大前庭導(dǎo)水管綜合征密切相關(guān)，SLC26A4基因突變者在頭部震蕩外傷或感冒后可誘發(fā)聽力損失，最終進(jìn)展成為后天中重度感音神經(jīng)性耳聾[18-20]。因此有必要對SLC26A4基因突變新生兒的監(jiān)護(hù)人進(jìn)行防聾知識的宣傳，進(jìn)行嚴(yán)密隨訪，避免或延緩患兒聽力損失。

綜上所述，遺傳性耳聾基因篩查可明確新生兒耳聾基因的部分?jǐn)y帶情況，尚不能完全檢出目前已知的耳聾基因突變類型，故存在漏診的可能性。即便如此，遺傳性耳聾基因篩查也可作為一種新生兒遲發(fā)性耳聾基因的篩查工具，對于攜帶遲發(fā)性耳聾基因的新生兒，分析病因，給予預(yù)防指導(dǎo)，避免聽力損失，對降低遲發(fā)性耳聾發(fā)生提供有利的理論支持。此外，有必要對于攜帶耳聾基因的新生兒的父母進(jìn)行遺傳咨詢，依據(jù)遺傳模式進(jìn)行后代遺傳性耳聾的風(fēng)險評估及生育指導(dǎo)，以切實提高我國出生人口素質(zhì)。

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（收稿日期：2017-12-18） （本文編輯：董悅）