劉光華　賈曉　儒敏娜

【摘要】 目的：觀察甘露消毒丹（Ganlu Xiaodu Mircropill，GXM）及其揮發(fā)油對(duì)流感病毒（influenza virus，IV）感染小鼠肺組織病理炎癥、血清IL-6、TNF-α含量及肺組織NS1、NF-κB表達(dá)的影響，探討其抗IV感染的機(jī)制。方法：SPF級(jí)BALB/c小鼠108只，隨機(jī)分為正常組（A組）、模型組（B組）、GXM灌胃組（C組）、GXM滴鼻組（D組）、GXM合用組（E組）、奧司他韋組（F組），除A組外，其余5組以IV FM1-6-E2滴鼻造模。于造模后第3、7、10天進(jìn)行取材，對(duì)小鼠肺組織病理炎癥程度進(jìn)行評(píng)分，并計(jì)算肺指數(shù)及干濕比，在電鏡下觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)，采用ELISA法檢測(cè)血清中IL-6、TNF-α的含量，采用qPCR方法檢測(cè)肺組織中NS1的基因表達(dá)，采用Western Blot法檢測(cè)肺組織NF-κB的表達(dá)。結(jié)果：IV感染后，小鼠肺組織出現(xiàn)炎癥改變，其肺組織病理評(píng)分、肺指數(shù)均升高，干濕比降低，第7天炎癥最為嚴(yán)重。電鏡下可見(jiàn)肺泡上皮細(xì)胞腫脹，纖毛減少、脫落，細(xì)胞器減少。血清IL-6、TNF-α含量均升高，肺組織NF-κB表達(dá)升高，于第3天達(dá)峰值，而后降低；NS1表達(dá)亦升高，之后逐步下降。與B組比較，各治療組均能夠減輕肺部炎癥，降低病理評(píng)分、肺指數(shù)，升高干濕比，降低TNF-α含量，下調(diào)NF-κB表達(dá)，其中尤以E、F組作用最為明顯（P<0.05）。治療第3天，與B組比較，D、E、F組均能下調(diào)NS1的表達(dá)（P<0.05），而C組與B組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；C、E、F組均能夠降低IL-6含量（P<0.05），而D組與B組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。治療第7天，C組能夠下調(diào)NS1表達(dá)，D組能夠降低IL-6含量（P<0.05）。結(jié)論：GXM可降低IV感染后肺部炎癥，降低NS1蛋白的表達(dá)；減少促炎因子的釋放，其滴鼻灌胃合用較單一給藥有優(yōu)勢(shì)。

【關(guān)鍵詞】 流感病毒； 甘露消毒丹； 揮發(fā)油； 細(xì)胞因子

Effects of Ganlu Xiaodu Micropill and Its Volatile Oil on Lung Inflammation Related Factors in Mice Infected with Influenza Virus/LIU Guanghua，JIA Xiaoru，MIN Na，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（03）：001-006

【Abstract】 Objective：To observe the effects of Ganlu Xiaodu Micropill（GXM） and its volatile oil on pathological inflammation，IL-6 and TNF-α in serum，and the expression of NS1 and NF-κB in lung tissue of mice infected with influenza virus（IV），to explore the mechanism of anti IV infection.Method：108 SPF BALB/c mice were randomly divided into normal group （group A），model group（group B），GXM lavage group（group C），GXM nasal drops group（group D），GXM group（group E），Oseltamivir group（group F）；except group A，the other

5 groups were made models with IV FM1-6-E2 nasal.On the third，seventh，tenth day after modeling，pathological inflammation were scored，lung index and the ratio of dry and wet in mice lung tissue were assessed，and ultra structure of lung tissue was observed under electron microscope，ELISA method was used to detect the content of IL-6 and TNF-α in serum，the expression of NS1 gene in lung tissue was detected by qPCR method， and NF-κB by Western Blot method.Result：After IV infection，inflammation changes in the lung tissue of mice，the lung pathological score and lung index increased；the ratio of dry and wet decreased，on seventh day，inflammation was the most serious.Under electron microscope，alveolar epithelial cells of mice lung tissue swelled，the cilia decreased and shedding，organelles decreased.The content of IL-6 and TNF-α in serum and the expression of NF-κB in lung tissue increased，and all reached peak on the third day，then decreased，the expression of NS1 increased in the same time.Compared with group B，the treatment groups can reduce lung inflammation，reduce the pathological score and lung index，rise the ratio of dry and wet，reduce the content of TNF-α，cut the expression of NF-κB，especially in group E and F were the most obvious（P<0.05）.On the third day of treatment，the expression of NS1 was down regulated in group D，E and F（P<0.05），while the effect of group C was not obvious（P>0.05）.Group C， E and F could reduce the content of IL-6（P<0.05），while the effect of group D was not obvious（P>0.05）.On the seventh day of treatment，group C could reduce the expression of NS1，and group D could reduce the content of IL-6（P<0.05）.Conclusion：GXM can reduce lung inflammation and the expression of NS1 protein after IV infection，and reduce the release of proinflammatory factors，the combination of nasal drops and lavage administration has advantage over single administration.

【Key words】 Influenza virus； Ganlu Xiaodu Micropill； Volatile oil； Cytokine

First-authors address：Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.03.001

流行性感冒（流感）是一種常見(jiàn)的急性呼吸道傳染病，由流感病毒（influenza virus，IV）感染引起，其發(fā)病率高，傳染性強(qiáng)，人群普遍易感[1]。臨床表現(xiàn)輕重不一，輕者僅表現(xiàn)為感冒，病程短、癥狀輕、預(yù)后良好，重者可發(fā)展為流感病毒性肺炎，甚則危及生命[2]。中醫(yī)藥在防治IV感染方面具有重要的作用，臨床多以辛涼解表或清熱解毒之品治之每獲較好療效。但近年由于霧霾等環(huán)境污染及人們生活方式的改變、飲食的偏嗜，體虛濕盛或濕熱內(nèi)蘊(yùn)者日益增多，IV等病原微生物極易附著于PM2.5等微塵顆粒侵襲人體，并因人的體質(zhì)而從化，發(fā)為濕熱性質(zhì)的病證。臨床已有報(bào)道用甘露消毒丹（Ganlu Xiaodu Micropill，GXM）治療IV感染取得了較好的療效[3]。本研究從濕熱蘊(yùn)毒立論，探討清熱解毒、利濕化濁的GXM滴鼻、灌胃兩種不同給藥途徑對(duì)IV感染小鼠肺部炎癥的影響。通過(guò)觀察小鼠肺組織病理炎癥、肺指數(shù)、干濕比、肺組織超微結(jié)構(gòu)、血清中IL-6、TNF-α含量變化及肺組織中NS1、NF-κB表達(dá)，揭示GXM一方兩用對(duì)IV感染的效用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病毒株 甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/FM1/47（H1N1），由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院病毒室保存。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)BALB/c小鼠108只，體重（20±2）g，雌雄各半，購(gòu)買于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)合格證號(hào)：SCXK（遼）2013-009，使用合格證號(hào)：SYXK（遼）2015-0001。

1.1.3 藥物及制備 GXM藥物組成：滑石、黃芩、茵陳、石菖蒲、川貝母、木通、藿香、連翹、白蔻仁、薄荷、射干，中藥飲片購(gòu)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院門診藥局，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥分析教研室鑒定為正品。飲片以8倍量70%乙醇加熱回流提取3次，1 h/次，合并每組3次提取的藥液，回收溶劑并濃縮，制成含生藥1 g/mL混懸液。揮發(fā)油制備：將中藥粉碎，加8倍量水浸泡，裝入冷凝器中，水蒸氣蒸餾提取6 h，分層分取揮發(fā)油，制成含生藥6 g/mL的藥液。磷酸奧司他韋顆粒（生產(chǎn)廠家：宜昌長(zhǎng)江藥業(yè)，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H2009372）75 mg，配成1 mg/mL的溶液。每組藥液均4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.4 試劑與儀器 Trizol總RNA提取試劑，Invitrogen公司；RT-PCR試劑盒、DEPC、DNAmarker DL2000，購(gòu)于大連寶生物公司；小鼠IL-6、TNF-α ELISA試劑盒，Phospho-NF-κB p65抗體試劑盒，GAPDH，ECMII of Western-blot檢測(cè)試劑盒濃縮型免IgG二抗，購(gòu)于武漢博士德公司。

1.1.5 主要儀器 TP1020型自動(dòng)組織脫水處理機(jī)；EG1150型石蠟包埋機(jī)（LEICA，德國(guó)）；RM2135型病理精密輪轉(zhuǎn)切片機(jī)（LEICA，德國(guó)）；BX50F4型顯微鏡（OLY-MPUS）；熒光定量PCR儀（LC-Ⅱ）；IM71型酶標(biāo)儀；PowerPac Universal電泳通用型電源；Trans-Blot SD半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)（Bio-Rad，美國(guó)）；FlourChem Q蛋白印記成像系統(tǒng)（Proteinsimple，美國(guó)）；低溫高速離心機(jī)（Heraeus，德國(guó)）；H-7650型透射電鏡（日本株式會(huì)社）等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組 用隨機(jī)數(shù)字表法將小鼠分為6組，分別為正常組（A組）、模型組（B組）、GXM灌胃組（C組）、GXM滴鼻組（D組）、GXM合用組（E組）、奧司他韋組（F組），每組18只，對(duì)各組小鼠進(jìn)行標(biāo)記稱重。

1.2.2 模型制備 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1 d后，除A組動(dòng)物外，其余動(dòng)物在乙醚輕度麻醉下，經(jīng)鼻腔接種甲型流感病毒FM1株（0.1 mL/只）。A組動(dòng)物隔離飼養(yǎng)在同等條件下的房間，并按同樣方法鼻腔接種生理鹽水0.1 mL。

1.2.3 給藥方法 C組、E組、F組于感染后24 h開(kāi)始灌胃給藥，0.3 mL/（d·次），連續(xù)10 d；D組、E組于感染后24 h開(kāi)始滴鼻給藥，0.04 mL/（d·次），連續(xù)10 d。A組、B組同步灌胃生理鹽水0.3 mL。最后一次給藥后禁水、禁食4 h。

1.2.4 標(biāo)本采集 于造模后第3、7、10天采集標(biāo)本，每組取6只，稱重后摘眼球取血，儲(chǔ)存于促凝管中，以4 000 r/min的速度離心5 min，取上層血清存于EP管中，-80 ℃冰箱冷藏以備ELISA檢測(cè)。對(duì)小鼠進(jìn)行頸椎脫臼處死，在無(wú)菌操作臺(tái)將小鼠仰臥位固定，酒精消毒頸部及胸腹部，以無(wú)菌專用器械進(jìn)行操作，打開(kāi)胸腔，取出整個(gè)肺臟，稱取肺重，計(jì)算肺指數(shù)（肺質(zhì)量/體質(zhì)量×100%）。取左肺放入4%多聚甲醛中固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、行HE染色，取右肺組織-80 ℃凍存，以備Western Blot、qPCR檢測(cè)。根據(jù)文獻(xiàn)[4]進(jìn)行肺組織病理學(xué)評(píng)分。左肺下葉單獨(dú)稱重，置于37 ℃恒溫箱中48 h后，再次稱重，計(jì)算干濕比（干重/濕重）。第7天處死小鼠后迅速取其右肺上葉組織，2.5%戊二醛預(yù)固定，1%鋨酸固定，環(huán)氧樹(shù)脂浸透、包埋，切片，乙酸雙氧鈾、枸櫞酸鉛雙層染色，置于透射電鏡下觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)的變化。

1.2.5 qPCR法NS1基因含量測(cè)定 引物根據(jù)文獻(xiàn)[5]設(shè)計(jì)，NS1上游引物：5-ATGGATCCAAACACTGTGTC-3；下游引物：5-TCAAACTTCTGACCTAATTGTTCC-3；GAPDH，G1：5-ACCACCATGGAGAAGGCTGG-3，G2：5CTCAGTGTAGCCCAGGATGC 3，由北京六合華大基因合成。取肺組織制造細(xì)胞懸液，用Trizol提取細(xì)胞總RNA。分析RNA的純度及完整性，檢測(cè)RNA質(zhì)量合格后，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，加入NS1的引物，進(jìn)行qPCR檢測(cè)。

1.2.6 血清IL-6、TNF-α表達(dá)水平檢測(cè) 采用雙抗體夾心ELISA法，測(cè)定小鼠血清中IL-6、TNF-α含量，分別用小鼠IL-6、TNF-α的ELISA試劑盒。檢測(cè)程序按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.7 Western Blot法檢測(cè)NF-κB蛋白的表達(dá) 用總蛋白提取試劑提取總蛋白，離心取上清液。BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，提取液中加入5×SDS上樣緩沖液，100 ℃變性10 min，蛋白上樣每孔10 μL，10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)膜30 min，2%BSA室溫封閉2 h。一抗室溫孵育2 h，4 ℃過(guò)夜，TBST 10 min/次洗膜（3次），二抗室溫孵育1 h，TBST 10 min/次洗膜（3次）。ECL發(fā)光，F(xiàn)luor Chem Q蛋白質(zhì)印跡成像系統(tǒng)顯色。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有實(shí)驗(yàn)計(jì)量數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，統(tǒng)計(jì)方法采用單因素方差分析，組間比較采用LSD檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠肺指數(shù)、干濕比及病理評(píng)分比較 A組第3、7、10天的肺指數(shù)均低于B組，干濕比均高于B組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。IV感染后，B、C、D、E、F組小鼠肺組織炎癥病理評(píng)分、肺指數(shù)均于第7天達(dá)峰值。治療第3天，C、D組與B組的病理評(píng)分、肺指數(shù)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），C組與E組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；治療第7、10天，各治療組與B組的病理評(píng)分、肺指數(shù)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），C、D組與E組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。IV感染后，各時(shí)間點(diǎn)小鼠肺組織干濕比均于第3天達(dá)谷值。治療第3天，C、D組與B組的干濕比比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），且C、D組與E組的干濕比比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；治療第7天，除D組外，其余各治療組的干濕比與B組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且C、D組與E組的干濕比比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；治療第10天，各治療組干濕比與B組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且C、D組與E組的干濕比比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 小鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)改變 正常小鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞膜表面微絨毛豐富，血管內(nèi)皮細(xì)胞及基膜完整（圖1A）。IV感染小鼠肺泡上皮細(xì)胞腫脹，纖毛減少，脫落（圖1B）；細(xì)胞表面破壞，膠原纖維化，纖毛脫落，稀疏（圖1C）；血管明顯腫脹，核染色質(zhì)凝集粗塊狀，聚集于細(xì)胞核周圍，Ⅱ型細(xì)胞板層小體增多（圖1D）。

2.3 各組小鼠血清中IL-6、TNF-α含量比較 IV感染后，B、C、D、E、F組小鼠血清中IL-6含量于治療第3天達(dá)峰值，然后逐漸降低。治療第3天，C、E、F組的IL-6含量均低于B組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而D組與B組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），C、D組與E組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；治療第7天，各治療組的IL-6均低于治療第3天，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但C組與E組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；治療第10天，各治療組的IL-6均低于治療第7天，且C、D組與E組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。治療第3天，各治療組血清中TNF-α含量均出現(xiàn)峰值，而后降低。治療第3、7天，各治療組TNF-α含量較B組均有所下降，其中E組效果最為明顯，且C、D組與E組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；治療第10天，各組均顯著低于B組，其中D組與E組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），C組與E組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 各組小鼠肺組織NS1基因表達(dá)結(jié)果比較 治療第3天，D、E、F組的NS1基因表達(dá)較B組均有所下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而C組與B組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；治療第7、10天，各治療組的NS1基因表達(dá)較B組均有所下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且C、D組與E組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表4。

2.5 各組小鼠肺組織NF-κB表達(dá)結(jié)果的比較 IV感染后，B組較A組肺組織中NF-κB表達(dá)明顯增多，于治療第3天達(dá)峰值。治療第3、7、10天，各治療組的NF-κB均低于B組，且C、D組均高于E組多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)圖2、表5。

3 討論

IV變異快，動(dòng)物源性的IV在人群中的高致死率和廣泛流行性，已經(jīng)引起了全世界的高度關(guān)注[6]。當(dāng)前國(guó)內(nèi)霧霾天氣頻繁出現(xiàn)，兒童、老年人等弱勢(shì)群體IV感染率明顯升高。有研究發(fā)現(xiàn)霧霾期間兒童患呼吸系統(tǒng)疾病的風(fēng)險(xiǎn)提高26.95%[7]。IV屬正粘病毒科，為單分子負(fù)鏈RNA病毒，由包膜和致密的病毒核心組成。NS1是IV最重要的一個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，在IV感染宿主細(xì)胞中，NS1蛋白高水平表達(dá)，是引起宿主受損的重要因素之一[8]；NF-κB為核轉(zhuǎn)錄因子，能夠與因啟動(dòng)子部位的κB位點(diǎn)特異性結(jié)合，激活狀態(tài)下進(jìn)入細(xì)胞核并調(diào)控DNA的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，參與機(jī)體免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等[9]。IV感染機(jī)體后，機(jī)體啟動(dòng)免疫應(yīng)答機(jī)制，NS1蛋白表達(dá)升高，同時(shí)激活了NF-κB信號(hào)通路，活化的NF-κB調(diào)控炎癥因子IL-6、TNF-α等表達(dá)轉(zhuǎn)錄，引起宿主細(xì)胞的炎性損傷甚至凋亡[10]。促炎因子IL-6是炎癥反應(yīng)中的重要細(xì)胞因子，參與肺部炎癥病理過(guò)程[11]；TNF-α是重要的炎癥促進(jìn)因子，在體內(nèi)主要產(chǎn)生單核巨噬細(xì)胞，對(duì)肺臟具有強(qiáng)烈的毒性，它能誘導(dǎo)肺內(nèi)皮細(xì)胞活化、白細(xì)胞遷移、粒細(xì)胞脫顆粒和毛細(xì)血管滲漏等，從而誘發(fā)并進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)[12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IV感染后小鼠肺指數(shù)升高，干濕比降低，電鏡下可見(jiàn)小鼠肺組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，核膜與質(zhì)膜模糊不清，細(xì)胞器減少，細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)較多的空泡樣病變，肺內(nèi)炎癥明顯。肺組織NS1蛋白表達(dá)增多，早期明顯；NF-κB蛋白表達(dá)增加，于治療第3天達(dá)到峰值；血清中IL-6、TNF-α含量均升高，于第3天達(dá)到峰值，然后逐漸降低。在IV感染小鼠初期，細(xì)胞因子IL-6和TNF-α含量及肺組織中NF-κB、NS1表達(dá)均呈上升趨勢(shì)，這可能與感染后的免疫應(yīng)激有關(guān)。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，IV肺炎系氣候反常，感受邪毒、癘氣導(dǎo)致肺氣郁痹、痰瘀阻滯而發(fā)病，霧霾天氣，濕濁彌漫，易與時(shí)疫邪毒膠結(jié)致病，濕熱交蒸，郁阻氣分，蘊(yùn)毒上壅，具有“濕毒”“肺痹”特征[13]?！八苤?，每從其人之臟氣而化”，故IV極易附著于霧霾微塵顆粒侵襲人體，感染后可從化于人體的濕熱體質(zhì)而呈濕熱證的特點(diǎn)。臨床治療選用GXM，該方為“治濕溫時(shí)疫之主方”，芳香辟穢以醒竅，清熱祛濕以化痰，解毒化濁以開(kāi)痹。方中芳香辛散的藥味含有多種揮發(fā)油成分，可以滴鼻給藥。不同的成分、不同的提取方法、不同的給藥途徑，同種處方亦會(huì)產(chǎn)生不同的療效點(diǎn)。本次研究發(fā)現(xiàn)GXM能夠減輕肺組織超微結(jié)構(gòu)病變程度，正向調(diào)節(jié)炎癥因子，減緩IV感染小鼠急性期的炎性反應(yīng)，降低肺組織中NS1、NF-κB蛋白的表達(dá)。經(jīng)GXM治療后，各時(shí)間點(diǎn)小鼠肺指數(shù)、肺組織炎癥病理評(píng)分均降低、干濕比均升高，逐漸接近于正常，其中GXM合用組起效時(shí)間最早，其次為GXM灌胃組、滴鼻組。GXM能夠降低TNF-α、IL-6含量和抑制NF-κB表達(dá)水平，GXM合用組效果最好，第3天即起效，GXM灌胃組第7天亦發(fā)揮療效，而GXM滴鼻組療效較弱。GXM能夠降低NS1蛋白表達(dá)水平，GXM合用組效果最好，起效時(shí)間最早（第

3天）；GXM滴鼻組在第3天能夠降低NS1表達(dá)，而GXM灌胃組則于第7天發(fā)揮療效。GXM滴鼻組起效迅速且療效明顯，提示這可能與GXM含有的揮發(fā)油經(jīng)鼻吸收后快速地誘導(dǎo)黏膜免疫反應(yīng)，且直接滅殺IV有關(guān)?，F(xiàn)代藥理研究提示，藿香、石菖蒲、茵陳、薄荷等都含有揮發(fā)性物質(zhì)[14-18]。

綜上所述，GXM具有抗IV感染的作用，能夠有效控制IV感染小鼠肺部炎癥，這可能與抑制相關(guān)炎癥因子、降低NS1蛋白的表達(dá)有關(guān)。GXM揮發(fā)油滴鼻在早期抗病毒作用中效果明顯，抗感染過(guò)程中揮發(fā)油和醇提物合用，較單一給藥效果更加明顯，且有一定的時(shí)效性，其深入作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì).流行性感冒臨床診斷和治療指南（2004年修訂稿）[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2005，28（1）：5.

[2]郝歐美，王雪峰，劉雙，等.敷胸膏對(duì)流感病毒肺炎大鼠肺組織JNK，MKK4表達(dá)的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2016，22（23）：111-115.

[3]畢巖，岳冬輝，高玉偉，等.甘露消毒丹對(duì)H1N1流感病毒感染小鼠細(xì)胞因子的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2014，29（12）：3950-3953.

[4]劉曉紅，辛德莉，侯安存，等.小鼠肺炎支原體肺炎模型的建立及組織病理學(xué)評(píng)分方法的應(yīng)用[J].重慶醫(yī)學(xué)，2004，33（9）：1338-1340.

[5]劉永飛，李志輝，王慧煜，等.A型流感病毒NS1蛋白對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2012，42（12）：1242-1248.

[6]于玉鳳，郭曉蘭，王穎，等.H7N9禽流感病毒對(duì)人類致病的分子基礎(chǔ)分析[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2013，34（5）：657-665.

[7]崔亮亮，李新偉，耿興義，等.2013年濟(jì)南市大氣PM2.5污染及霧霾事件對(duì)兒童門診量影響的時(shí)間序列分析[J].環(huán)境與健康雜志，2015，32（6）：489-493.

[8]郭瑩瑩，王靖飛.A型流感病毒NS1蛋白結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展[J].生命科學(xué)，2010，22（2）：115-118.

[9] Shishodia S，Koul D，Aggarwal B B.Cyclooxygenase（COX）-2

in inhibitor celecoxib abrogates TNF-induced NF-kappa B activation through inhibition of activation of I kappa B alpha kinase and Akt in human non-small cell lung carcinoma：correlation with supp ression of COX-2 synthesis[J].Immunol，2004，173（3）：2011-2022.

[10]王曉晨，吉愛(ài)國(guó).NF-κB信號(hào)通路與炎癥反應(yīng)[J].生理科學(xué)進(jìn)展，2014，45（1）：68-71.

[11]王成祥，高桂新，魏守超，等.益氣清瘟解毒合劑對(duì)流感病毒FM1感染小鼠肺中IFN-γ，TNF-α，IL-10及IL-6蛋白動(dòng)態(tài)表達(dá)的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2005，30（7）：541-544.

[12]倪新強(qiáng)，韓新民.瀉肺平喘靈及其拆方對(duì)“肺合大腸”模型大鼠血清內(nèi)毒素及腫瘤壞死因子-α的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（14）：136-139.

[13]劉光華，吳振起.從“肺痹”論治兒童肺炎的臨床經(jīng)驗(yàn)[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合兒科學(xué)，2014，6（1）：37-38.

[14]李海峰，石若娜，韓文靜，等.石菖蒲藥理作用及其機(jī)制的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2016，27（11）：2728-2730.

[15]曹錦花.茵陳的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，30（6）：489-494.

[16]李子行.淺談廣藿香藥理作用研究進(jìn)展[J].今日健康，2015（1）：268.

[17]房海靈，李維林，任冰如，等.薄荷屬植物的化學(xué)成分及藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19（10）：13-17.

[18]韓云，鄒俊駒，曹蓉，等.甘露消毒丹及其拆方對(duì)CoxA16感染小鼠炎癥因子及NF-κB信號(hào)通路的影響[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2017，24（6）：15-18.

（收稿日期：2018-01-08） （本文編輯：張爽）