楊 希，李 平*，袁永峰，薛 梅，王 豐,2

(1.陜西省水產(chǎn)研究所，陜西西安 710086；2.中國水產(chǎn)科學院黃河水產(chǎn)研究所，陜西西安 710086)

秦嶺細鱗鮭(Brachymystaxlenoktsinlingensis)屬鮭形目、鮭科、細鱗魚屬,別名梅花魚、花魚，國內(nèi)分布僅見于陜西、甘肅渭河的部分山區(qū)支流和北側(cè)支流的上游中，屬國家二級水生野生保護動物[1]，多棲息山澗溪流中，肉食性，主要攝食水生昆蟲和蚊蠅，活動敏捷，應激性強，在人工繁育和增殖放流中容易引起應激反應，導致魚體掉鱗、充血、受傷，繼發(fā)感染，引起死亡[2]。

麻醉劑能夠降低魚體應激反應，方便人工操作和運輸，降低對魚體的傷害，提高成活率[3]?，F(xiàn)在魚用麻醉劑很多，包括丁香酚、CO2、喹哪啶、美托味酯等近30種。目前，對秦嶺細鱗鮭繁殖、標記、運輸?shù)冗^程中麻醉使用和劑量問題尚處于探索階段。間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(C10H15NO5S,tricaine methane sulfonate，MS-222)是一種性能優(yōu)良的魚用鎮(zhèn)靜劑，它具有使用濃度低、作用時間長、見效快、復蘇快、無副作用等優(yōu)點，被廣泛用于魚類的活體運輸、親魚采卵采精、標志放流、外科手術及免疫注射等領域[4]，是唯一被美國FDA批準能用于食魚的麻醉劑[5]。被動式整合雷達(PIT)標記是近年來比較流行的電子生物標記技術，被標記的魚類通過專用設備進行掃描便可識別。該技術準確率高，可以讓每個被標記動物個體有一個唯一的身份識別碼，有助于回捕并對放流魚類進行跟蹤監(jiān)測[6]。本試驗結(jié)合生產(chǎn)實際，探討了不同濃度MS-222對秦嶺細鱗鮭苗種和成魚在人工繁育、標記放流及運輸環(huán)節(jié)中使用劑量和麻醉效果，以期為MS-222在秦嶺細鱗鮭的麻醉研究方面提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

秦嶺細鱗鮭成魚為人工馴化培育的野生個體，體重為160 g±52 g，苗種為全人工繁育所得，規(guī)格為9.8 g±5.2 g，試驗用魚均健康無傷病。試驗在養(yǎng)殖場進行，麻醉前停食1 d，試驗用水為自然河道水，pH 7.8～8.5，溶解氧≥7.5 mg/L，水溫10.5℃。MS-222購自北京綠源伯德生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 成魚麻醉試驗 一般來說，MS-222的劑量與水產(chǎn)品的種類和大小有關[7]。參照文獻[5]，將MS-222溶于水配成15、25、30、35、40、45、50 mg/L的麻醉液?？紤]到秦嶺細鱗鮭為珍稀水生動物，綜合試驗對象及實際要求，沒有設置致死濃度。將成魚從暫養(yǎng)池中移入麻醉容器中，每組放30尾，雌雄比為1∶2，觀察魚的活動情況，用秒表記錄魚體進入不同麻醉階段的時間。隨后，轉(zhuǎn)入相同水溫的清水中復蘇，記錄魚體完全復蘇的時間。麻醉和復蘇時間為最后1尾試驗魚進入到相應狀態(tài)所用的時間。

在MS-222的作用下，秦嶺細鱗鮭在麻醉和復蘇階段表現(xiàn)出一系列不同的行為變化，不同的學者對麻醉和復蘇過程的分期標準不盡相同，參考王利娟等[4]，魏鎖成[8]，劉長琳等[9]分期標準，結(jié)合秦嶺細鱗鮭的實際情況，將秦嶺細鱗鮭的麻醉過程分為5個時期，復蘇過程分為5個時期(表1)。

1.2.2 PIT標記麻醉試驗 一般采用PIT人工標記放流技術。標記前，為減少操作過程中的物理傷害，一般會對魚苗進行麻醉。選擇合理的麻醉濃度，有利于操作。結(jié)合人工繁育試驗的試驗效果中MS-222對各種魚的使用濃度和作用時間，設置麻醉濃度為25、30、35、40、45、50 mg/L的濃度梯度，按照人工繁育的操作步驟，參考表1和表2，記錄魚苗麻醉時間和復蘇時間。

表1 麻醉程度分期及魚類行為特征

根據(jù)放流秦嶺細鱗鮭的大小選擇規(guī)格為1.35 mm×0.7 mm的芯片。采用背鰭基部植入芯片的方式，操作時離背鰭基部3 mm～5 mm，沿著頭的一邊向尾部方向30度角插針植入。植入芯片后，在傷口處涂抹紅霉素軟膏，并將標記魚苗放入室內(nèi)暫養(yǎng)池進行分組飼養(yǎng)，每日觀察傷口愈合情況、有無感染及芯片脫落情況發(fā)生，并及時進行應對處理。

1.2.3 苗種麻醉運輸試驗 暫養(yǎng)觀察1周后，無死亡和芯片掉落現(xiàn)象發(fā)生的魚苗采用人工增氧運輸至放流地點?？紤]到運輸過程中活魚不能進入全麻狀態(tài)，參考魏鎖成等MS-222對各種魚的使用濃度和作用時間，設置0、10、15、20、25、30 mg/L 5個濃度梯度，每個氧氣袋裝50尾魚苗，在保證相同運輸條件的情況下，測定其成活率。

表2 復蘇過程分期及魚類行為特征

1.2.4 數(shù)據(jù)處理分析 用SPSS18.0和Excel軟件對結(jié)果分析進行處理，P<0.01表示差異極顯著，P<0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度MS-222對秦嶺細鱗鮭親魚麻醉效果

由表3可知，隨著MS-222濃度的增加，秦嶺細鱗鮭親魚進入同一麻醉期的時間縮短，而完全復蘇的時間增加。在15 mg/L和20 mg/L的濃度下，魚體保持在深度鎮(zhèn)靜期。隨著濃度加深，麻醉程度隨之加深，復蘇所用時間越來越長。在所設置的濃度梯度內(nèi)，24 h后的存活率可以達到100%。該試驗是為了找到合適的可用于人工繁育的麻醉濃度，出于實際情況考慮，并未設置過高濃度，避免親魚受損。

單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，MS-222濃度為35 mg/L和40 mg/L時，麻醉效果差異不顯著(P>0.05)，其余各麻醉濃度為差異極顯著(P<0.01)。

2.2 不同濃度MS-222對秦嶺細鱗鮭苗種麻醉效果

由表4可知，隨著MS-222濃度的增加，秦嶺細鱗鮭苗種進入同一麻醉時期所用的時間越來越短，復蘇時間越來越長。在25 mg/L的濃度下，魚苗保持在深度鎮(zhèn)靜期。在30 mg/L、35 mg/L的濃度下，魚苗保持在平衡失調(diào)期。在40 mg/L、45 mg/L的濃度下，魚苗保持在深度鎮(zhèn)靜期。單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，MS-222濃度為35、40、45mg/L時，麻醉效果差異不顯著(P>0.05)，其余各麻醉濃度差異極顯著(P<0.01)。

表3 不同濃度MS-222對秦嶺細鱗鮭成魚麻醉效果

注:同列平均值間上標字母不同者差異顯著(P<0.05) 。

Note: Means with different superscript letters in the same column were significantly different(P<0.05) ．

表4 不同濃度MS-222對秦嶺細鱗鮭苗種麻醉效果

注:同列平均值間上標字母不同者差異顯著(P<0.05) 。

Note: Means with different superscript letters in the same column were significantly different(P<0.05) ．

2.3 不同濃度MS-222對秦嶺細鱗鮭苗種運輸麻醉效果

由表5可知，伴隨著MS-222濃度的增大，麻醉反應越來越強烈，苗種運輸過程中的成活率略微有所下降。單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，MS-222濃度為10mg/L和15mg/L時，麻醉效果差異不顯著(P>0.05)，其余各麻醉濃度均存在極顯著差異(P<0.01)。

表5 不同濃度MS-222對秦嶺細鱗鮭苗種運輸麻醉效果

注:同列平均值間上標字母不同者差異顯著(P<0.05) 。

Note: Means with different superscript letters in the same column were significantly different(P<0.05) ．

3 討論

3.1 關于最佳麻醉狀態(tài)

使用麻醉劑后，麻醉劑被鰓絲吸收，進入血液循環(huán)系統(tǒng)，然后在大腦中累積，隨著時間的延長，最終在血液中達到平衡，此時，魚體能夠達到一個穩(wěn)定的、行為特征明顯的最佳麻醉狀態(tài)[10]。處于深度鎮(zhèn)靜期狀態(tài)下的魚體對外界刺激幾乎沒有反應能力，代謝率下降，但依然能夠保持平衡，相比于輕度鎮(zhèn)靜期魚體顯得更為安定，有利于運輸。若麻醉程度過深，魚體會因肌肉張力喪失，失去平衡，無法游動，最終聚集引起缺氧窒息，或者與運輸裝置撞擊發(fā)生機械損傷[11]，因此，活魚運輸?shù)淖罴崖樽頎顟B(tài)是深度鎮(zhèn)靜期。

3.2 關于MS-222對秦嶺細鱗鮭的麻醉效果

MS-222的處理濃度一般為0.2 g/L～5.0 g/L，依據(jù)動物的體重大小及種類而有不同。國內(nèi)學者研究表明，MS-222 麻醉鱸魚(Pescepersico)[4]保活適宜濃度為80 mg/L，刀鱭(Coiliaectenes)麻醉適宜濃度為150 mg/L[12]，中華鱘(Acipensersinensis)和施氏鱘(Acipenserschrenckii)較好麻醉效果濃度為30 mg/L～40 mg/L[13]，斑馬魚 (Daniorerio)深度麻醉濃度為75 mg/L～90 mg/L[14]，半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)適宜麻醉效果濃度為60 mg/L[15]，國外學者對真鯛(Pagrusmajor)[16]、庸鰈(Hippoglossus)[17]等魚種進行了研究。目前,MS-222對秦嶺細鱗鮭的麻醉劑量研究卻鮮有報道。結(jié)合試驗結(jié)果，認為當MS-222的濃度達到45 mg/L，對秦嶺細鱗鮭親魚麻醉效果最佳。為保證后期成活率，當MS-222達到40 mg/L，對秦嶺細鱗鮭苗種麻醉效果最佳。當MS-222的濃度為10 mg/L時，秦嶺細鱗鮭苗種運輸效果最佳。

3.3 關于不同水溫和魚的規(guī)格下麻醉效果

MS-222在不同水溫、不同規(guī)格下麻醉效果存在差異性。廖國璋等[18]研究結(jié)果表明，水溫越低，入麻時間越短，麻醉效果隨溫度降低而增加，較低水溫對魚體本身就有一定的麻醉效果。陳細華等[13]研究發(fā)現(xiàn)，同種魚，規(guī)格越小，對MS-222的反應更敏感；相同麻醉濃度，規(guī)格越大，進入深度麻醉狀態(tài)所需時間越長。

秦嶺細鱗鮭為冷水性魚類，在設置試驗濃度梯度時，相比較于其他種類，MS-222試驗最高濃度和最低濃度都進行了相應調(diào)整。面對不同規(guī)格大小的秦嶺細鱗鮭，MS-222試驗濃度也做出了相應調(diào)整，從而使得試驗效果更加科學。

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