唐皓迪　顏同文　羅曉琳　吳俊洋　楊天兵　曾茂　郝軍莉　王丹

摘要：為探究雅安藏茶水提物的降脂活性，利用高脂飲食誘導，成功構建高脂小鼠模型，按照0.2-0.4mL/（10g·bw）的劑量經(jīng)口灌胃藏茶的水提取物，3個月后分別檢測各治療組小鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C以及Glu指標，分析肝臟的病理形態(tài)與對照組進行比較。結果顯示，和高脂空白組相比，治療組小鼠血清中的TC、LDL-C、Glu含量顯著降低（P<0.05）；其中高劑量治療組LDL-C降低極顯著（P<0.01），HDL-C含量顯著上升（P<0.05）；而治療組小鼠血清中TG含量的降低和低劑量治療組HDL-C含量的增高均無顯著性（P>0.05）。另外，和高脂空白組相比，預防組小鼠血清中的TC、LDL-C、Glu含量顯著降低（P<0.05），其中TC、LDL-C降低極顯著（P<0.01），HDL-C含量也顯著上升（P<0.05），而TG含量降低不顯著（P>0.05），這與治療組結果相似。由此可見，藏茶水提物不僅可降低高脂血癥小鼠的血脂、血糖水平，而且對高脂飲食具有一定的調節(jié)作用。

關鍵詞：雅安藏茶：小鼠高脂模型：降脂

文獻標志碼：A

文章編號：1674-5124（2018）02-0062-05

0引言

隨著人們生活水平的提高，高脂高糖飲食造成的向心性肥胖、非酒精性脂肪肝、異常葡萄糖代謝、高血壓、脂代謝紊亂等代謝綜合征（metabolicsyndrome，MS）的發(fā)病率逐年升高，且在年輕人中最為明顯。由此引起的心腦血管疾病已成為危害人類健康的主要殺手，脂代謝與健康的關系越來越受到人們的重視。因此，開發(fā)具有降脂功能的飲食，對于預防和改善高脂血癥具有重要意義。黑茶是中國六大茶類之一，因其特有的風味、耐沖泡以及保健功能越來越受到人們的關注。黑茶中目前最被人熟知且研究最為廣泛的是普洱茶。如肖凱等探討了普洱茶水提取物對大鼠非酒精性脂肪肝病的干預作用，其結果表明，普洱茶水提取物具有明顯降低血脂，改善肝臟脂肪變性的作用。而和普洱茶相比，同樣具有上千年的飲用歷史和深厚文化底蘊的雅安藏茶，人們知之甚少。

雅安藏茶，是指產于雅安專供藏區(qū)的一種茶。藏茶屬于最典型的黑茶，具有解膩、助消化等功效。目前，針對雅安藏茶的研究主要集中在風味成分分析、制作工藝改良等方面。如證明，雅安藏茶中富含豐富的茶多酚、兒茶素以及茶黃素、茶紅素、茶褐素等有效成分，并且隨著儲藏時間的延長，茶葉中的茶褐素含量逐年增加。而針對雅安藏茶的降脂效果及其作用機制的研究相對較少。因此，本文在構建高脂模型的基礎上，探究藏茶的降脂活性，為深入揭示其作用機制和開發(fā)具有保健功能的藏茶飲料提供理論和實驗依據(jù)。

1材料與儀器

1.1實驗動物

54只6～8周齡，雄性，（20±2）g，SPF級昆明小鼠，購自四川達碩生物科技有限公司，公司科技部實驗動物生產許可證編號：SCXK（川）2008-24。

1.2茶葉水提物制備

稱取雅安藏茶5g，打成粉后加入煮沸的蒸餾水50mL，水溫為90-100℃，靜置30s，過濾茶渣收集茶水；向茶渣中再次加入煮沸蒸餾水50mL，靜置40s，重復3次后，將3次收集的茶水混合、備用。

1.3藥品與試劑

動物高脂飼料配方為膽固醇1%，膽鹽0.2%，豬油10%，蛋黃粉10%，尿嘧啶0.1%，基礎飼料78.7%。TC、TG、LDL-C、HDL-C、Glu檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.4實驗儀器

SB-JS-2型潔凈工作臺，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；Xmark型酶標儀，Bio-RAD公司：CKX41型倒置顯微鏡，日本OLYMPUS公司：SC-3610型低速離心機，科大創(chuàng)新股份有限公司：JJ-2組織搗碎勻漿機，常州國華電器有限公司；LeicacM1860冷凍切片機，德國萊卡：石蠟切片機浙江金華市科迪儀器設備有限公司，K XW-80A微型漩渦混合儀，上海滬西儀器分析廠；電子天平，上海精科稱量儀器廠；以及96孔血清凝血板，計數(shù)器，微量加樣器，灌胃針，手術剪等。

2實驗方法

2.1實驗動物分組及處理

首先將54只雄性昆明小鼠隨機分為對照組、預防組、高脂模型組，其中對照組12只，喂食普通飼料；預防組10只，喂食高脂飼料，同時灌胃藏茶水提物；高脂模型組32只，喂食高脂飼料，構建飲食誘導高脂模型，時間為60d。分別從對照組和高脂模型組中隨機選出2只小鼠進行血脂及肝臟病歷切片檢測以判斷高脂模型是否構建成功。建模成功后，將剩余30只高脂模型小鼠再按照每組10只分為高脂空白組、低劑量治療組、高劑量治療組3個組，此時實驗動物共有5組，如表1所示。各組分別采用經(jīng)口灌胃給藥法，灌胃生理鹽水、藏茶水提物，1次/d，共90d。

2.2小鼠日常行為

注意觀察并記錄小鼠在實驗期間的進食、飲水，行為等變化。實驗期間室內通風良好，自然晝夜照明，氨濃度<20mg/L。相對濕度為40%-70%，室溫保持在18～22℃。各組小鼠均自由進食、飲水。

2.3小鼠體重監(jiān)測

實驗初始，每只小鼠進行標記、稱重；實驗過程中，每隔7d稱取、記錄每只小鼠的體重。

2.4血脂、血糖檢測

末次給食后，小鼠禁食、不禁水，12h后眼球取血，頸椎脫臼處死小鼠。全血室溫靜置3h，待血細胞析出后以3000r/min離心15min，小心吸取血清樣品，待檢測。根據(jù)檢測試劑盒中的說明書，利用酶標儀分析血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C及Glu等指標。

2.5肝組織形態(tài)學觀察

小鼠處死后立刻取出其肝臟最大葉距邊緣5mm處的肝組織，用10%中性甲醛溶液固定、脫水、二甲苯透明，石蠟包埋，切成6μm厚度，HE染色后，在光學顯微鏡下觀察，記錄。

2.6數(shù)據(jù)分析

使用SPSS21.0統(tǒng)計軟件分析實驗，兩組比較采用獨立樣本t檢驗，顯著性界定為0.05。計量資料數(shù)據(jù)以x±s表示。

3結果與分析

3.1建模期雅安藏茶水提物對小鼠體重影響

建模期間各組小鼠體重都隨飼養(yǎng)時間的延長而增加。和對照組相比，高脂組小鼠體重增長陜速，脂肪層明顯增厚，清晰可辨（如圖1所示），說明高脂飲食確可誘導小鼠體重增加：而灌胃了藏茶水提物的預防組雖使用高脂飲食誘導，小鼠體重增加仍很緩慢，如圖2所示。提示雅安藏茶可能具有降脂、減重作用。

3.2高脂模型組血脂水平分析

高脂飼料誘導60d后，從對照組和高脂組各隨機選出2只小鼠，眼眶取血、分離血清，檢測小鼠血清中的TG、TC、HDL-C指標，各組平均值，結果顯示對照組血清中的TG、TC、HDL-C含量分別為1.25，2.48，1.76mmol/L；高脂模型組分別為1.72，4.70，1.63mmol/L。高脂組TG和TC含量較對照組分別增高了37.6%和89.52%，而和對照組相比，高脂模型組的HDL-C降低了7.38%，如圖3所示。

3.3高脂模型組小鼠肝臟病理形態(tài)的觀察

如圖4所示，對照組小鼠肝組織肝小葉結構正常，肝細胞規(guī)則排列，肝細胞大小正常，胞核位于細胞中央。高脂組小鼠肝細胞則以彌漫性小泡性脂變?yōu)橹?，有脂肪空泡（見圖中紅圈內的黑色箭頭所指），結合體重增長曲線和血脂三項分析的結果，判定高脂小鼠建模成功。

3.4雅安藏茶水提物的降脂、降糖活性研究

各組小鼠灌胃處理90d后，眼眶取血并檢測各組血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C和Glu的含量，結果如表2所示。與高脂空白組相比，治療組小鼠血清中的TC、LDL-C和Glu含量顯著降低（P<0.05），其中高劑量治療組LDL-C降低極顯著（P<0.01），同時HDL-C含量顯著上升（P<0.05），而低劑量治療組HDL-C含量增加不顯著（P>0.05）；高、低劑量治療組TG含量降低與高脂空白組相比均不顯著（P>0.05）。和高脂空白組相比，預防組血清中的TC、LDL-C和Glu含量顯著降低（P<0.05），其中TC、LDL-C降低極顯著（P<0.01），HDL-C含量也顯著上升（P<0.05），而TG含量降低差異不顯著（P>0.05），與治療組結果相似。

4結束語

調整飲食和改善生活方式是各種高脂血癥治療的基礎，尤其對原發(fā)性高脂血癥患者，應首選飲食治療。因此，開發(fā)具有降脂功能的飲食，對于預防和改善高脂血癥有一定的應用價值。本文利用高脂飲食誘導，成功構建了小鼠高脂模型，并以此為研究基礎，探究雅安藏茶水提物對高脂飲食小鼠血脂、血糖的影響。結果顯示，高脂模型小鼠灌胃雅安藏茶水提物后，其血清中TC、TG、LDL-C、Glu等各項指標都較高脂空白組低，其中高劑量治療組血清中的TC和Glu含量的降低具有顯著性（P<0.05），LDL-C含量降低極顯著（P<0.01），而HDL-C含量顯著上升（P<0.05），高劑量治療組結果優(yōu)于低劑量治療組，這說明藏茶水提取物具有降脂、降糖活性。

而預防組小鼠和高脂空白組小鼠雖同時喂食高脂飼料，但預防組小鼠從開始就灌胃雅安藏茶水提物，在雅安藏茶水提物的干預下，預防組小鼠的體重、血清中TC、TG、LDL-C、Glu等各項指標均較高脂空白組低，其中TC、LDL-c、Glu的降低具有顯著性，HDL-C含量和高脂空白組相比也顯著增加。HDL-C又稱高密度脂蛋白一膽固醇，其作用為轉運磷脂和膽固醇，其含量與動脈管腔狹窄程度呈顯著的負相關，目前HDL-C含量減少已被確定是冠心病發(fā)生的危險因素之一。因此，長期飲用雅安藏茶不僅有利于改善血脂水平，而且對于脂代謝異常而引起的心腦血管疾病具有一定的預防作用。

為進一步探究雅安藏茶降脂、降糖的作用機制，課題組下一步將檢測各組小鼠肝臟中與糖、脂代謝密切相關的基因，如ACC、MCD、MCAD、CPT-1、FAS等mRNA的表達水平。如Shimamura等的研究表明普洱茶提取物能顯著減少小鼠血清中TG水平，同時降低小鼠肝臟中SREBP-lc和FASmRNA的表達水平。其結果表明，普洱茶提取物能夠通過下調SREBP-lc及其相關因子水平減少脂肪生成。另外，還有文獻報道高脂血癥大鼠腸道出現(xiàn)了菌群失調，雙歧桿菌、乳酸桿菌和腸球菌數(shù)量明顯減少，腸桿菌數(shù)量則相對增多，腸道菌群失調可加重脂質代謝紊亂，并且雙歧桿菌、乳酸桿菌和腸球菌數(shù)量的減少可以削弱血中膽固醇被轉化利用的過程，使血脂升高。由此可見，腸道菌群影響著宿主的脂肪代謝和儲存以及能量平衡的調控，是高脂血癥等相關代謝疾病發(fā)生的一個重要中間環(huán)節(jié)。因此，課題組還將利用收集的各組小鼠糞便，從微生態(tài)學角度揭示腸道菌群在高脂飲食誘導的高脂血癥發(fā)展中的動態(tài)變化及其原因，這不僅為以腸道菌群為靶點進行的膳食營養(yǎng)干預提供理論參考：同時為研究雅安藏茶降脂、降糖的作用機制研究提供理論及實驗依據(jù)。