張曉霞 楊紹斌 朱麗

摘要 [目的]篩選夾竹桃提取液配合馬勃粗提物毒殺菜青蟲的最適濃度。[方法]以2齡菜青蟲為供試蟲體，將夾竹桃提取液配合不同濃度馬勃粗提物噴灑于盛放菜青蟲的培養(yǎng)皿中，測定不同時段菜青蟲的死亡率。[結(jié)果]馬勃粗提物配合夾竹桃提取液對2齡菜青蟲有一定的毒殺作用，并表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)，當夾竹桃提取液濃度20 mg/mL、馬勃粗提物濃度25 mg/mL時，菜青蟲的校正致死率為83.33%，為最優(yōu)濃度。[結(jié)論]與同類化學(xué)藥劑相比，夾竹桃配合馬勃粗提物具有良好的毒殺效果且對環(huán)境無污染。

關(guān)鍵詞 夾竹桃；馬勃粗提物；菜青蟲；毒殺作用

中圖分類號 S436.3 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2018）23-0111-03

Abstract [Objective]To select the optimum concentration of toxicity and killing effect of Nerium indicum extract solution and Scleroderma flavidum on Pieris rapae. [Method]The Nerium indicum extracts were sprayed in a petri dish with different concentrations of Scleroderma flavidum， and the death rate of Pieris rapae was determined at different periods. [Result]Flavidum crude extract with Nerium indicum had certain poisoning effect on 2yearold Pieris rapae， and showed obvious dose effect， when Nerium indicum concentration was 20 mg/mL and Scleroderma flavidum coarse extract concentration was 25 mg/mL， the correction fatality rate of Pieris rapae was 83.33% with the optimal concentration. [Conclusion]Compared with similar chemical agents， it has good poisoning effect and no pollution to the environment.

Key words Nerium indicum；Scleroderma flavidum extracts；Pieris rapae；Toxicity and killing effect

菜青蟲為鱗翅目粉蝶科菜粉蝶的幼蟲。菜粉蝶寄主植物非常多，對十字花科蔬菜危害較重[1]，給蔬菜造成很多傷口，為軟腐病菌的侵入和危害提供便利條件[2]，同時會在蔬菜上排出并殘留大量蟲糞，使得葉片和菜心受到污染，從而影響蔬菜產(chǎn)品的商品質(zhì)量[3]。目前對菜青蟲的防治方法主要為化學(xué)防治，使用的殺蟲劑主要有氯氟氰菊酯、2%阿維菌素等，二者殺蟲效果顯著，但大量使用化學(xué)農(nóng)藥不僅有農(nóng)藥殘留還對生態(tài)環(huán)境造成了破壞，而且長時間使用也使蟲體產(chǎn)生了耐藥性[4-5]。鑒于化學(xué)殺蟲劑的抗性及生態(tài)環(huán)境和食品安全問題，研究出一種環(huán)境友好型生物農(nóng)藥來防治菜青蟲十分必要。

夾竹桃 （Nerium indicum Mill.）又名柳葉桃，屬夾竹桃科夾竹桃屬。植株有毒，生命力強，對土壤的要求不嚴，資源豐富。葉的乙醇提取物對二化螟幼蟲有較強的拒食作用，能抑制其生長發(fā)育[6]，高濃度提取液對菜青蟲具有一定的觸殺作用[7]，研究表明，夾竹桃提取物對松材線蟲具有致死性，且滅螺活性明顯[8] ，這為夾竹桃開發(fā)為病蟲害綜合治理的農(nóng)藥提供了理論依據(jù)。

黃硬皮馬勃（Scleroderma flavidum Ell.& EV.）孢子粉有消炎、殺菌、止血作用[9]。魏艷等[10-11]研究發(fā)現(xiàn)，黃硬皮馬勃提取物對3齡粘蟲具有毒殺作用。洪娜等[12]研究發(fā)現(xiàn)，褐皮馬勃孢子粉對嗜卷書虱有防治作用。但馬勃與植物源配合殺菜青蟲的研究國內(nèi)外鮮見報道。鑒于此，筆者用馬勃真菌和夾竹桃配合殺菜青蟲，為大型真菌與植物源復(fù)合型殺蟲劑的研發(fā)和菜青蟲的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1

供試蟲體。供試害蟲為菜青蟲，從田間捕捉，由中國科學(xué)院動物研究所王劍峰博士鑒定。將其置于溫度20～25 ℃、相對濕度70%～80%的實驗室飼養(yǎng)，試驗選取2齡幼蟲做供試蟲。

1.1.2 供試菌種。馬勃真菌采于內(nèi)蒙古赤峰市，經(jīng)遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所劉俊杰研究員鑒定。

1.1.3 供試植物。夾竹桃購于花鳥魚市場。

1.1.4 主要儀器。FA-2004精密電子天平、PRX—205B智能人工氣候箱、SW-CJ-2F（D）型醫(yī)用凈化工作臺、LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌器、BS-1EH數(shù)顯振蕩培養(yǎng)箱、R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、DHG-9146A鼓風(fēng)干燥箱。組織搗碎勻漿機。

1.2 方法

1.2.1

夾竹桃提取液的制備。將新鮮夾竹桃葉洗凈，晾干，剪成約1 cm.2 碎片。稱取80 mg，加入95%乙醇，用組織搗碎勻漿機勻漿。經(jīng)2次過濾，得夾竹桃乙醇萃取液。通過減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇，再定容到100 mL即為母液，母液終濃度為80 mg/mL。分別將母液按比例配成5、10、20、40、80 mg/mL，5種濃度溶液。

1.2.2

馬勃活性成分提取。將馬勃真菌的子實體進行固體菌種擴繁，接種至PDA液體培養(yǎng)基中，于26 ℃液體發(fā)酵搖床上培養(yǎng)7 d，再進行超聲波細胞破碎、離心，取上清液，進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濃縮液經(jīng)40 ℃恒溫干燥，得馬勃粗提物，將馬勃粗提物溶于不同體積的乙醇溶液中，用超聲波破碎，再經(jīng)3 000 r/min離心制成濃度分別為5、10、15、20、25 mg/mL的上清液。

1.2.3

菜青蟲引誘劑的篩選。引誘試驗采用濾紙藥膜法。分別將500 g黃瓜、山竹、甘藍、番茄、胡蘿卜放入組織搗碎機中充分攪拌15 min，用紗布過濾，加水分別得到黃瓜汁、山竹汁、甘藍汁、番茄汁、胡蘿卜汁。將直徑9 cm的培養(yǎng)皿洗凈，烘干，然后把直徑9 cm的圓形濾紙對半剪開，其中一半分別放入5種不同的果蔬汁中浸漬5 min，另一半在水中浸漬5 min。待水分自然揮發(fā)后，使用透明膠帶將對應(yīng)的兩半處理過的濾紙粘在一起，用固體膠將粘貼后的濾紙固定在培養(yǎng)皿底部，接入預(yù)先饑餓處理4 h的2齡試蟲20頭/皿，使其自然分散，并且濾紙兩邊分別放浸有同類提取液的白菜碎葉，正常飼養(yǎng)，蓋上皿蓋，設(shè)A1（黃瓜）、A2（山竹）、A3（甘藍）、A4（番茄）、A5（胡蘿卜）；對照組僅用蒸餾水處理記為A0。另取直徑9 cm的培養(yǎng)皿，其中放入只浸水且晾干的濾紙和浸水白菜碎葉作為空白對照組A0，接蟲后每12 h檢查一次兩半濾紙上的幼蟲分布情況。計算非選擇引誘率，并篩選出合適的引誘劑。

1.2.4

不同濃度夾竹桃醇提液對菜青蟲的毒殺效果測定。每組取20 mL山竹汁與20 mL濃度分別為5、10、20、40、80 mg/mL的夾竹桃醇提液混合，將浸有上述不同濃度混合液的新鮮白菜碎葉依次放入不同培養(yǎng)皿中，取20頭2齡菜青蟲放于各個培養(yǎng)皿中，試驗條件同上“1.2.3”，設(shè)B1、B2、B3、B4、B5；另取一個培養(yǎng)皿，其中只放入浸有山竹汁的新鮮白菜碎葉做空白對照（B0），每12 h 檢查一次結(jié)果，更換碎葉片并統(tǒng)計死亡試蟲數(shù)。

1.2.5 不同濃度馬勃粗提物對菜青蟲的毒殺效果測定。每組取20 mL山竹汁與20 mL濃度分別為5、10、15、20、25 mg/mL的馬勃粗提物混合，將浸有上述不同濃度混合液的新鮮白菜碎葉依次放入不同培養(yǎng)皿中，分別取20頭2齡菜青蟲放于各個培養(yǎng)皿中，試驗條件同上“1.2.3”，設(shè)C1、C2、C3、C4、C5；另取一個培養(yǎng)皿，其中只放入浸有山竹汁的新鮮白菜碎葉做空白對照（C0），每12 h 檢查一次結(jié)果，更換碎葉片并統(tǒng)計死亡試蟲數(shù)。

1.2.6 夾竹桃提取液配合不同濃度馬勃粗提物對菜青蟲的毒殺效果測定。每組取20 mL山竹汁加20 mL濃度為20 mg/mL夾竹桃醇提液與20 mL濃度分別為5、10、15、20、25 mg/mL的馬勃粗提物混合，再將新鮮白菜碎葉分別浸入上述不同濃度混合液中，各取20頭2齡菜青蟲放于培養(yǎng)皿中，試驗條件同“1.2.3”，設(shè)D1、D2、D3、D4、D5；另取一個培養(yǎng)皿，其中放入浸有20 mL山竹汁和20 mL濃度為20 mg/mL夾竹桃醇提液的混合液的白菜碎葉做空白對照（D0），每12 h 檢查一次結(jié)果，更換碎葉片并統(tǒng)計死亡試蟲數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0軟件Duncan，s Multiple Range Test方法進行顯著性分析。

引誘率=（對照邊蟲數(shù)- 處理邊蟲數(shù)）/對照邊蟲數(shù)×100%

平均引誘率=引誘材料各次檢查時的引誘率之和/檢查次數(shù)

死亡率=（死蟲數(shù)/供試蟲數(shù)）×100%

平均死亡率=同一觸殺材料各次檢查時的死亡率之和/檢查次數(shù)

校正死亡率=[（處理組死亡率- 對照組死亡率）/（1- 對照組死亡率）]×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 不同引誘劑對菜青蟲的引誘作用

由表1可知，5種果蔬汁對菜青蟲均有一定的引誘作用。處理3 d后引誘效果均明顯下降。其中，山竹汁對菜青蟲的引誘作用最強，山竹汁處理3 d內(nèi)引誘率一直保持在78%以上，4 d內(nèi)也保持在66%以上。因此，最終篩選出山竹汁作為引誘劑。

2.2 不同濃度夾竹桃醇提液對菜青蟲的毒殺效果

由表2可知，加入一定量的引誘劑后，3 d內(nèi)對菜青蟲的毒殺效果不明顯，3 d后隨著夾竹桃醇提液濃度的增加，對菜青蟲的毒殺效果越來越明顯，這表明雖然夾竹桃醇提液對菜青蟲具有一定的毒殺效果，但起效時間過長，當濃度達20 mg/mL時，毒殺效果最明顯。

2.3 不同濃度馬勃粗提物對菜青蟲的毒殺效果

由表3可知，加入一定量的引誘劑后，2 d內(nèi)馬勃粗提物對菜青蟲的毒殺效果明顯，但3 d后不能繼續(xù)起到毒殺作用，當濃度達20 mg/mL時校正死亡率達63.16%，且隨濃度增大呈毒殺效果不斷增強的趨勢，當濃度達25 mg/mL時校正死亡率達68.42%。

2.4 不同濃度馬勃真菌復(fù)合夾竹桃粗提物對菜青蟲的毒殺效果

由表4可知，加入一定量的引誘劑和適量夾竹桃醇提液后，隨著馬勃粗提物濃度的增加，2 d內(nèi)復(fù)合物對菜青蟲的毒殺效果明顯，3 d后毒殺效果趨于穩(wěn)定，當馬勃粗提物濃度達20 mg/mL時，復(fù)合物毒殺效果在2 d內(nèi)已達最佳狀態(tài)，當馬勃粗提物濃度達25 mg/mL時復(fù)合物毒殺效果在1 d內(nèi)已達最佳效果。

3 結(jié)論

為篩選夾竹桃提取液配合馬勃粗提物毒殺青菜蟲的最適濃度，該研究以2齡菜青蟲為供試蟲體，將夾竹桃提取液配合不同濃度馬勃粗提物噴灑于盛放菜青蟲的培養(yǎng)皿中，測定不同時段菜青蟲的死亡率。結(jié)果表明，山竹汁是菜青蟲的最佳引誘劑。馬勃粗提物配合夾竹桃提取液對2齡菜青蟲有一定的毒殺作用，并表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)。

當夾竹桃提取液濃度為20 mg/mL，馬勃粗提物濃度為25 mg/mL時，菜青蟲的校正死亡率為83.33%，為最優(yōu)濃度。

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