何發(fā)林 姜興印 姚晨濤

摘要 為了篩選出對小地老虎具有增效作用的復配藥劑組合，室內采用浸葉法測定了氯蟲苯甲酰胺與高效氯氟氰菊酯、噻蟲嗪、蟲螨腈、毒死蜱、甲維鹽、乙基多殺菌素復配對小地老虎3齡幼蟲的聯(lián)合毒力，并用共毒因子法與共毒系數(shù)法相結合評價了復配組合的聯(lián)合作用。利用共毒因子法定性篩選出共毒因子大于20的配比共16組，進一步通過共毒系數(shù)法定量篩選出共毒系數(shù)大于120的復配組合，其中具有增效作用的配比有18組。氯蟲苯甲酰胺與高效氯氟氰菊酯、蟲螨腈、毒死蜱、甲維鹽、乙基多殺菌素、噻蟲嗪按6∶5、1∶2、1∶1、3∶4、3∶5、3∶8復配時增效作用最顯著，其共毒系數(shù)分別為220.28、214.15、298.79、171.85、201.90、319.64。

關鍵詞 小地老虎； 農藥復配； 共毒因子； 共毒系數(shù)

中圖分類號： S 433.82

文獻標識碼： B

DOI： 10.16688/j.zwbh.2017471

Abstract In order to screen out the combination of insecticide complex agents with synergistic effect onAgrotis ipsilon， the co-toxicity of chlorantraniliprole withlambda-cyhalothrin， thiamethoxam， chlorfenapyr， chlorpyrifos， emamectin benzoate and spinetoram against 3rd-instar ofAgrotis ipsilonwere determined with leaf dipping method， and the combined effects of the combinations were evaluated by the method of co-toxicity factor and co-toxicity coefficient in the laboratory. Sixteen combinations of the co-toxicity factor more than 20 and eighteen combinations of co-toxicity coefficient greater than 120 were screened qualitatively by co-toxicity factor method and co-toxicity coefficient method， respectively. The results showed that chlorantraniliprole withlambda-cyhalothrin， chlorfenapyr， chlorpyrifos， emamectin benzoate， spinetoram and thiamethoxam， with ratio of 6∶5， 1∶2， 1∶1， 3∶4， 3∶5， 3∶8，respectively， showed significant synergistic effect， and the co-toxicity coefficient （CTC） was 220.28， 214.15， 298.79， 171.85， 201.90 and 319.64， respectively.

Key words Agrotis ipsilon； combination of insecticides； co-toxicity factor； co-toxicity coefficient

小地老虎Agrotis ipsilon（Rottemberg） 屬鱗翅目夜蛾科，俗稱土蠶、地剪、切根蟲等，是一種多食性的世界性農業(yè)害蟲，在我國各省份均有分布，其寄主十分廣泛，主要為害玉米、蔬菜等100多種農作物[1]。長期以來，對該害蟲的防治以化學藥劑防治為主[2]。全球氣候變暖和農業(yè)種植制度（免耕技術、輪作制度等）的改變?yōu)樾〉乩匣⑻峁┝穗[蔽的場所，加重了其為害程度，導致作物產量損失嚴重。而且小地老虎具有遷徙性強、抗藥性發(fā)展快等特點，近年來該蟲在我國發(fā)生為害日趨嚴重[3]。

氯蟲苯甲酰胺是雙酰胺類殺蟲劑，由杜邦公司發(fā)現(xiàn)并開發(fā)，該藥劑對鱗翅目害蟲高效，對哺乳動物低毒，作用機制獨特而與常規(guī)殺蟲劑無交互抗性[4]。但廣泛應用后害蟲產生抗性風險也在逐步增加[5]，許多鱗翅目害蟲已對其產生了嚴重的抗藥性。國內外關于小地老虎生物學、生態(tài)學及防治藥劑的報道有很多[6-11]，但有關其對藥劑的抗性及其生化機制以及新藥劑的開發(fā)等方面研究仍存在不足[12]。研究表明小地老虎對有機磷類、菊酯類等多種藥劑已產生了很高的抗性，有些種類的殺蟲劑對其甚至完全失效[13-16]。氯蟲苯甲酰胺作為當前防治鱗翅目害蟲的主要藥劑，其長期大量施用必會加速小地老虎的抗藥性發(fā)展，將對農作物的安全生產造成嚴重威脅。因此，研究農藥復配制劑對于延長新農藥品種使用壽命、緩解抗性產生、提高藥效、擴大防治譜、保證環(huán)境安全和降低防治成本等具有重要的意義[17]。

為篩選出對小地老虎具有增效作用的復配藥劑組合，并明確其在不同配比下的聯(lián)合作用效果。本研究在測定氯蟲苯甲酰胺、高效氯氟氰菊酯、噻蟲嗪、毒死蜱、蟲螨腈、甲維鹽、乙基多殺菌素對小地老虎3齡幼蟲室內毒力的基礎上，采用等效線法設置配比，并以共毒因子法進行定性篩選與共毒系數(shù)法進行定量分析相結合的方法篩選出具有增效活性的配方組合，明確其最佳復配比例及聯(lián)合毒力效果，旨在為田間小地老虎的化學防治和抗性治理提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 試驗藥劑及來源

供試殺蟲劑均為原藥，包括95.3%氯蟲苯甲酰胺（chlorantraniliprole），上海杜邦農化有限公司；96%高效氯氟氰菊酯（lambda-cyhalothrin），山東濰坊潤豐化工股份有限公司；98%噻蟲嗪（thiamethoxam），浙江禾本科技有限公司；95%毒死蜱（chlorpyrifos），浙江新安化工集團股份有限公司；90%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（emamectin benzoate），后文簡稱甲維鹽，南京紅太陽股份有限公司；81.2%乙基多殺菌素（spinetoram），美國陶氏益農公司；95%蟲螨腈（chlorfenapyr），德國拜耳作物科學公司；溶劑：99%丙酮（acetone），天津大茂化學試劑廠；乳化劑：TritonX-100，北京雅安達生物技術有限公司。

1.1.2 供試蟲源

將田間誘集的小地老虎Agrotis ipsilon（Rottemberg）成蟲，在室內條件下飼養(yǎng)至產卵，成蟲喂食20%的蜂蜜水。初孵幼蟲（1～2齡）喂食新鮮甘藍葉片，3齡以后轉入12孔細胞培養(yǎng)板（孔徑22 mm，孔深18 mm），并喂食新鮮的人工飼料，老熟幼蟲轉入平底試管（直徑22 mm，高80 mm）內飼養(yǎng)直至化蛹。試蟲飼養(yǎng)條件：人工智能養(yǎng)蟲室，溫度為（27±1）℃、相對濕度為75%±5%、光周期為L∥D=16 h∥8 h、光照強度3 500 lx。選擇同一批生長一致的新蛻皮（12 h內）3齡幼蟲進行室內毒力測定。

1.2 試驗方法

1.2.1 單劑毒力測定

室內毒力測定采用浸葉法。將供試藥劑用丙酮配制成母液，再用0.05% 的TritonX-100水溶液將藥劑等比稀釋至試驗濃度。將從未用藥的鮮嫩甘藍葉表面蠟質層洗去，晾干，用直徑1.5 cm打孔器打成的小葉碟（避開主葉脈），將葉碟分別在不同處理藥液中浸泡10 s，取出后在吸水紙上晾干（25℃，2 h），然后放入24孔細胞培養(yǎng)板（孔徑16 mm，孔深17 mm）中，每孔放3片葉碟，每孔接入1頭新蛻皮（12 h 內）的3齡幼蟲，每個處理重復4 次，每個重復24 頭試蟲，以0.05% 的TritonX-100水溶液作對照。

將處理試蟲置于溫度（27±1）℃、相對濕度75%±5%、光周期L∥D=16 h∥8 h 的實驗室條件下飼養(yǎng)觀察，48 h后檢查死亡蟲數(shù)，用毛筆輕觸無反應者視為死亡。根據(jù)試驗要求和藥劑特點，可以適當延長或縮短檢查時間。

1.2.2 共毒因子的測定

采用Mansour等[18]的共毒因子法定性篩選出共毒因子大于20的增效配比。假設經毒力測定A、B兩單劑的致死中濃度分別為a和b，選擇具有增效作用的5個配比，這5個配比即為等效線法中相加作用線的六等分點，可表示為a/5b、a/2b、a/b、2a/b、5a/b。這5個配比混劑的濃度分別為（a+5b）/6、（a+2b）/3、（a+b）/2、（2a+b）/3、（5a+b）/6，通過共毒因子法評價A+B混劑的增效作用效果。具體配制方法是將各單劑配制成致死中濃度藥液，再按體積比1∶5、1∶2、1∶1、2∶1、5∶1混合即得不同配比混劑藥液，用于初步評價氯蟲苯甲酰胺與6種藥劑按不同比例復配的聯(lián)合作用。

共毒因子=（實測死亡率-理論死亡率）/理論死亡率×100，共毒因子>20表示有增效作用；-20≤共毒因子≤20表示相加作用；共毒因子<-20表示拮抗作用。生物測定方法同1.2.1。

1.2.3 共毒系數(shù)的測定

以共毒因子法篩選出共毒因子大于20的配比作參考，并在該配比范圍內進一步細化配比，再根據(jù)死亡率設置5～7個濃度梯度測定其對小地老虎3齡幼蟲的聯(lián)合毒力，求出LC50及線性回歸方程，通過參照Sun等[19]的共毒系數(shù)法計算出共毒系數(shù)（CTC），篩選出共毒系數(shù)大于120的最佳增效配比。

相對毒力指數(shù)（TI）=（標準藥劑LC50/供試藥劑LC50）×100；

混劑實際毒力指數(shù)（ATI）=（標準藥劑LC50/供試藥劑LC50）×100；

混劑理論毒力指數(shù)（TTI）=ATI（A）×藥劑A在混劑中百分含量+ATI（B）×藥劑B在混劑中的百分含量；

共毒系數(shù)（CTC）=（混劑實際毒性指數(shù)ATI/混劑理論毒性指數(shù)TTI）×100，大于120為增效作用；共毒系數(shù)80～120為相加作用；小于80為拮抗作用。計算共毒系數(shù)時使用復配組合中LC50較大的單劑為標準殺蟲劑。生物測定方法同1.2.1。

1.3 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)小地老虎的存活情況，不同藥劑處理間的死亡率用Abbotts公式校正，計算出死亡率，采用DPS 8.01軟件和 Microsoft Excel 2010軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，得出毒力回歸方程、致死中濃度LC50、95%置信區(qū)間（95%CI）、相關系數(shù)r、相對毒力指數(shù)（TI）及相關參數(shù)。

2 結果與分析

2.1 單劑毒力測定結果

7種殺蟲劑對小地老虎3齡幼蟲毒力測定結果（表1）表明，氯蟲苯甲酰胺的毒力最高，其LC50為2.725 6 mg/L，噻蟲嗪的毒力最低，其LC50為37.582 6 mg/L，毒力大小順序為：氯蟲苯甲酰胺>高效氯氟氰菊酯>蟲螨腈>毒死蜱>甲維鹽>乙基多殺菌素>噻蟲嗪。

2.2 共毒因子法定性篩選結果

采用共毒因子法測定氯蟲苯甲酰胺與6種藥劑按不同比例復配對小地老虎3齡幼蟲的毒力（表2）。在試驗的6個復配組合中，共毒因子大于20的組合共有16組，其中與高效氯氟氰菊酯3∶10、3∶5、6∶5復配時共毒因子分別為37.89、30.67、40.17；與蟲螨腈1∶8、1∶2復配時共毒因子分別為41.83、45.59；與毒死蜱1∶25、1∶10、1∶5、2∶5、1∶1復配時的共毒因子分別為30.97、27.65、26.96、33.55、38.45；與甲維鹽3∶40、3∶10、3∶4復配時共毒因子分別為31.61、25.90、38.37；與乙基多殺菌素3∶5復配時共毒因子為31.54；與噻蟲嗪3∶20、3∶8復配時共毒因子分別為27.29、41.69。

2.3 共毒系數(shù)法定量篩選結果

在共毒因子法定性最佳配比組合篩選的基礎上，進一步通過共毒系數(shù)法測定不同配比組合的增效作用。由共毒系數(shù)法定量篩選的結果（表3）可知，在所設配比中，氯蟲苯甲酰胺與高效氯氟氰菊酯1∶4、3∶10、6∶5復配時共毒系數(shù)分別為133.21、207.54、220.28，其中以6∶5復配時增效作用最顯著，配比3∶5表現(xiàn)為相加作用，配比2∶1為拮抗作用；與蟲螨腈1∶9、1∶8、1∶2、1∶1復配時共毒系數(shù)分別為123.54、164.92、214.15、125.46，以1∶2復配時增效最顯著，1∶5為拮抗作用；與毒死蜱1∶25、1∶10、2∶5、1∶1復配時共毒系數(shù)分別為158.18、125.88、204.79、298.79，以1∶1復配增效最顯著，1∶5為拮抗作用；與甲維鹽3∶40、3∶4復配時共毒系數(shù)分別為156.12、171.85，以3∶4復配增效最顯著，1∶2為拮抗作用；與乙基多殺菌素3∶5、3∶4復配時共毒系數(shù)分別為201.90、125.20，以3∶5復配增效最顯著，1∶1為拮抗作用；與噻蟲嗪3∶20、3∶8、1∶2復配時共毒系數(shù)分別為147.20、319.64、196.54，以3∶8復配增效最顯著，1∶5為拮抗作用。氯蟲苯甲酰胺與6種不同類別藥劑復配時均有增效作用的組合，其中有部分共毒因子大于20的組合的共毒系數(shù)小于120，即共毒因子大于20的復配組合不一定具有增效作用。

3 結論與討論

國內常用的農藥混用聯(lián)合作用評價方法有很多，其中孫云沛的共毒系數(shù)法是農藥聯(lián)合作用的主要評價方法之一[20]，該方法不僅可以知道混劑是否增效，同時還可知道混劑的增效程度。很多研究采用共毒系數(shù)法評價幾種藥劑復配對靶標昆蟲的聯(lián)合毒力[21-25]，然而，該方法工作量大，所需靶標昆蟲蟲量大，且測定結果有一部分組合無增效作用，難以得到最佳的配比，已不適于評價農藥的聯(lián)合作用，其評價結果難以指導農藥的實際生產和應用[26]。而共毒因子法具有省時、省工、省材料等特點，此法只能確定每個復配組合是否增效，但不可能知道復配劑對靶標昆蟲的實際毒力和增效程度[27]。現(xiàn)常用共毒因子與共毒系數(shù)相結合的方法評價農藥的聯(lián)合作用，該方法通過共毒因子法對大量的配比進行定性篩選，再用共毒系數(shù)法對共毒因子大于20的配比組合進行定量篩選，得到具有增效作用的最佳配比和各配比的增效程度。但也有結果表明，通過共毒因子法得到共毒因子大于20的增效組合后，再用共毒系數(shù)法對共毒因子大于20復配組合篩選時卻沒有增效作用[28-29]。本研究也出現(xiàn)了這種情況。

雙酰胺類殺蟲劑由于低毒、靶標獨特、應用方法多樣，已成為害蟲綜合治理戰(zhàn)略中的一類重要藥劑[30]。氯蟲苯甲酰胺對鱗翅目害蟲幼蟲毒力明顯高于高效氯氰菊酯、噻蟲嗪、阿維菌素、乙基多殺菌素、茚蟲威等藥劑，且對非靶標生物表現(xiàn)出了很強的毒力選擇性[12，31-32]，劉同金等[33]和陸俊姣等[34]發(fā)現(xiàn)氯蟲苯甲酰胺對玉米田小地老虎的田間防治效果達到90%以上，表明氯蟲苯甲酰胺是防治小地老虎等鱗翅目害蟲最為高效的藥劑之一。但由于殺蟲劑頻繁施用，小地老虎的抗藥性發(fā)展十分迅速，現(xiàn)已對有機磷類和擬除蟲菊酯類等多種殺蟲劑產生了很高的抗藥性，有些種類的殺蟲劑甚至完全失效[15]。隨著氯蟲苯甲酰胺田間的大量使用，研究發(fā)現(xiàn)部分地區(qū)小菜蛾Plutella xylostella（L.）、甜菜夜蛾Spodoptera exigua（Hübner）和斜紋夜蛾Spodoptera litura（Fabricius）等鱗翅目害蟲已對其產生了不同程度的抗藥性[35-37]。如果在小地老虎的防治上不加節(jié)制地頻繁使用氯蟲苯甲酰胺，也會加速其抗藥性的發(fā)展。因此，加快新農藥品種的開發(fā)和對現(xiàn)有殺蟲劑進行科學合理混配已成為抗藥性治理和害蟲綜合防治的有效手段。

本研究以氯蟲苯甲酰胺為主干藥劑，分別與其他6種不同類別殺蟲劑進行復配，通過等效線法選擇具有增效作用的5個配比，采用共毒因子法篩選出共毒因子大于20的復配組合，然后進一步細化配比，通過共毒系數(shù)法篩選出共毒系數(shù)大于120的最佳復配組合。研究結果將為防治小地老虎復配劑配方的篩選和抗性治理提供理論基礎和技術支持，有關氯蟲苯甲酰胺與幾種藥劑復配對小地老虎的增效作用機理及增效配方在實際生產中的應用效果，有待進一步試驗驗證。

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（責任編輯：楊明麗）