周 波 楊英捷 何麗萍

細(xì)胞角蛋白(cytokeratin,CK)是組成細(xì)胞骨架系統(tǒng)中間絲的成分之一，分為CK1～CK20等20種。細(xì)胞角蛋白主要分布于上層組織細(xì)胞中，但是在骨髓、血液、淋巴結(jié)等處表達(dá)能力較弱，腫瘤細(xì)胞能夠保留其來源的胚層特性，細(xì)胞角蛋白已經(jīng)成為腫瘤細(xì)胞較為敏感和特異的標(biāo)志物，被用來檢測(cè)惡性腫瘤細(xì)胞[1]。宮頸癌是女性常見的1種惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于乳腺癌。宮頸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)標(biāo)志物的篩選為轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究提供線索，為乳腺癌的早期治療提供分子基礎(chǔ)，為抗轉(zhuǎn)移治療提供靶點(diǎn)。大量研究表明，CK20在宮頸癌組織中的表達(dá)較良性腫瘤組織上調(diào)，與宮頸癌轉(zhuǎn)移具有一定關(guān)系[2-3]。本次研究通過對(duì)宮頸癌患者采用免疫組化SP法測(cè)定腫瘤標(biāo)本中CK20表達(dá)水平，探討細(xì)胞角蛋白20表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 基本資料

選取2014年6月到2016年6月在本院治療的宮頸癌患者77例，25例宮頸癌良性腫瘤組織作為對(duì)照?；颊咂骄挲g(48.42±7.85)歲，年齡21～57歲。根據(jù)最新宮頸癌臨床治療指南及國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)宮頸癌臨床分期標(biāo)準(zhǔn)[4]，其中ⅠB期16例，ⅠB2期患者28例，ⅡA期20例患者，Ⅲ期患者13例?；颊吣挲g間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究獲我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或近親屬對(duì)研究方案簽署知情同意書。

1.2 入選及排除標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)[5]：確診為宮頸癌且無(wú)其他惡性腫瘤患者；手術(shù)前未進(jìn)行輔助放化療、基因治療及生物治療患者；手術(shù)前進(jìn)行血液化驗(yàn)、胸部、胃部及腹部CT等檢查，排除內(nèi)分泌疾病、炎性疾病等對(duì)本研究有影響的疾?。换颊咄鈪⑴c本次研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：不滿足入選標(biāo)準(zhǔn)的患者；伴有嚴(yán)重免疫缺陷或自身免疫疾病；患者未簽署同意書。

1.3 方法

免疫組化SP染色法：將樣本組織浸泡在40 g/L多聚甲醛溶液中，用石蠟包埋，然后脫蠟脫水，經(jīng)H2O2滅活內(nèi)源酶，PBS漂洗3次。經(jīng)自來水充分洗滌，然后用蘇木精復(fù)染。細(xì)胞角蛋白20陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，顯現(xiàn)為棕黃色顆粒。根據(jù)顯色癌細(xì)胞比例分為：著色細(xì)胞比例>30%為強(qiáng)陽(yáng)性，著色細(xì)胞比例<30%為陽(yáng)性，著色細(xì)胞比例<10%為弱陽(yáng)性，腫瘤細(xì)胞均未著色為陰性。

1.4 試劑及儀器

蒸餾水：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)所配制；淋巴細(xì)胞分離液：上海華精生物技術(shù)公司生產(chǎn)；PBS緩沖液：北京協(xié)和醫(yī)院病理科配制；蘇木精：北京協(xié)和醫(yī)院病理科配制；無(wú)水乙醇：北京中山金橋生物有限公司；多聚甲醛溶液：北京協(xié)和醫(yī)院病理科配制。離心機(jī)：美國(guó)Beckman公司生產(chǎn)；干燥箱：上海實(shí)驗(yàn)儀器總廠生產(chǎn)；低溫冰箱：美的公司生產(chǎn)。

1.5 化療敏感性判斷

ⅠB1、ⅠB2、ⅡA期患者采用新輔助化療，聯(lián)合化療后行手術(shù)根治治療；Ⅲ期患者采用化療后聯(lián)合放療治療，化療3個(gè)周期后為評(píng)估時(shí)間點(diǎn)?；煼桨覆捎肨P方案(鉑類+紫杉醇類)：順鉑75 mg/m2+紫杉醇 175 mg/m2，。根據(jù)實(shí)體瘤療效標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)評(píng)價(jià)實(shí)體瘤近期療效：完全緩解(CR)，腫瘤病灶完全消失；部分緩解(RR)，病灶的最長(zhǎng)徑之和與基線狀態(tài)相比，至少減少30%以上；病變進(jìn)展，病灶最長(zhǎng)徑之和與治療之后所記錄到的最小病灶最長(zhǎng)徑之和比較，增加20%，或出現(xiàn)一個(gè)或以上新的病灶；病變穩(wěn)定，介于部分緩解和疾病進(jìn)展之間。定義完全緩解和部分緩解為臨床有效，化療敏感；穩(wěn)定和進(jìn)展為無(wú)效，定義為化療耐藥(不敏感)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)；計(jì)數(shù)資料采用檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CK20陽(yáng)性表達(dá)率比較

CK20在宮頸癌患者外周血中的陽(yáng)性表達(dá)率31.17%(24/77)，明顯高于宮頸癌良性腫瘤組織對(duì)照組的16.00%(4/25)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 CK20與宮頸癌臨床特征的相關(guān)性

HPV感染陽(yáng)性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者CK20水平高于HPV陰性者(P<0.05)。宮頸癌組織學(xué)分級(jí)越低，CK20表達(dá)水平越高(P<0.05)。CK20表達(dá)水平宮頸癌患者年齡、臨床分期、腫瘤最大直徑無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。與宮頸癌病理分型、HPV感染、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分化具有明顯相關(guān)性(P<0.05)，見表1。

2.3 CK20表達(dá)與宮頸癌化療敏感性的相關(guān)性

根據(jù)世界衛(wèi)生組織制定的關(guān)于實(shí)體腫瘤化療敏感性標(biāo)準(zhǔn)，完全緩解和部分緩解為臨床有效，定義為化療敏感；穩(wěn)定和進(jìn)展為無(wú)效，定義為化療耐藥，將患者分為化療敏感組和不敏感組，其中敏感組44例，不敏感組33例，化療不敏感組CK20表達(dá)水平明顯高于化療敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表1 CK20與宮頸癌臨床特征的相關(guān)性/例

表2 CK20表達(dá)水平與宮頸癌化療敏感性的相關(guān)性/例

3 討論

細(xì)胞角蛋白是中間絲蛋白家族最大、最復(fù)雜的亞類，可從增殖或凋亡的細(xì)胞中釋放，其中CK20是最新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞角蛋白，含有424個(gè)氨基酸殘基，具有獨(dú)特的表達(dá)方式和分布特點(diǎn)[6-7]。CK20的合成不僅局限于減數(shù)分裂后末端分化的細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞侵襲、惡性轉(zhuǎn)化、腫瘤轉(zhuǎn)移及細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)都能夠繼續(xù)進(jìn)行。CK20具有嚴(yán)格的上皮特異性分布，主要分布于泌尿道傘狀細(xì)胞、舌味蕾細(xì)胞、胃十二直腸粘膜等[8-10]。CK蛋白有20多種異構(gòu)體，在病理診斷學(xué)中CK蛋白是腫瘤上皮來源的主要手段之一。其中CK20蛋白常表達(dá)在宮頸上皮中，是宮頸癌主要診斷分子之一[11-13]。

本次研究發(fā)現(xiàn)，CK20在宮頸癌患者外周血中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于宮頸癌良性腫瘤組織對(duì)照組，進(jìn)行的臨床特征比較說明CK20與宮頸癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度有一定相關(guān)性。對(duì)化療敏感組和不敏感組的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，化療不敏感組CK20表達(dá)強(qiáng)度明顯高于化療敏感組，CK20的高表達(dá)會(huì)導(dǎo)致化療敏感性降低[14-15]。研究發(fā)現(xiàn)，僅上皮細(xì)胞可以釋放角蛋白，在正常組織上皮細(xì)胞、上皮源性癌細(xì)胞和轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞中都有細(xì)胞角蛋白的表達(dá)，健康人外周血液種無(wú)細(xì)胞角蛋白的表達(dá)，而腫瘤患者外周血液種有細(xì)胞角蛋白的表達(dá)，角蛋白可以作為診斷腫瘤的一種方法[16-18]。更深入的研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度等與CK20均具有相關(guān)性。

綜上所述，CK20在宮頸癌組陽(yáng)性表達(dá)率較良性疾病組明顯升高，其與宮頸癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度有一定相關(guān)性，CK20的高表達(dá)會(huì)導(dǎo)致化療敏感性降低。

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