陳芳芬 楊澤妹 許愛玲 吳海莉

子宮肌瘤屬于一種性激素依賴性腫瘤，孕激素和雌激素與子宮肌瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切的關(guān)聯(lián)性[1]。一般情況下成人血管生成是正常癥狀，病理情況下異常血管生成導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生，包括腫瘤病理過程、腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等等[2]。VEGF作為人體重要的血管生長(zhǎng)因子在各種腫瘤發(fā)生和發(fā)展中有重要的作用，目前有關(guān)研究顯示VEGF在子宮肌瘤發(fā)病中作用較明顯[3]。本文主要通過正常肌層組織和子宮肌瘤發(fā)病的對(duì)比，研究VEGF在子宮肌瘤中的作用，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2015年5月至2016年10月期間在我院接受治療的60例子宮肌瘤患者，年齡35～56歲，平均年齡(45.36±3.45)歲；病史15天到12年，平均病程(5.78±2.63)年；病灶直徑3.8～10.5 mm，平均直徑(5.02±0.45)mm；單發(fā)32例，多發(fā)患者28例；40例肌壁間肌瘤,20例其他肌瘤。所有入選患者均沒有接受過藥物治療，患者沒有嚴(yán)重的肝腎疾病、慢性疾病、傳染性疾病等，術(shù)后根據(jù)患者子宮內(nèi)膜病理情況分析患者月經(jīng)周期的發(fā)生情況。

1.2 方法

1.2.1 收集標(biāo)本 對(duì)患者行子宮肌瘤手術(shù)后，從患者病理組織中取3 cm3左右新鮮肌瘤組織，取正常肌層組織做對(duì)比分析，而后利用生理鹽水清洗標(biāo)本，并將清洗后的標(biāo)本放入液氮中做冰凍儲(chǔ)存。

1.2.2 儀器和試劑 選購(gòu)Santa-Cruz公司生產(chǎn)的鼠抗人VEGF和VEGFR1、VEGFR2單抗；電泳、顯影及轉(zhuǎn)膜等常規(guī)配套設(shè)備選自Bio-Rad公司；PVDF膜選自Dupont公司；BCA蛋白定量試劑盒和HRP標(biāo)記二抗購(gòu)自上?？党缮镉邢薰?；酶標(biāo)儀可以選擇購(gòu)買Themo公司的儀器，而低溫高速離心機(jī)可以從Beckman公司選購(gòu)。

1.2.3 Westem blot檢測(cè) 對(duì)患者標(biāo)本實(shí)施檢測(cè)之前，首先取事先準(zhǔn)備好的100 mg液氮凍存的組織標(biāo)本，并對(duì)標(biāo)本實(shí)施剪碎處理，而后將其放入1×PBS緩沖液中實(shí)施洗滌處理，標(biāo)本的洗滌次數(shù)一般為2次，洗滌完畢后可以加入1 ml總蛋白質(zhì)提取液，將液體搖勻后可以放入冰浴中實(shí)施30 min的振搖處理。而后對(duì)溶液實(shí)施離心處理。離心處理需要在低溫高速離心機(jī)下實(shí)施，離心處理環(huán)境為：4 ℃，離心速率：15 000 r/min，離心時(shí)間：20 min。而后可以將離心處理后的上清液稀釋出來，將其放入-30 ℃環(huán)境中保存；取50 μg總蛋白樣品液實(shí)施DSD-PAGE電泳處理，電鍍處理完畢后對(duì)溶液實(shí)施轉(zhuǎn)膜處理，而后做封閉處理，封閉后可以實(shí)施一抗、二抗處理。對(duì)PVDF膜實(shí)施處理的過程中采用KCTM顯色處理，而后將檢測(cè)的結(jié)果曝光在X膠片上，同時(shí)可以對(duì)樣本實(shí)施顯影、定影處理。處理完以上的步驟后可以對(duì)內(nèi)參照鼠抗GAPDH單抗(1∶5000)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本次研究所有數(shù)據(jù)分析均采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用卡方值表示，t檢驗(yàn)，如果P<0.05，表示2組數(shù)據(jù)之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肌瘤組織和肌層組織中VEGF及其受體蛋白量表達(dá)

經(jīng)過一系列的分析，發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤組織中的VEGF及其受體蛋白均較正常子宮肌層高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

2.2 VEGF、VEGFR1、VEGFR2與月經(jīng)周期的關(guān)系分析

在子宮肌瘤組織中不管是分泌期還是增生期，患者的VEGF、VEGFR1、VEGFR2表達(dá)水平與正常肌層組織之間比較，均有明顯的差異性(P<0.05)，見表2。

2.3 VEGF VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)關(guān)系

經(jīng)過分析，發(fā)現(xiàn)患者子宮肌瘤組織中的VEGF、VEGFR1、VEGFR2表達(dá)水平和子宮肌瘤數(shù)量之間的關(guān)系呈現(xiàn)正比例關(guān)系，P<0.05；與子宮肌瘤體積、最大肌瘤直徑?jīng)]有明顯的關(guān)系，P>0.05；而VEGFR1與VEGF、VEGFR2沒有顯著的關(guān)系，P>0.05，見表3。

表1 肌瘤組織和肌層組織中VEGF及其受體蛋白量表達(dá)比較(±s)

表1 肌瘤組織和肌層組織中VEGF及其受體蛋白量表達(dá)比較(±s)

組織例數(shù)VEGFVEGFR1VEGFR2肌瘤組織600．75±0．300．45±0．130．75±0．40肌層組織600．15±0．060．36±0．150．31±0．21t值/15．1913．5127．544P值/0．0000．0010．000

表2 VEGF及其受體蛋白表達(dá)與月經(jīng)周期的關(guān)系(±s)

表2 VEGF及其受體蛋白表達(dá)與月經(jīng)周期的關(guān)系(±s)

組織增生期VEGFVEGFR1VEGFR2增生期VEGFVEGFR1VEGFR2肌瘤組織0．78±0．260．44±0．130．66±0．360．67±0．360．46±0．110．85±0．48肌層組織0．15±0．170．35±0．150．29±0．140．13±0．070．38±0．130．33±0．28t值15．7093．5127．42011．4053．6397．248P值0．0000．0010．0000．0000．0000．000

3 討論

子宮肌瘤是女性生殖系統(tǒng)比較常見的一種良性腫瘤，多發(fā)于30歲以上的婦女，發(fā)病機(jī)制尚不清晰[4]。臨床上一般采用手術(shù)切除治療，缺乏有效的非手術(shù)治療方法。所以臨床上子宮肌瘤的治療一般采用手術(shù)治療，但是手術(shù)創(chuàng)傷比較大，容易產(chǎn)生并發(fā)癥。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤的發(fā)生與飲食有一定的關(guān)系，而且患者可能存在免疫功能改變，比如NK細(xì)胞活動(dòng)比較低[5]。從遺傳性的角度分析，7號(hào)染色體長(zhǎng)壁的缺失與子宮肌瘤系統(tǒng)發(fā)生有明顯的關(guān)系。也有些學(xué)者認(rèn)為子宮肌瘤疾病與卵巢性激素依賴性表現(xiàn)，而且疾病與血管生成有重要的關(guān)聯(lián)性[6]。

表3 VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)關(guān)系(±s)

表3 VEGF、VEGFR1、VEGFR2蛋白表達(dá)關(guān)系(±s)

項(xiàng)目VEGFtPVEGFR1tPVEGFR2tP腫瘤數(shù)量/個(gè) ≥24．21±0．502．4000．0262．37±0．540．5570．2513．63±0．536．2840．036 <21．22±0．512．28±0．551．04±0．52體積/mm3 ≥300130．53±10．321．3090．315126．89±10．46-0．3660．542128．45±10．310．1230．525 <300120．64±10．63123．50±10．57125．56±10．20直徑/mm ≥57．35±1．541．0580．3557．11±1．380．1350．5416．97±1．50．0320．305 <56．86±1．556．42±1．596．58±1．29

VEGF是人體內(nèi)的一種比較特殊的血管內(nèi)皮生產(chǎn)因子，這種因子在人體內(nèi)可以分為多種類型結(jié)構(gòu)，而且能夠促進(jìn)血管生成。VEGFR在通常情況下屬于膜蛋白受體，在人體結(jié)構(gòu)組織中可以將VEGFR可以分為3種亞型，這3種亞型分別為VEGFR1、VEGFR2和VEGF,其中VEGFR1和VEGFR2相互結(jié)合發(fā)展相當(dāng)于EGF-A特異性結(jié)合，能夠發(fā)揮很多功能作用，比如他們聯(lián)合應(yīng)用能夠促進(jìn)人體內(nèi)皮細(xì)胞分裂增長(zhǎng)，另外還能夠有效促進(jìn)新生血管的形成，從而促進(jìn)人體血管通透性的提高[7]。一般情況下血管生長(zhǎng)是腫瘤發(fā)展的一個(gè)重要條件，同時(shí)也是促進(jìn)腫瘤發(fā)展的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。沈楊等[8]研究發(fā)現(xiàn)，沒有人體血液的供養(yǎng)，人體內(nèi)的實(shí)體血液供養(yǎng)僅僅只能限制在1～2 mm范圍內(nèi)。可見VEGF屬于人體比較重要的一個(gè)促進(jìn)因子，而且這種因子在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中也有重要的作用，從這個(gè)方面進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)VEGF在很多腫瘤組織血管生成中都有重要的表達(dá)作用[9]。VEGF在腫瘤細(xì)胞中的分泌形式也不同，包含2種分泌形式，分布為自分泌和旁分泌，子宮肌瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展也能夠促進(jìn)血液供應(yīng)，同時(shí)也能夠促進(jìn)局部血管的生長(zhǎng)和發(fā)展。

我國(guó)臨床中研究VEGF及其受體在子宮疾病中作用報(bào)道并不多，有關(guān)專家研究發(fā)現(xiàn)[10]，人體血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖指數(shù)在正常人體組織和子宮肌瘤患者的病理組織中有更高的表達(dá)。另外，有關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)20例子宮肌瘤組織中有16例患者肌瘤組織中VEGF表達(dá)明顯升高，而身體其他部位的正常組織VEGF表達(dá)并不明顯。Dai等[11]研究發(fā)現(xiàn)，與其他零星發(fā)病家族比較肌瘤組織中的VEGF的表達(dá)率比發(fā)病率較高的子宮肌瘤家庭患者中的表達(dá)率要高很多，前者表達(dá)率是28.0%，后者表達(dá)率為64.0%。本次研究結(jié)果顯示VEGF蛋白表達(dá)水平在肌瘤中的基層值中表達(dá)高很多，而且不會(huì)受患者月經(jīng)周期變化的影響。這個(gè)結(jié)果說明VEGF高表達(dá)在人體中的變化具有持續(xù)性特點(diǎn)，而且這種高表達(dá)和月經(jīng)周期并沒有太大的關(guān)聯(lián)性。這個(gè)研究結(jié)果還說明VEGF表達(dá)量和肌瘤數(shù)量之間的關(guān)系為正比例關(guān)系，說明VEGF與子宮肌瘤病變程度之間有內(nèi)在聯(lián)系性。Scharpfeneeker等[12]在子宮肌瘤組織中檢測(cè)出VEGFR1、 VEGFR2 的表達(dá)率分別為80%、33.3%。

本次研究結(jié)果顯示VEGFR1、VEGFR2在正常組織中的表達(dá)比較低，而在肌瘤組織中的表達(dá)比較高，說明VEGFR在肌瘤組織中受到機(jī)制調(diào)控的影響比較大，同時(shí)也說明了VEGFR與VEGF的表達(dá)增強(qiáng)是相對(duì)應(yīng)的關(guān)系，所以說VEGFR同樣對(duì)肌瘤的發(fā)病有重要的參與作用[13]。在月經(jīng)周期中VEGF受體不管是在增生期還是在分泌期表達(dá)水平明顯高于正常肌層組織。在研究的過程中我們看到VEGF受體在肌瘤組織中表達(dá)比較高，而且VEGFR2表達(dá)水平明顯高于VEGFR1，說明VEGFR2在肌瘤組織中的表達(dá)比較活躍，從這個(gè)方面來看VEGFR2表達(dá)水平與子宮肌瘤病變之間聯(lián)系更加緊密。

綜上所述，VEGF及其受體對(duì)子宮肌瘤血管生成均發(fā)揮著重要的作用，表現(xiàn)為VEGF及其受體在子宮肌瘤組織中有明顯的高表達(dá)。所以，在子宮肌瘤的治療中如果能夠研制出VEGF及其受體蛋白拮抗劑，就能夠很好地起到干擾子宮肌瘤的作用，促使子宮肌瘤逐漸萎縮和消亡，有效提高子宮肌瘤治療效果。

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