張秀平，蔡 偉，姚 泓，張加余，王子健，盧建秋，劉 穎

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102；2.湖南醫(yī)藥學(xué)院侗醫(yī)藥研究湖南省重點實驗室，湖南 懷化 418000；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，北京 100029；4.北京中醫(yī)藥大學(xué)圖書館，北京 100029)

苦碟子為菊科苦荬菜屬抱莖苦荬菜Ixerissonchifolia(Bunge) Hance的全草[1]，具有清熱、涼血活血、消腫排膿[2-3]等功效。倍半萜內(nèi)酯類化合物為苦碟子的主要有效成分之一[4-6]，廣泛存在于菊科、八角科及木蘭科等植物中[7-9]，具有抗氧化、抗炎、抗菌及抗腫瘤等活性[10-12]。其中，苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z為苦碟子中2種主要的倍半萜內(nèi)酯類成分。

在早期的藥物-藥物相互作用確定中，體外肝微粒體孵育體系是研究藥物代謝的重要模型。近年來，有學(xué)者[15-17]通過研究次烏頭堿、馬兜鈴酸Ⅰ、馬兜鈴酸Ⅱ和補骨脂二氫黃酮甲醚等在大鼠肝微粒體中的代謝過程，推測各成分及其代謝產(chǎn)物對機體發(fā)揮作用的機理機制，對探究其在肝微粒體中的代謝規(guī)律具有重要的參考價值。

本研究擬采用大鼠肝微粒體體外孵育模型，利用超高效液相色譜-線性離子阱靜電軌道場質(zhì)譜(UHPLC-LTQ-Orbitrap MS)技術(shù)在負(fù)離子模式下研究苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z在大鼠肝微粒體中的代謝產(chǎn)物，以完善苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的代謝規(guī)律。

1 實驗部分

1.1 儀器與裝置

Accela600 pump高效液相色譜儀與LTQ-Orbitrap XL質(zhì)譜儀：美國Thermo Scientific公司產(chǎn)品，配有電噴霧離子源(ESI)，Xcalibur2.1工作站；R200D型電子分析天平(十萬分之一)：德國Sartorius公司產(chǎn)品；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；TGL20M型高速冷凍離心機：長沙湘智志離心機儀器有限公司產(chǎn)品；TTM-1型旋渦混合器：日本SIBATA公司產(chǎn)品；Millipore Synergy UV型超純水機：美國Millipore公司產(chǎn)品；DY89-1型電動玻璃勻漿機：寧波新芝科器研究所產(chǎn)品；超高速離心機：日本日立公司產(chǎn)品；SIM-F124制冰機：日本SANYO Electric公司產(chǎn)品；FRESCO 21微量離心機、-80 ℃超低溫冷凍儲藏箱：美國Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)品。

1.2 材料與試劑

苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z：由本實驗室從苦碟子藥材中分離得到，通過1H-NMR、13C-NMR和MS等鑒定結(jié)構(gòu)并與文獻[18]數(shù)據(jù)對照，采用HPLC面積歸一化法測定其純度均大于98%；苦碟子注射液(批號141209，規(guī)格為10 mL)：吉林通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn)品，憑處方購自北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院；甲醇和乙腈：均為質(zhì)譜級，美國Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)品；超純水：由Millipore Synergy UV型超純水機制備；其他試劑均為分析純。

1.3 實驗動物

6只SD大鼠(許可證號：SCXK(京)2012-0001，體質(zhì)量(200±20) g)：購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)屏障環(huán)境實驗動物室(溫度(24±2) ℃，濕度(70±5)%)。

1.4 溶液的配制

供試品溶液的配制：精密稱取適量的苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的對照品，用甲醇溶解并配制成濃度分別為1.12、1.09 g/L的對照品溶液。

磷酸鹽緩沖液的配制：精密稱取13.6 g KH2PO4，用超純水溶解，制得1 mol/L KH2PO4溶液；稱取22.8 g K2HPO4·3H2O，用超純水溶解，制得1 mol/L K2HPO4溶液；精密移取8.02 mL 1 mol/L K2HPO4和1.98 mL 1 mol/L KH2PO4，用超純水稀釋并配制成0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液。

還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的配制：精密稱取適量的NADPH，用磷酸鹽緩沖液配制成濃度為10 mmol/L的溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

MgCl2溶液的配制：精密稱取適量的MgCl2，用磷酸鹽緩沖液配制成濃度為50 mmol/L的溶液。

1.5 大鼠肝微粒體的制備

大鼠肝微粒體的制備參見文獻[19]。大鼠禁食不禁水12 h后，股動脈放血處死，迅速剪開腹腔，經(jīng)肝門靜脈小心插入細(xì)塑料管，通過螺動泵用4 ℃的0.9%生理鹽水灌洗肝臟。剪開心臟便于液體流出，同時小心按壓肝臟便于生理鹽水流過，持續(xù)灌洗肝臟至土黃色，取出肝臟。用4 ℃的0.9%生理鹽水沖洗新鮮的肝臟，濾紙擦干并稱質(zhì)量、剪碎。加入Tris-HCl緩沖液(1∶4，V/V)，冰浴中制成肝勻漿。在4 ℃，以7 700 r/min離心20 min，取出上清液并轉(zhuǎn)移至超速離心管中，以25 000 r/min離心60 min，棄去上清液，沉淀即為大鼠肝微粒體。將微粒體重懸于Tris-HCl中(按初始勻漿時每克肝組織加入1 mL)，均勻分散后分裝于EP管中，于-80 ℃保存。以小牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品，采用BCA試劑盒法測定微粒體蛋白含量[20]。

1.6 大鼠肝微粒體混合酶孵化反應(yīng)體系

微粒體孵化體系的實驗總反應(yīng)體積為1 mL。實驗分為空白組(不含苦荬菜內(nèi)酯Z和11，13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z)和不同濃度實驗組(苦荬菜內(nèi)酯Z或11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的濃度均為100、50、10、1 mg/L)。分別將苦荬菜內(nèi)酯Z、11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z置于EP管中，氮氣吹干后，依次加入pH 7.4的0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液、50 mmol/L MgCl2和蛋白濃度為0.5 g/L的肝微粒體。孵化體系在37 ℃水浴中預(yù)孵育5 min，分別加入100 μL 10 mmol/L NADPH后，啟動反應(yīng)。在5、10、15、30、45、60、120、240、360、480 min時，每次取100 μL系統(tǒng)體積，并加入200 μL冰冷乙腈終止反應(yīng)。在4 ℃下，以15 000 r/min離心10 min，取上清液，待分析。所有樣品平行制備3份。

1.7 實驗條件

1.7.1色譜條件 色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm×1.7 μm)；柱溫35 ℃；流動相：0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)；梯度洗脫條件：0～2 min(95%A)，2～3 min(95%～92%A)，3～8 min(92%～88% A)，8～18 min(88%～85%A)，18～18.1 min(85%～20%A)，18.1～23 min(20%A)，23～23.1 min(20%～95%A)，23.1～25 min(95%A)；進樣體積2 μL；流速0.3 mL/min。

1.7.2質(zhì)譜條件 ESI離子源，負(fù)離子檢測模式；毛細(xì)管電壓35 V；噴霧電壓3.0 kV；毛細(xì)管溫度350 ℃；鞘氣流速30個單位，輔助氣流速10個單位；源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)裂解池碰撞能量(CID)35%。樣品采用高分辨全掃描(Full scan，F(xiàn)S)，一級掃描分辨率30 000，二級掃描分辨率15 000，質(zhì)量掃描范圍m/z100～1 000。

1.8 數(shù)據(jù)處理

利用Xcaliber2.1工作站進行數(shù)據(jù)處理，采用分子式預(yù)測模塊預(yù)測所有母離子和碎片離子的分子式，相關(guān)參數(shù)設(shè)定為C[0—35]、H[0—50]、O[0—15]、S[0—1]、N[0—3]，環(huán)和不飽和雙鍵數(shù)(RDB equivalent value)[0—15]。由于在該屬植物的化學(xué)成分中未見P、Cl以及Br等元素的報道，因此在分子式預(yù)測時未考慮這些離子，質(zhì)量精度誤差在5×10-6以內(nèi)。

2 結(jié)果與討論

2.1 苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z檢測條件的優(yōu)化及其裂解規(guī)律推斷

本研究考察了不同比例的甲酸作為流動相改性劑對色譜-質(zhì)譜分析的影響，結(jié)果表明，采用0.1%甲酸可獲得良好的倍半萜內(nèi)酯色譜峰形和質(zhì)譜信號響應(yīng)。

苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z在負(fù)離子檢測模式下產(chǎn)生的碎片離子種類和強度優(yōu)于正離子檢測模式[21-22]。在負(fù)離子模式下，苦荬菜內(nèi)酯Z的準(zhǔn)分子離子峰為[M—H]-m/z421.150 3，經(jīng)CID碰撞裂解，母離子丟失C3位上的糖基，形成基峰[M—H—Glu]-m/z259.097 3，此外還形成碎片離子m/z377.161 2(—CO2)、m/z241.086 9(—C6H10O5—H2O)、m/z226.063 5(—C6H10O5—H2O—CH3)、m/z215.107 6(—C6H10O5—CO2)和m/z197.097 0(—C6H10O5—CO2—H2O)；11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的準(zhǔn)分子離子峰為[M—H]-m/z423.166 6，經(jīng)CID碰撞裂解，母離子丟失C3位上的糖基，形成基峰[M—H—Glu]-m/z261.113 3，此外還形成碎片離子m/z379.176 0(—CO2)、m/z217.123 3(—C6H10O5—CO2)、m/z199.112 7(—C6H10O5—CO2—H2O)和m/z187.076 2(—C6H10O5—CO2—2CH3)，其裂解途徑示于圖1。

2.2 苦荬菜內(nèi)酯Z的代謝產(chǎn)物分析與鑒定

根據(jù)精確分子質(zhì)量數(shù)據(jù)推測可能的元素組成，并結(jié)合質(zhì)譜裂解碎片信息，從苦荬菜內(nèi)酯Z孵育樣品中共篩選并鑒定出1個原型和12個代謝產(chǎn)物，離子流圖示于圖2，代謝產(chǎn)物信息列于表1。

代謝產(chǎn)物1和4的保留時間分別為5.02、6.42 min，準(zhǔn)分子離子峰分別為[M—H]-m/z542.168 9(-0.1×10-6，C24H32O11NS)、m/z542.168 5(-1.1×10-6，C24H32O11NS)。經(jīng)CID裂解，發(fā)生了121 u的特征性中性丟失，從而產(chǎn)生m/z421碎片離子峰，說明代謝產(chǎn)物1和4可能是苦荬菜內(nèi)酯Z的半胱氨酸結(jié)合產(chǎn)物。由于苦荬菜內(nèi)酯Z結(jié)構(gòu)中C11～C13位存在雙鍵，因此推測代謝產(chǎn)物1和4為13-半胱氨酸苦荬菜內(nèi)酯Z或其同分異構(gòu)體。

代謝產(chǎn)物2、5和12的保留時間分別為6.18、6.94、9.47 min，準(zhǔn)分子離子峰分別為m/z437.144 2(0.0，C21H25O10)，m/z437.144 0(-0.4×10-6，C21H25O10)和m/z437.144 2(0.0，C21H25O10)，比苦荬菜內(nèi)酯Z的準(zhǔn)分子離子峰多16 u。在二級質(zhì)譜中，產(chǎn)生了m/z275[M—H—Glu]-的特征性苷元離子，說明代謝產(chǎn)物2、5和12中存在葡萄糖配基。苷元離子繼續(xù)丟失1分子CO2形成m/z231離子，根據(jù)文獻[21]，推測此為倍半萜內(nèi)酯類化合物的質(zhì)譜裂解特征。結(jié)合分子式，推測苷元發(fā)生了氧化反應(yīng)，因此，代謝產(chǎn)物2、5和12為苦荬菜內(nèi)酯Z的羥基化產(chǎn)物。

圖1 苦荬菜內(nèi)酯Z(a)和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z(b)可能的裂解規(guī)律Fig.1 Fragmentation pathways of Ixerin Z (a) and 11,13α-dihydroixerin Z (b)

圖2 苦荬菜內(nèi)酯Z經(jīng)肝微粒體代謝產(chǎn)物的提取離子流圖Fig.2 Extracted ion chromatogram of Ixerin Z in liver microsomal samples

代謝產(chǎn)物8、14和15的保留時間分別為8.15、9.85和10.81 min，其準(zhǔn)分子離子峰分別為m/z439.160 0(0.3×10-6，C21H27O10)，m/z439.160 1(0.6×10-6，C21H27O10)，m/z439.160 1(0.6×10-6，C21H27O10)，比苦荬菜內(nèi)酯Z多18 u。產(chǎn)生了二級碎片離子m/z277[M—H—Glu]-，表明存在葡萄糖配基。根據(jù)文獻[22]，推測苷元上發(fā)生氧化還原反應(yīng)，代謝產(chǎn)物8、14和15為11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的羥基化產(chǎn)物。

代謝產(chǎn)物7和9的保留時間分別為7.73、8.37 min，準(zhǔn)分子離子峰均為m/z728.23(C31H42O15N3S)，比苦荬菜內(nèi)酯Z多307 u，表明存在谷胱甘肽配基。在二級質(zhì)譜圖中，均出現(xiàn)了m/z306.074 8碎片離子。因此，推測代謝產(chǎn)物7和9為苦荬菜內(nèi)酯Z的谷胱甘肽結(jié)合物。

表1 UHPLC-LTQ/Orbitrap MS檢測苦荬菜內(nèi)酯Z的肝微粒體代謝產(chǎn)物表征Table 1 Characteristic fragment ions of Ixerin Z metabolites in rat liver microsomes by UHPLC-LTQ/Orbitrap MS

注：“+” 表示檢出，“-” 表示未檢出

代謝產(chǎn)物17和18的保留時間分別為14.85、16.83 min，其碎片離子和保留時間都與苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z對照品一致。因此，推測代謝產(chǎn)物17和18分別為苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z。

2.3 11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的代謝產(chǎn)物分析與鑒定

根據(jù)精確分子質(zhì)量數(shù)據(jù)，結(jié)合質(zhì)譜裂解碎片信息，在11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z孵育樣品中共篩選并鑒定出1個原型化合物和11個代謝產(chǎn)物，提取離子流圖示于圖3，各代謝產(chǎn)物質(zhì)譜數(shù)據(jù)列于表2。

圖3 11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z經(jīng)肝微粒體代謝產(chǎn)物的提取離子流圖Fig.3 Extracted ion chromatogram of 11,13α-dihydroixerin Z in liver microsomal samples

峰號No．保留時間tR/min理論質(zhì)荷比Theoreticalvalue(m/z)實驗質(zhì)荷比Experimentalvalue(m/z)誤差Error/10-6化學(xué)式Formula[M—H]-11，13α?二氫苦荬菜內(nèi)酯Z11，13α?DihydroixerinZ/(mg/L)10050101串聯(lián)質(zhì)譜MS/MS鑒定/反應(yīng)Identification/Reactions36 24439 1599439 1598-0 3C21H27O10+++-MS2[439]：215(100)，277(43)，233(30)羥基化反應(yīng)67 52441 1755441 1754-0 2C21H29O10+++-MS2[441]：279 1238(100)，423 1659(30)，261(24)，261(28)，199(10)羥基化反應(yīng)和加氫反應(yīng)77 73728 2331728 2321-1 5C31H42O15N3S+++-MS2[728]：306 0748(100)谷胱甘肽共軛88 15439 1599439 160 3C21H27O10++--MS2[439]：277(100)，233(30)，215(8)羥基化反應(yīng)108 49439 1599439 160 3C21H27O10+++-MS2[439]：215(100)，233(57)，277(55)羥基化反應(yīng)118 76441 1755441 17580 5C21H29O10+---MS2[441]：279(100)，235(21)，261(19)羥基化反應(yīng)和加氫反應(yīng)

續(xù)表2

注：“+” 表示檢出，“-” 表示未檢出

代謝產(chǎn)物3、8、10、13、14、15的保留時間分別為6.24、8.15、8.49、9.58、9.85、10.81 min，它們的準(zhǔn)分子離子峰分別為[M—H]-m/z439.159 9(-0.3×10-6，C21H27O10)、439.159 9(0.3×10-6，C21H27O10)、439.159 9(0.3×10-6，C21H27O10)、439.159 9(0.6×10-6，C21H27O10)、439.159 9(0.6×10-6，C21H27O10)和439.159 9(0.6×10-6，C21H27O10)，比11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z多16 u。經(jīng)CID裂解，丟失162 u的中性基因，產(chǎn)生了m/z277(C15H17O5)的二級碎片離子，說明存在葡萄糖基團。因此，推測化合物3、8、10、13、14和15為11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的羥基化產(chǎn)物。

代謝產(chǎn)物6和11的保留時間分別為7.52、8.78 min，準(zhǔn)分子離子峰為m/z441.175 4(-0.2×10-6，C21H29O10)和441.175 8(0.5×10-6，C21H29O10)，比11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z多18 u，表明產(chǎn)物中有H2O結(jié)構(gòu)。根據(jù)二級碎片信息可知，其子離子碎片均有m/z279(C15H19O5)，比母離子少162 u，推測產(chǎn)物中含有葡萄糖基團，化合物6和11分別為11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z羥基化和氫化反應(yīng)的同分異構(gòu)體產(chǎn)物。

代謝產(chǎn)物12的保留時間為9.47 min，準(zhǔn)分子離子峰為m/z437.144 2(0.0，C21H25O10)，比11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z多14 u。二級碎片顯示存在m/z275、231離子，表明11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z分別失去了C6H10O5(162 u)和C6H10O5+CO2(206 u)中性碎片。因此，化合物12可能為11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z脫氫和羥基化產(chǎn)物。

代謝產(chǎn)物7的保留時間為7.73 min，準(zhǔn)分子離子峰為m/z728.23(C31H42O15N3S)，比11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z多306 u，并且產(chǎn)生了m/z306.074 8(-2.4×10-6，C10H16N3O6S)碎片離子。因此，推測化合物7為11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的谷胱甘肽結(jié)合物。

代謝產(chǎn)物17和18的保留時間分別為14.85、16.83 min，其質(zhì)譜碎片離子和保留時間均與苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z一致。因此，推測化合物17和18分別為苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z。

2.4 代謝途徑分析

根據(jù)原型化合物及代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜裂解信息，推測苦荬菜內(nèi)酯Z及11，13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的代謝途徑示于圖4。

圖4 苦荬菜內(nèi)酯Z(a)、11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z(b)經(jīng)大鼠肝微粒體的代謝途徑Fig.4 Metabolic pathways of Ixerin Z (a) and 11,13α-dihydroixerin Z (b) in liver microsomal samples

苦荬菜內(nèi)酯Z體外主要經(jīng)歷2個代謝途徑：1) 苦荬菜內(nèi)酯Z發(fā)生羥基化反應(yīng)生成化合物2、5和12；苦荬菜內(nèi)酯Z的C11、C13位上雙鍵發(fā)生加氫反應(yīng)生成11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z(化合物18)，然后發(fā)生羥基化反應(yīng)生成化合物8、14和15。2) 苦荬菜內(nèi)酯Z發(fā)生加成反應(yīng)，如半胱氨酸結(jié)合產(chǎn)物(化合物1和4)，谷胱甘肽結(jié)合產(chǎn)物(化合物7和9)。

11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z體外主要經(jīng)歷2個代謝途徑：1) 11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z的C11、C13位上的單鍵發(fā)生去氫反應(yīng)生成苦荬菜內(nèi)酯Z(化合物17)，隨后又發(fā)生羥基化反應(yīng)產(chǎn)生化合物12；11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z通過羥基化反應(yīng)生成化合物3、8、10、13、14和15，隨后又發(fā)生加氫反應(yīng)產(chǎn)生化合物6和11。2) 11，13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z與谷胱甘肽發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，生成化合物7。谷胱甘肽結(jié)合反應(yīng)通常屬于II相代謝反應(yīng)，而在體外代謝研究中檢測到了此類代謝產(chǎn)物，可能是由于此類反應(yīng)也可以在沒有相關(guān)代謝酶的情況下自發(fā)進行[23]，或者是由于苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z中的環(huán)氧結(jié)構(gòu)可與谷胱甘肽發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。通常認(rèn)為，谷胱甘肽結(jié)合反應(yīng)為機體的解毒反應(yīng)，推測一定劑量的11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z可能具有毒性。

3 結(jié)論

本研究應(yīng)用UHPLC-LTQ/Orbitrap高分辨質(zhì)譜技術(shù)快速篩選并鑒定了苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z經(jīng)大鼠肝微粒體體外代謝的產(chǎn)物。通過分析各代謝產(chǎn)物的色譜保留時間、高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)及碎片離子信息，共篩選出18個化合物(包括2個原型化合物和16個代謝產(chǎn)物)，對其中15個代謝產(chǎn)物進行了初步鑒別，并闡述了苦碟子中2種主要的倍半萜內(nèi)酯類成分(苦荬菜內(nèi)酯Z和11,13α-二氫苦荬菜內(nèi)酯Z)的肝微粒體代謝規(guī)律。該結(jié)果可為早期新藥開發(fā)、評價新藥候選物的代謝行為提供借鑒。

參考文獻：

[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué). 中藥大辭典[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006: 1 783.

[2] 楊嘉頤，王少杰，白文，等. 苦碟子注射液治療缺血性腦血管病的研究進展[J]. 北京中醫(yī)藥，2010,29(7):566-568.

YANG Jiayi, WANG Shaojie, BAI Wen, et al. Research progress of Kudiezi injection for treatment of ischemic cerebrovascular disease[J]. Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine, 2010, 29(7): 566-568(in Chinese).

[3] 吳晶晶，李天祥，李慶和，等. 抱莖苦荬菜化學(xué)成分和藥理作用的研究進展[J]. 天津中醫(yī)藥，2015,32(4):247-252.

WU Jingjing, LI Tianxiang, LI Qinghe, et al. Research progress on chemical constituents ofIxerissonchifolia(Bge.) Hance and their pharmacological effects[J]. Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine, 2015, 32(4): 247-252(in Chinese).

[4] 劉穎，盧建秋，張加余，等. 苦碟子藥材及其注射液中化學(xué)成分的HPLC-ESI-MSn分析[J]. 中國中藥雜志，2013, 16(38): 2 675-2 681.

LIU Ying, LU Jianqiu, ZHANG Jiayu, et al. Identification of chemical component fromIxerissonchifoliaand its injection by HPLC-ESI-MSn[J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2013, 16(38): 2 675-2 681(in Chinese).

[5] SUH J, JO Y, KIM N D, et al. Cytotoxic constituents of the leaves ofIxerissonchifolia[J]. Arch Pharm Res, 2002, 25(3): 289-292.

[6] ZHANG Y C, ZHOU L, NG K Y. Sesquiterpene lactones fromIxerissonchifoliaHance and their cytotoxicities on A549 human non-small cell lung cancer cells[J]. J Asian Nat Prod Res, 2009, 11(4): 294-298.

[7] 劉清華，楊峻山，索茂榮. 斑鳩菊屬的倍半萜內(nèi)酯類及甾體皂苷類化學(xué)成分及藥理活性研究進展[J]. 中國中藥雜志，2007,32(1):10-17.

LIU Qinghua, YANG Junshan, SUO Maorong. Analysis of and counter measures against traditional Chinese medicines adulterated by synthetic drugs[J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2007, 32(1): 10-17(in Chinese).

[8] 胡巖，段天璇，曹楓，等. 八角科植物果皮化學(xué)成分的LC-MS圖譜特征及其在分類和藥材鑒別上的意義[J]. 中國中藥雜志，2010,35(14):1 836-1 839.

HU Yan, DUAN Tianxuan, CAO Feng, et al. Evaluation of LC-MS chromatograms of pericarps from Illium species[J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2010, 35(14): 1 836-1 839(in Chinese).

[9] 楊茜. 金沸草含量測定以及倍半萜內(nèi)酯類成分的藥動學(xué)研究[D]. 上海：第二軍醫(yī)大學(xué)，2012.

[10] 左愛學(xué)，饒高雄. 地膽草的化學(xué)成分和藥理作用研究進展[J]. 中國藥業(yè)，2014,23(17):3-7.

ZUO Aixue, RAO Gaoxiong. Research progress on chemical constituents ofElephantopusScaberLinn. and their pharmacological effects[J]. China Pharmaceuticals, 2014, 23(17): 3-7(in Chinese).

[11] 謝沈陽，楊曉源，丁章貴，等. 蒲公英的化學(xué)成份及其藥理作用[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012,24(S1):141-151.

XIE Shenyang, YANG Xiaoyuan, DING Zhanggui, et al. Chemical constituents and pharmacological effects ofTaraxacummongolicumHand-Mazz[J]. Natural Product Research and Development, 2012, 24(S1): 141-151(in Chinese).

[12] 代英輝，崔征，李建林. 蒼耳屬植物化學(xué)成分及藥理作用研究進展[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2006,24(8):541-546.

DAI Yinghui, CUI Zheng, LI Jianlin. Research progress in the chemical constituents and pharmacological activities ofXanthiumL.[J]. Journal of Shenyang Pharmaceutical University, 2006, 24(8): 541-546(in Chinese).

[13] 林妮妮. 基于肝微粒體的T-2毒素體外代謝研究[D]. 北京：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2013.

[14] 劉高峰，郭興蕾. 中藥對細(xì)胞色素P450調(diào)控作用的研究進展[J]. 中草藥，2008,39(1):139-143.

LIU Gaofeng, GUO Xinglei. Advances in studies on regulation of Chinese materia medica on cytochrome P450 system[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2008, 39(1): 139-143(in Chinese).

[15] 畢云楓，李雪，皮子鳳，等. UPLC-MS/MS方法研究次烏頭堿在大鼠肝微粒體CYP450中的體外代謝產(chǎn)物及代謝酶亞型[J]. 質(zhì)譜學(xué)報，2013,34(6):330-337.

BI Yunfeng, LI Xue, PI Zifeng, et al. Analysis of hypaconitine’s metabolites and related metabolic CYP isoforms in rat liver microsomal by UPLC-MS/MS[J]. Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, 2013, 34(6): 330-337(in Chinese).

[16] 周慧，付佳，蔡宗葦. 基于HPLC-MS/MS法研究馬兜鈴酸Ⅰ和馬兜鈴酸Ⅱ的大鼠肝微粒體酶S9體外代謝[J]. 質(zhì)譜學(xué)報，2017,38(1):30-36.

ZHOU Hui, FU Jia, CAI Zongwei. Research of aristolochic acidⅠ, aristolochic acid Ⅱ and their metabolites in rat liver microsomes using HPLC-MS/MS[J]. Journal of Chinese Mass Spectrometry Society, 2017, 38(1): 30-36(in Chinese).

[17] FAN X, DU G, MA S, et al. Structural elucidation of in vitro metabolites of bavachinin in rat liver microsomes by LC-ESI-MSnand chemical synthesis[J]. Xenobiotica, 2016, 46(4): 296-306.

[18] CAI W, ZHANG J Y, LI G L, et al. Isolation and purification of sesquiterpene lactones fromIxerissonchifolia(Bunge) Hance by high-speed countercurrent chromatography and semi-preparative high performance liquid chromatography[J]. Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 2014, 13(12): 2 065-2 069.

[19] 魏偉，吳希美，李元建. 藥理實驗方法學(xué)[M]. 4版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2010:184-185.

[20] 簡暾昱，徐帆，廖春龍，等. 3種方法測定大鼠肝微粒體蛋白含量的比較[J]. 中國藥師，2011,14(3):342-345.

JIAN Tunyu, XU Fan, LIAO Chunlong, et al. Comparison of three methods for determining rat liver microsomal protein content[J]. China Pharmacist, 2011, 14(3): 342-345(in Chinese).

[21] 王放. 基于LC-HR-MSn的苦碟子及血栓通注射劑化學(xué)成分研究[D]. 北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

[22] 蔡偉. 苦碟子倍半萜內(nèi)酯類似物靶向分離及體內(nèi)代謝研究[D]. 北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

[23] 曾蘇. 藥物代謝學(xué)[M]. 杭州：浙江大學(xué)出版社，2008.