劉 丹，徐 敏，李 杰，顏 彥

(貴州省遵義市第一人民醫(yī)院心血管內(nèi)科 563000)

冠心病(coronary heart disease，CHD)是最常見(jiàn)的心臟病之一，患病率為0.15%，易感人群為45歲以上的男性和55歲以上或者絕經(jīng)期的婦女，近年來(lái)，中老年人罹患CHD的概率越來(lái)越高[1-2]。CHD是由外界環(huán)境和炎癥因子等遺傳因素相互作用而引起的慢性炎癥疾病[3]。各種炎癥反應(yīng)在多種急慢性炎癥疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)和C反應(yīng)蛋白(CRP)是非常關(guān)鍵的兩個(gè)炎癥因子，MCP-1促進(jìn)慢性炎癥反應(yīng)，CRP促進(jìn)急性炎癥反應(yīng)，在CHD的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中至關(guān)重要[4-7]。MCP-1是一種單核細(xì)胞趨化蛋白，屬于β亞家族趨化因子，在內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和心肌細(xì)胞上高表達(dá)，在急性炎癥條件下能夠促使血液中的單核-巨噬細(xì)胞聚集到損傷的內(nèi)皮下間隙并活化成巨噬細(xì)胞，刺激巨噬細(xì)胞不斷吞噬類(lèi)脂質(zhì)并分化為形成富含膽固醇酯的泡沫細(xì)胞，MCP-1可促進(jìn)多種炎癥因子的產(chǎn)生并形成級(jí)聯(lián)炎癥反應(yīng)，使內(nèi)皮從抗凝-抗黏附狀態(tài)轉(zhuǎn)化為促凝-易黏附狀態(tài)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，使CHD惡化[5]；CRP是一種由肝臟合成的非特異性急性期炎癥反應(yīng)標(biāo)志物，可激活經(jīng)典的補(bǔ)體途徑，增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬作用，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞或單核-巨噬系統(tǒng)功能，促進(jìn)巨噬細(xì)胞組織因子的生成[8]。目前，血清MCP-1和CRP濃度與CHD臨床癥狀的相關(guān)性還有待進(jìn)一步研究,本研究的目的在于探討血清MCP-1和CRP于CHD臨床癥狀的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2014年1月至2016年1月，收集本院共200例老年CHD患者作為觀察組，其中，男120例，女80例，平均(65.10±8.75)歲；納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡大于60歲；有典型的心絞痛癥狀且經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診為CHD；既往無(wú)經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)和冠狀動(dòng)脈搭橋手術(shù)史；心功能為KILLIP分級(jí)1～2級(jí)；愿意參加本研究，簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他心臟病患者，如先天性心臟病、嚴(yán)重瓣膜病、擴(kuò)張型心肌病、肥厚性心臟病、風(fēng)濕性心臟病等； 合并嚴(yán)重的器官衰竭性疾病，比如腎衰竭(血肌酐大于或等于25 mg/L)、嚴(yán)重心功能不全(左心室射血分?jǐn)?shù)小于30%)、器官功能下降性疾病、嚴(yán)重鈣化疾病等；合并腦血管疾病或其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病者； 合并甲狀腺功能亢進(jìn)及嚴(yán)重結(jié)締組織病者； 合并感染、腫瘤、血液系統(tǒng)或免疫系統(tǒng)疾病者； 存在影響hs-CRP水平的其他疾病或因素的患者；近期手術(shù)、創(chuàng)傷者。對(duì)照組為200例冠狀動(dòng)脈造影正常的健康老人，男110例，女90例，平均(66.52±7.55)歲。觀察組和對(duì)照組老人的基本臨床特征比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究通過(guò)本院倫理委員會(huì)審批，所有患者或其家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2方法

1.2.1采集血清樣本 冠狀動(dòng)脈造影術(shù)后，空腹時(shí)，采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管采集所有老年CHD患者和健康老人的肘靜脈血，共收集8 mL，4 ℃保存待測(cè)。

1.2.2血清MCP-1和CRP水平的測(cè)定 取已收集的4 mL外周血，2 000 r/min離心20 min分離血清，-80 ℃冰箱保存待測(cè)。采用MCP-1雙抗體夾心法ELISA試劑盒(美國(guó)R&D公司)檢測(cè)，采用CRP雙抗體夾心法ELISA試劑盒(美國(guó)R&D公司)檢測(cè)，操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，光密度值由DG5033A酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清中MCP-1和CRP的水平。

1.2.3分離外周血單核細(xì)胞 取4 mL外周血，密度梯度離心分離單核細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)細(xì)胞數(shù)量。

1.2.4RT-PCR檢測(cè) 以人MCP-1、CRP序列為模板，使用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)引物，并由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。使用Trizol提取單核細(xì)胞總RNA，RT-PCR檢測(cè)MCP-1和CRP的mRNA表達(dá)濃度。MCP上下游引物序列如下，PF:CCT TCT GTG CCT GCT GCT CA,PR:TCT TCG GAG TTT GGG TTT GC；CRP上下游引物序列如下，PF：ATT ACG CTA TCT AGC ATC TA，PR：CAT GAT GCA TGA CTA CTA CA。

2 結(jié) 果

2.1兩組對(duì)象CHD危險(xiǎn)因素比較 對(duì)照組和觀察組年齡、性別和舒張壓(DBP)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；但是兩組在體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、收縮壓(SBP)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、血漿纖維蛋白原(FBG)和吸煙史上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2兩組對(duì)象血清MCP-1、CRP檢測(cè)結(jié)果比較 觀察組患者血清MCP-1和CRP的水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3兩組對(duì)象外周血單核細(xì)胞中MCP-1和CRP mRNA水平比較 觀察組患者單核細(xì)胞內(nèi)MCP-1和CRP mRNA水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表1 兩組對(duì)象CHD危險(xiǎn)因素比較

2.4CHD患者單核細(xì)胞內(nèi)MCP-1和CRP mRNA 與血清MCP-1和CRP水平的相關(guān)性 CHD患者單核細(xì)胞內(nèi)MCP-1 mRNA水平與血清中MCP-1水平呈正相關(guān)(r=0.810,P<0.05)?；颊邌魏思?xì)胞內(nèi)CRP mRNA水平與血清中CRP水平呈正相關(guān)(r=0.791,P<0.05)。

表2 兩組對(duì)象血清MCP-1、CRP水平比較

表3 兩組對(duì)象單核細(xì)胞內(nèi)MCP-1和CRP mRNA水平比較

2.5CHD危險(xiǎn)因素與血清MCP-1和CRP水平的相關(guān)性分析 CHD患者的TG(r=0.760,P<0.05)和TC(r=0.793,P<0.05)與血清中MCP-1水平呈正相關(guān)。CHD患者的TG(r=0.781,P<0.05)和TC(r=0.839,P<0.05)與血清中CRP水平呈正相關(guān)。

3 討 論

CHD是冠狀動(dòng)脈血管發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化病變而引起血管腔狹窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或壞死而導(dǎo)致的心臟病，致死率很高且大多數(shù)是40歲以上的中老年人，已引起全世界的關(guān)注[8-9]。動(dòng)脈粥樣硬化是CHD最主要致病因素，“內(nèi)皮損傷反應(yīng)學(xué)說(shuō)”是公認(rèn)的CHD發(fā)病機(jī)制。由于機(jī)體脂質(zhì)(TG和TC等)代謝異常，血液中的脂質(zhì)黏附在動(dòng)脈內(nèi)膜上，形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，隨著炎癥反應(yīng)加劇，這些斑塊逐漸增多，動(dòng)脈管腔越來(lái)越狹窄，血流受阻，導(dǎo)致心臟缺血，從而產(chǎn)生CHD[10-11]。目前認(rèn)為，動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，由于炎癥反應(yīng)伴隨動(dòng)脈粥樣硬化乃至CHD的整個(gè)發(fā)生發(fā)展過(guò)程，炎癥等級(jí)越高，動(dòng)脈粥樣硬化程度越重，心血管病病死率越高，因此，血液中炎癥因子的濃度是診斷CHD及預(yù)測(cè)預(yù)后的臨床分子標(biāo)志物。

MCP-1和CRP是體內(nèi)重要的促炎因子，研究顯示，MCP-1和CRP等炎癥因子的增加，以及持續(xù)的炎癥反應(yīng)可誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化、血管狹窄和血流減少，這些癥狀會(huì)進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，從而形成惡性循環(huán)，最終導(dǎo)致CHD[12]。本研究結(jié)果顯示，老年CHD患者血清MCP-1和CRP的水平均明顯高于對(duì)照組，表明促炎癥因子MCP-1和CRP水平與CHD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。單核細(xì)胞是血清MCP-1和CRP的主要來(lái)源之一，進(jìn)一步分析也顯示，CHD患者單核細(xì)胞內(nèi)MCP-1和CRP mRNA水平均明顯高于對(duì)照組，而且，CHD患者單核細(xì)胞內(nèi)MCP-1 mRNA水平與血清中MCP-1水平呈正相關(guān)，而且單核細(xì)胞內(nèi)CRP mRNA水平與血清中CRP水平呈正相關(guān)，也證實(shí)了這一點(diǎn)。

進(jìn)一步，本研究分析了CHD的危險(xiǎn)因素。相關(guān)性分析結(jié)果顯示CHD患者的TG和TC均與血清中MCP-1和CRP水平均呈正相關(guān)。既往研究顯示，MCP-1通過(guò)與CCR2(MCP-1受體)/PKC信號(hào)通路，一方面促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖并修復(fù)損傷的血管內(nèi)膜[13]，另一方面，過(guò)度的增殖引起動(dòng)脈硬化和血管重塑，同時(shí)不斷攝取脂質(zhì)形成脂質(zhì)池，促進(jìn)脂質(zhì)代謝異常，加重動(dòng)脈粥樣硬化和纖維化。另外，MCP-1還可刺激單核巨噬細(xì)胞合成IL-6和基質(zhì)金屬蛋白酶等細(xì)胞因子，使斑塊不穩(wěn)定甚至破裂[14]。而CRP可促進(jìn)巨噬細(xì)胞攝取低密度脂蛋白并轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞，從而形成動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，在斑塊中也可檢測(cè)到CRP[15]。本研究和既往研究結(jié)果說(shuō)明炎癥反應(yīng)能夠促進(jìn)脂質(zhì)代謝異常，而脂質(zhì)代謝異常又可進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，二者間相互作用，相互調(diào)節(jié)共同促進(jìn)進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，血清MCP-1和CRP與老年CHD緊密相關(guān)，這兩種炎癥因子引起的炎癥反應(yīng)是觸發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的根本原因，可以作為檢測(cè)CHD心肌缺血損傷程度的炎癥標(biāo)志物。

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