汪 慧

（安徽省宣城市郎溪縣建平鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，安徽 郎溪 242100）

?；撬幔╰aurine）又名牛膽堿，化學(xué)名為2-氨基乙烷亞磺酸，是人及動(dòng)物體內(nèi)的一種含硫氨基酸，普遍存在于各種組織細(xì)胞內(nèi)液中，其中腦、心臟和肌肉內(nèi)含量最高。?；撬崾切募〖?xì)胞內(nèi)含量最豐富的自由氨基酸，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)、清除氧自由基、抗脂質(zhì)過氧化和穩(wěn)定細(xì)胞膜等多種生物學(xué)功能［1-2］，是體內(nèi)重要的內(nèi)源性抗損傷物質(zhì)，對心肌缺血及再灌注損傷具有一定防治作用。萬福生等［3-4］采用結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈法（左前降支法）制備心肌缺血模型，發(fā)現(xiàn)牛磺酸對心肌缺血的心肌細(xì)胞凋亡與Fas/FasL基因表達(dá)水平增高有較好的頡頏作用，還發(fā)現(xiàn)牛磺酸可降低心肌Bax蛋白的表達(dá)，增加Bcl-2蛋白的表達(dá)。

目前，關(guān)于牛磺酸對急性心肌缺血模型家兔心電圖的影響報(bào)道比較少見。該研究采用垂體后葉素注射法制備家兔急性心肌缺血模型，研究?；撬釋?shí)驗(yàn)家兔心肌缺血癥狀的保護(hù)作用，以期為擴(kuò)展其應(yīng)用范圍提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康青紫藍(lán)家兔，由安徽科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品及試劑

垂體后葉素注射液 （規(guī)格：6 U/mL，批號：H34022977），蚌埠市宏業(yè)生化制藥廠生產(chǎn)；生理鹽水（批號：2012073034），安徽豐原藥業(yè)股份有限公司無為藥廠生產(chǎn)；戊巴比妥鈉（批號：F2004117），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；牛磺酸 （批號：2010061534），蚌埠化學(xué)試劑有限公司。

1.3 主要儀器

計(jì)算機(jī) （惠普2310MP），BL-410生物信號采集與處理系統(tǒng) （成都泰盟電子科技有限公司），YP6000電子天平（上海精科天平）等。

1.4 5%?；撬嵘睇}水溶液的制備

用電子天平稱取?；撬?.00 g，放入燒杯中，取適量生理鹽水倒入燒杯，用玻璃棒輕輕攪拌，至?；撬崛咳芙猓賹⑵涞谷?00 mL容量瓶中，加生理鹽水至100 mL定容。

1.5 戊巴比妥鈉溶液的制備

用電子天平稱取戊巴比妥鈉1.50 g，放入燒杯中，取適量蒸餾水倒入燒杯，用玻璃棒輕輕攪拌，至戊巴比妥鈉全部溶解，再將其倒入50 mL容量瓶中，加蒸餾水至50 mL定容。

1.6 家兔心肌缺血模型的建立

耳緣靜脈注射30 mg/（kg·BW）戊巴比妥鈉麻醉家兔，仰臥保定。將心電導(dǎo)聯(lián)的一端與兔連接，紅色（右前肢）、黃色（左前肢）、綠色（左后肢）、黑色（右后肢）、白色（胸）各導(dǎo)聯(lián)分別通過銀針插入皮下（四肢內(nèi)側(cè)肌肉不發(fā)達(dá)區(qū)）。另一端與BL-410生理信號采集系統(tǒng)的2通道相連，設(shè)置機(jī)能參數(shù)：增益 G（1000）、時(shí)間常數(shù) T（0.1 s）、濾波 F（100 Hz），選擇 50 Hz抑制，記錄正常心電圖，5 min后耳緣靜脈注射垂體后葉素2 U/（kg·BW），并且在10 s內(nèi)勻速注射完成，觀察Ⅱ?qū)?lián)心電圖變化，若出現(xiàn)T波高聳、Q-T間期延長、心律不齊等現(xiàn)象，則心肌缺血模型建立成功。

表1 不同劑量的?；撬嵘睇}水溶液對家兔心電圖P波和T波峰值及QRS波群振幅的影響（n=9）mV

1.7 藥物處理及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

取已制備的5%牛磺酸生理鹽水溶液0.5、1、2、4mL，分別加入生理鹽水 3.5、3、2、0mL，制成終濃度為 25 mg/（kg·BW）（Ⅰ組）、50 mg/（kg·BW）（Ⅱ組）、100 mg/（kg·BW）（Ⅲ組）、200 mg/（kg·BW）（Ⅳ組）的4個(gè)劑量組的?；撬嵘睇}水溶液；當(dāng)心肌缺血模型建立后，記錄心電圖1 min，而后再將4個(gè)不同劑量的?；撬崛芤河傻蛣┝康礁邉┝恳来味夓o脈緩慢注射，各劑量觀察心電圖5 min，記錄不同時(shí)段心電圖變化；設(shè)立正常對照組、模型組進(jìn)行比較。

1.8 觀察指標(biāo)

采用區(qū)間測量法觀察缺血前后P波和T波峰值、QRS波群振幅、Q-T間期以及心率的變化。所有文件來自于心電圖記錄文件的Ⅱ?qū)?lián)不同時(shí)段的觀察指標(biāo)。

1.9 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用X±SD（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，各指標(biāo)變化的組間差異顯著性采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同劑量的牛磺酸生理鹽水溶液對家兔心電圖波峰值及振幅的影響

由表1可知，各劑量組與模型組比較表現(xiàn)為P波峰值無顯著影響（P＞0.05）；對于QRS波群振幅主要表現(xiàn)為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組與模型組差異極顯著（P＜0.01）；對于T波峰值主要表現(xiàn)為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組與模型組差異極顯著（P＜0.01）。各劑量組與正常對照組比較，P波峰值無顯著影響 （P＞0.05），對于QRS波群振幅主要表現(xiàn)為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與正常對照組差異極顯著（P＜0.01），Ⅳ組與正常對照組差異顯著（P＜0.05）；對于T波峰值主要表現(xiàn)為Ⅰ、Ⅱ組與正常對照組差異極顯著（P＜0.01），Ⅲ、Ⅳ組與正常對照組差異不顯著（P＞0.05）。

由圖1可知，模型組T波峰值、QRS波群振幅明顯高于正常對照組，當(dāng)由低到高依次注入不同劑量的5%?；撬嵘睇}水溶液時(shí)，可見T波抬高、QRS波群振幅抬高現(xiàn)象逐漸緩解，T波、QRS波群逐漸恢復(fù)到正常水平，而P波無變化。

3 ABO血型抗原與鼻出血關(guān)系見表5。在特發(fā)性鼻出血患者中，具有B抗原鼻出血的發(fā)病率是不具有B抗原者發(fā)病率的1.45，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.359，P＜0.05），無 A、B 抗原的特發(fā)性鼻出血的發(fā)病率是具有A、B抗原的1.35倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.4，P＜0.05）。

2.2 不同劑量的?；撬嵘睇}水溶液對家兔心電圖Q-T間期及心率的影響

正常對照組家兔的心電圖見圖2，模型對照組家兔的心電圖見圖3。

由表2可知，模型組與正常對照組的Q-T間期及心率差異極顯著（P＜0.01）；對于Q-T間期來說，Ⅲ、Ⅳ組與模型組相比差異極顯著（P＜0.01），Ⅱ組與模型組相比差異顯著（P＜0.05），Ⅰ組與模型組相比差異不顯著（P＞0.05）；對于心率來說，各劑量組與模型組相比差異極顯著（P＜0.01）。各劑量組與正常對照組比較，Q-T間期主要表現(xiàn)為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組與正常對照組相比差異極顯著 （P＜0.01）；心率主要表現(xiàn)為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組與正常對照組相比差異極顯著（P＜0.01）。由圖4、圖5可知，模型組的心率低于正常對照組，Q-T間期延長，由低到高依次注入4個(gè)不同劑量的?；撬崛芤汉?，心率加快，Q-T間期縮短。

圖1 不同劑量的牛磺酸生理鹽水溶液對家兔心電圖P波和T波峰值及QRS波群振幅的影響

圖2 家兔正常心電圖

圖3 家兔缺血模型心電圖

表2 不同劑量的?；撬嵘睇}水溶液對家兔心電圖Q-T間期及心率的影響 （n=9）

3 討論

冠狀動(dòng)脈性心臟病是一種最常見的心臟病，是指因冠狀動(dòng)脈狹窄及供血、供氧不足引起的心肌機(jī)能障礙和（或）器質(zhì)性病變，故又稱缺血性心肌病。采用垂體后葉素致急性心肌缺血是目前評價(jià)抗心肌缺血藥作用的常用模型［5］。

圖4 不同劑量的?；撬嵘睇}水溶液對家兔心電圖心率的影響

該試驗(yàn)采用垂體后葉素進(jìn)行心肌缺血的造模，可導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈痙攣，從而使心肌嚴(yán)重缺血，造成供氧失衡，加以外周阻力增加，導(dǎo)致心臟負(fù)荷加重。當(dāng)心肌急性缺血時(shí)，心室壁張力降低，引起心功能不全，表現(xiàn)在心電圖的改變和心率等指標(biāo)發(fā)生變化［6］。心肌缺血的主要心電圖特征表現(xiàn)為ST段的抬高和T波的高聳及心率減慢［7-9］。該試驗(yàn)中?；撬峤M心電圖T波峰值、QRS波群振幅明顯降低，Q-T間期明顯縮短，心率變快，這表明?；撬峋哂忻黠@的抗心肌缺血作用。心肌組織在缺血、缺氧或再灌注時(shí)產(chǎn)生大量氧自由基。由于心肌細(xì)胞膜中豐富的不飽和脂肪酸易受氧自由基的氧化損害，使其生成脂質(zhì)過氧化物，導(dǎo)致膜磷脂降解，從而使膜對Ca2+的通透性增加。細(xì)胞內(nèi)鈣超負(fù)荷又可激活磷脂酶A2，破壞膜的完整性。而?；撬峋哂蟹€(wěn)定細(xì)胞膜的作用，保護(hù)細(xì)胞膜磷脂免受降解，調(diào)節(jié)膜對離子的通透性，對抗鈣超負(fù)荷引起的心肌損害［10］。

心臟的缺血和缺血/再灌注損傷不僅能引起心肌細(xì)胞壞死，還可導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡。有許多因素參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控，其中Bcl-2、Bax和Fas基因?qū)Φ蛲龅恼{(diào)控備受重視。Takahashi等［11］首創(chuàng)心肌細(xì)胞損傷及凋亡的模型，進(jìn)而使用該模型觀察牛磺酸對心肌缺血損傷的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)牛磺酸能顯著抑制心肌細(xì)胞的凋亡，而抑制凋亡的機(jī)制則與抑制 Apaf-1/caspase-9 apoptosome 有關(guān)［12］。萬福生等［3］采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法制備大鼠心肌缺血模型，利用轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)脫氧尿苷三磷酸缺口末端標(biāo)記法檢測心肌凋亡細(xì)胞，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測Fas/FasL蛋白水平，RT-PCR法分析Fas基因mRNA表達(dá)變化，結(jié)果表明：牛磺酸能明顯降低心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，對Fas/FasL基因表達(dá)水平增高有較好的頡頏作用；能抑制心肌組織丙二醛（MDA）的生成，提高 Ca2+-ATP 酶活性。李愛英等［13］研究表明，缺血/再灌注的心肌組織中Fas和Bax蛋白表達(dá)增多，Bcl-2/Bax比值降低，心肌細(xì)胞的凋亡率升高；牛磺酸預(yù)處理后，F(xiàn)as和Bax蛋白表達(dá)顯著減少，Bcl-2/Bax比值升高，且減少缺血再灌注時(shí)的心肌細(xì)胞凋亡，表明?；撬峋哂袦p少心肌細(xì)胞凋亡的作用。程何祥等［14］的研究也表明?；撬崮軠p少缺血/再灌注心肌細(xì)胞的凋亡。

圖5 不同劑量的?；撬嵘睇}水溶液對家兔心電圖Q-T間期的影響

牛磺酸在心臟中的含量較為豐富，約占心臟全部游離氨基酸的一半以上，因而它對心臟的作用較為廣泛，且可以進(jìn)行外源性地補(bǔ)充，因此，能夠?qū)剐呐K的多種病理狀態(tài)。?；撬嶙鳛橐环N廣譜的細(xì)胞保護(hù)劑，在抗心肌缺血、抗心律失常、抗再灌注損傷、心肌保護(hù)等方面發(fā)揮著重要的作用。?；撬嵬ㄟ^以下幾個(gè)方面對心臟起保護(hù)作用。第一，?；撬崮軌蛲ㄟ^膜穩(wěn)定、抗氧化、抗脂質(zhì)過氧化損傷、清除氧自由基等途徑，降低缺血/再灌注所致的紅細(xì)胞聚集指數(shù)升高，并通過降低全血黏度及血漿黏度、減輕鈣超載、減少細(xì)胞凋亡等作用發(fā)揮抗心肌缺血/再灌注損傷作用。第二，?；撬峋哂锌剐穆墒С５淖饔谩２捎肔angendorff法在家兔心臟上觀察了?；撬峥鼓I上腺素誘發(fā)心律失常的作用，發(fā)現(xiàn)10-5～10-4mol/L的?；撬岵粌H能減少腎上腺素誘發(fā)心律失常的發(fā)生率，而且能延長誘發(fā)心律失常潛伏期，縮短心律失常持續(xù)時(shí)間［15］。牛磺酸對心肌缺血/再灌注損傷所致的心律失常作用是通過膜穩(wěn)定作用及自由基清除作用實(shí)現(xiàn)的［16］。?；撬徇€可以預(yù)防靜注氯化鈣生理鹽水所致心律失常動(dòng)物模型的室顫發(fā)生率及死亡率［17］。第三，?；撬峋哂锌辜?xì)胞凋亡作用。第四，?；撬嵬ㄟ^抗脂質(zhì)過氧化、調(diào)節(jié)鈣離子濃度、保護(hù)心肌細(xì)胞膜等作用來對抗阿霉素所致的心肌損害［18］。

4 小結(jié)

在該試驗(yàn)中，經(jīng)耳緣靜脈注射垂體后葉素，家兔心肌缺血模型成功建立。從低到高依次靜脈注射不同劑量的牛磺酸生理鹽水溶液后，可觀察到T波峰值、QRS波群振幅、Q-T間期及心率均有變化，隨著牛磺酸劑量的加大而趨于正常水平。由此可見，?；撬釋π募∪毖哂忻黠@的改善作用。

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