王 菲，婁 靜

河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院(鄭州 450000)

糖尿病性骨質(zhì)疏松癥(Diabetic osteoporosis，DOP)是指2型糖尿病(T2DM)合并骨強(qiáng)度減弱、骨脆性增高、單位體積的骨量減少以及骨組織的細(xì)微結(jié)構(gòu)變化等系列全身性骨質(zhì)病變[1-3]。DOP是T2DM的一項重要且多發(fā)的骨骼系統(tǒng)并發(fā)癥，DOP患者骨折損傷的風(fēng)險顯著提高，且發(fā)生骨損傷后易出現(xiàn)愈合困難等繼發(fā)性傷害[4-6]。西醫(yī)治療本病主要以控制血糖、增強(qiáng)骨密度等對癥治療為主。對于改善患者主要癥狀雖有一定效果，但對于患者體質(zhì)與致病環(huán)境療效無法滿足治療要求，因此易出現(xiàn)復(fù)發(fā)且長期用藥不良反應(yīng)較高。中醫(yī)理論認(rèn)為腎為骨之源；T2DM為消渴之癥主要因為腎虛所致，因此二病同源，治療時應(yīng)從腎論治。我們在中醫(yī)理論的基礎(chǔ)上制定出補腎強(qiáng)骨湯治療本病，為了客觀評估其對DOP的療效，開展本次動物實驗，現(xiàn)將具體情況于下文詳細(xì)闡述。

材料與方法

1 實驗試劑與儀器 使用儀器：使用羅氏自動型生化分析儀，MEDILINK公司出品的雙能X線骨密度檢測儀。使用試劑：美國Sigma出品的鏈脲佐菌素。自擬補腎強(qiáng)骨湯方劑組成：山萸肉24 g，生地、熟地、金毛狗、菟絲子、補骨脂各15 g，牛膝、續(xù)斷各12 g，地龍、甘草各10 g；均購自同仁堂中藥飲片公司。安慰劑：屈臣氏蒸餾水。實驗動物：購自鄭州大學(xué)實驗動物中心，月齡3個月的SPF級雄性SD大鼠60只。

2 造模方法 全部大鼠均于18～22 ℃，濕度40%～50%，自然照明，定期通風(fēng)換氣的實驗室內(nèi)飼養(yǎng)。自上述60只大鼠中隨機(jī)選取10只納入空白組，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料常規(guī)喂養(yǎng)，自由飲食。其余50只大鼠制備為DOP模型，以高糖高脂飼料喂養(yǎng)，飼料配制：常規(guī)飼料為基礎(chǔ)，加入20%的蔗糖、15%的熟豬油、2.5%的膽固醇，喂養(yǎng)4周；禁食正常飲水12 h后，給予鏈脲佐菌素(STZ)30 mg/kg于左下腹部處注射。腹腔注射 STZ后持續(xù)高脂高糖飼料喂養(yǎng)6周，之后采集尾靜脈血樣。化驗血糖水平≥16.7mmol/L時為T2DM造模成功[7]。T2DM大鼠持續(xù)高脂高糖喂養(yǎng)7周后，以雙能X線骨密度檢測儀進(jìn)行BMD 測量。BMD檢測時，依據(jù)35 mg/kg體重劑量給予戊巴比妥鈉，腹腔注射麻醉，使大鼠取仰臥位，四肢充分外展，使骨骼均在掃描窗內(nèi)避免重疊。以BMD<空白組BMD均值的2.5個標(biāo)準(zhǔn)差的T2DM大鼠為DOP大鼠造模成功標(biāo)準(zhǔn)[7]。

3 分組與干預(yù)方法 于全部DOP造模成功的大鼠中隨機(jī)選取30只，均分后分別納入模型組、陽性對照組及觀察組，每組各10只。觀察組給予自擬補腎強(qiáng)骨湯治療，將補腎強(qiáng)骨湯以水煎取湯汁，按15g/kg體重劑量給予灌胃，1次/d，持續(xù)12周。模型組不予任何治療干預(yù)措施。陽性對照組給予與觀察組同等劑量的蒸餾水(安慰劑)灌胃，持續(xù)12周。

4 檢驗方法 各組均于觀察組與陽性對照組干預(yù)治療12周后，同時采取腹主靜脈血樣3 ml，靜置30 min后，以3000 r/min速度離心10 min，分離血清，使用全自動生化分析儀檢測空腹血糖、空腹胰島素、血鈣、血磷、堿性磷酸酶、BMD、IGF-1、TNF-α表達(dá)水平。

5 統(tǒng)計學(xué)方法 實驗所得數(shù)據(jù)錄入至SPSS 19.0軟件當(dāng)中，以單因素ANOVA分析各組間數(shù)據(jù)的差異性，進(jìn)一步兩兩對比以LSD-L分析；P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 空腹血糖及胰島素水平比較 見表1。模型組、陽性對照組、觀察組大鼠空腹血糖、空腹胰島素與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組與陽性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；觀察組空腹血糖低于模型組、陽性對照組，空腹胰島素高于模型組、陽性對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 四組空腹血糖及胰島素檢測對比(mmol/L)

注：與空白組對比,★P<0.05;與模型組對比,☆P<0.05;與陽性對照組對比,▲P<0.05

2 血鈣、血磷、堿性磷酸酶及BMD比較 見表2。模型組、陽性對照組、觀察組大鼠血鈣、血磷、堿性磷酸酶及BMD與空白組均具有差異(P<0.05)；模型組與陽性對照組無差異(P>0.05)；觀察組血鈣、血磷、堿性磷酸酶及BMD均優(yōu)于模型組與陽性對照組(P<0.05)。

表2 四組血鈣、血磷、堿性磷酸酶及BMD對比

注：與空白組對比,★P<0.05;與模型組對比,☆P<0.05;與陽性對照組對比,▲P<0.05

3 血清IGF-1、TNF-α表達(dá)水平比較 見表3。模型組、陽性對照組、觀察組大鼠血清IGF-1、TNF-α表達(dá)水平與空白組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；模型組與陽性對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；觀察組IGF-1、TNF-α表達(dá)水平均優(yōu)于模型組與陽性對照組(P<0.05)。

表3 四組IGF-1、TNF-α表達(dá)水平對比

注：與空白組對比,★P<0.05;與模型組對比,☆P<0.05;與陽性對照組對比,▲P<0.05

討 論

近些年來，我國經(jīng)濟(jì)飛速發(fā)展，國民收入水平顯著提高，飲食結(jié)構(gòu)也隨之出現(xiàn)較大改變，加之遺傳因素等多種因素導(dǎo)致我國T2DM的發(fā)病率逐年上升[8]。目前T2DM已經(jīng)引起全社會的廣泛關(guān)注。骨質(zhì)疏松作為T2DM在骨骼系統(tǒng)的重要并發(fā)癥應(yīng)給予足夠重視。T2DM可誘發(fā)骨質(zhì)疏松，骨質(zhì)疏松又直接加大了患者骨折傷害的風(fēng)險，骨折損傷可對患者的生活質(zhì)量造成較大的不良影響，同時T2DM亦增加了骨質(zhì)疏松性骨折患者骨愈合的難度[9-10]。因此探尋DOP的理想治療方案對于醫(yī)患雙方均具有重要意義。有研究表明黃芪、骨碎補等中藥對于DOP大鼠的成骨細(xì)胞、IGF-1等多項細(xì)胞因子均具有明確的改善作用[11-13]。IGF-1是骨生長的一項重要因子，直接作用于機(jī)體的骨原細(xì)胞，可促進(jìn)DNA合成成骨細(xì)胞及其分化，提高成骨細(xì)胞總量。IGF-1還可經(jīng)由拮抗骨膠原的降解發(fā)揮調(diào)整骨吸收量的作用，可維持骨量的動態(tài)平衡。IGF-1表達(dá)的異常降低說明骨礦化的速度減低，或者成骨細(xì)胞的活性減弱，提示骨形成的減少。因此IGF-1可作為骨質(zhì)疏松的一項血清標(biāo)志物。DOP以T2DM為基礎(chǔ)，增加了慢性炎癥的風(fēng)險，TNF-α作為一項重要的炎性標(biāo)志物，其升高表達(dá)可提示機(jī)體炎性反應(yīng)的程度，炎性病理反應(yīng)可加大骨礦物丟失的風(fēng)險。因此TNF-α表達(dá)水平可作為DOP的一項輔助評估指標(biāo)。

中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為DOP屬于“消渴、骨痿”的范疇[14]。消渴為根而骨痿則為標(biāo)[15]。消渴癥的成因為腎虛內(nèi)燥致使的脈絡(luò)瘀滯，這一致病機(jī)理與骨痿病機(jī)是一致的，因此二病同源均應(yīng)從“腎”論治。治療應(yīng)以補腎、化瘀、潤燥、強(qiáng)骨為原則。我們在中醫(yī)理論的基礎(chǔ)上擬定出補腎強(qiáng)骨湯治療本病，方中生地甘寒清熱，質(zhì)潤養(yǎng)陰，有清熱涼血、養(yǎng)陰生津，通便潤腸功效，對消渴病的陰虛證有很好的療效。熟地微溫、味甘質(zhì)潤、入肝腎經(jīng)，可滋陰補血、養(yǎng)血，以補精益髓功效為主，主治消渴以及精血虧虛之腰酸、骨軟腳弱等癥。山萸肉入肝腎經(jīng)，有補益肝腎,固脫收斂功效，主治消渴，尿頻數(shù)、虛汗頻頻。金毛狗脊具有滋補肝腎、強(qiáng)筋骨、抗風(fēng)濕、壯腰膝作用，對于風(fēng)濕疼痛以及肝腎虧虛癥效果顯著。菟絲子入肝腎經(jīng)，益氣力、補不足、堅筋骨，可添精益髓，主治消渴熱證、助人筋脈、去腰疼膝冷。補骨脂治療腎陽不足的腰膝冷痛、溫下元治虛冷尿頻。牛膝入于肝腎經(jīng)，性善下行。具有補肝腎、通血脈、強(qiáng)筋骨、利關(guān)節(jié)作用。續(xù)斷味苦，性辛微溫，有補肝益腎、強(qiáng)健筋骨，療傷續(xù)折功效，主治腰膝酸痛，跌打損傷。地龍性味咸寒，通絡(luò)止痛，具有良好的改善微循環(huán)作用，還可治消渴病，有降血糖作用。甘草清熱解毒，調(diào)和諸藥。

本次研究旨在分析上述自擬補腎強(qiáng)骨湯對于DOP的治療作用。通過動物實驗證明，模型組、觀察組、陽性對照組與空白組之間血糖水平、胰島素水平以及血磷、血鈣、堿性磷酸酶及BMD均具有明確差異性，證明DOP建模成功。以自擬補腎強(qiáng)骨湯灌胃12周后，觀察組大鼠各項觀察指標(biāo)均優(yōu)于陽性對照組與模型組，而以安慰劑灌胃的陽性對照組則與模型組無差異，充分的說明了自擬補腎強(qiáng)骨湯對于DOP大鼠具有明確的治療作用，但觀察組各項觀察指標(biāo)與空白組間依然存在差異性。觀察組治療12周后 IGF-1可見明顯回升，TNF-α可見明顯下降，兩項指標(biāo)的表達(dá)水平明顯優(yōu)于模型組與陽性對照組，但與空白組仍具有差異性。上述研究數(shù)據(jù)對比結(jié)果說明以自擬補腎強(qiáng)骨湯單純灌胃治療12周尚不能達(dá)到完全治愈的療效，但對于DOP大鼠具有明確療效。

綜上所述，自擬補腎強(qiáng)骨湯對于DOP具有明確療效，但單純治療12周尚無法完全治愈。提示臨床應(yīng)用過程中可聯(lián)合西藥進(jìn)行治療以提高臨床療效或縮短療程。

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