李可成 劉艷萍 張華玲 莫冰彬

(柳州市人民醫(yī)院 柳州 545006)

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1試劑

日本SYSMEX XE2100全自動(dòng)血液分析儀原裝配套試劑與質(zhì)控物，1%草酸銨稀釋液。

1.1.2設(shè)備

日本SYSMEX XE2100全自動(dòng)血液分析儀， NIKON-80i雙目顯微鏡，改良牛鮑計(jì)數(shù)板。

1.2 方法

1.2.1病人血樣的收集

研究對(duì)象為本院住院急門診病人全血標(biāo)本，由全自動(dòng)血液分析儀電阻抗法檢測(cè)符合紅細(xì)胞平均體積(MCV)<80fl且紅細(xì)胞平均分布寬度(RDW)>15.4%或10.9%≤RDW≤15.4%為入組條件。每天收集符合入組要求的新鮮的2ml靜脈血，使用的抗凝劑為EDTA-K2，在2h內(nèi)檢測(cè)完畢。

1.2.2標(biāo)本檢測(cè)

檢測(cè)標(biāo)本前，用質(zhì)控物對(duì)XE-2100全自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行測(cè)試，保證儀器在控的前提下檢測(cè)標(biāo)本。每份標(biāo)本用3種方法進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)：電阻抗法、光學(xué)法、手工鏡檢法。電阻抗法(PLT-I)檢測(cè)采用SYSMEX XE2100全自動(dòng)血液分析儀的計(jì)數(shù)和細(xì)胞分類(CBC+DIFF)通道進(jìn)行檢測(cè)；光學(xué)法(PLT-O/RET)檢測(cè)采用計(jì)數(shù)和細(xì)胞分類(CBC+DIFF)及網(wǎng)織紅細(xì)胞(PLT-O/RET)通道進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)完畢后記錄PLT-I及PLT-O的數(shù)值。儀器檢測(cè)標(biāo)本的同時(shí)進(jìn)行顯微鏡計(jì)數(shù)[1]，用毛細(xì)吸管抽取20μl靜脈血加入0.38ml草酸銨稀釋液中，搖勻后滴入牛鮑計(jì)數(shù)板上下兩池，室溫靜置15min后，于1h內(nèi)計(jì)數(shù)完畢，人工計(jì)數(shù)兩次取平均值(兩次誤差控制在5%以內(nèi))，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。

1.2.3標(biāo)本分組

根據(jù)RDW和MCV分為70≤MCV<80且RDW(10.9%≤RDW≤15.4%)正常組、70≤MCV<80且RDW>15.4%組、60≤MCV<70且RDW正常組、60≤MCV<70且RDW>15.4%組與MCV<60且RDW>15.4%組。每組20份標(biāo)本。

1.2.4數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理

2 結(jié)果

當(dāng)70≤MCV<80時(shí)，RDW正常組與RDW>15.4%組，3種檢測(cè)方法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表1～2；當(dāng)60≤MCV<70時(shí)，RDW正常組3種檢測(cè)方法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表3，但電阻抗法檢測(cè)與手工鏡檢法和光學(xué)法檢測(cè)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，手工鏡檢法和光學(xué)法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表4；當(dāng)MCV<60，RDW>15.4%時(shí)，電阻抗法檢測(cè)與手工鏡檢法和光學(xué)法檢測(cè)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，手工鏡檢法和光學(xué)法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表5。

組別n(例數(shù))血小板數(shù)量手工鏡檢法20226．78±56．481光學(xué)法20221．28±55．96?電阻抗法20249．83±62．877△#

注：*與鏡檢法比較，P>0.05;△與鏡檢法比較，P>0.05；#與光學(xué)法比較，P>0.05。

組別n(例數(shù))血小板數(shù)量手工鏡檢法20269．0±153．95光學(xué)法20256．5±150．30?電阻抗法20308．35±172．71△#

注：*與鏡檢法比較，P>0.05;△與鏡檢法比較，P>0.05；#與光學(xué)法比較，P>0.05。

組別n(例數(shù))血小板數(shù)量手工鏡檢法20227．55±65．85光學(xué)法20216．60±62．48?電阻抗法20265．60±71．25△#

注：*與鏡檢法比較，P>0.05;△與鏡檢法比較，P>0.05；#與光學(xué)法比較，P>0.05。

組別n(例數(shù))血小板數(shù)量手工鏡檢法20278．35±65．07光學(xué)法20264．05±63．85?電阻抗法20331．50±74．33△#

注：*與鏡檢法比較，P>0.05;△與鏡檢法比較，P<0.05；#與光學(xué)法比較，P<0.05。

組別n(例數(shù))血小板數(shù)量手工鏡檢法20323．00±131．22光學(xué)法20306．75±123．49?電阻抗法20397．05±171．49△#

注：*與鏡檢法比較，P>0.05;△與鏡檢法比較，P<0.05；#與光學(xué)法比較，P<0.05。

3 討論

血小板在血細(xì)胞中體積最小，是由巨核細(xì)胞脫顆粒產(chǎn)生的無(wú)核，但具有酶和生理活性的多功能細(xì)胞。由于具有很好的聚集和黏附功能，在生理性止血和纖溶系統(tǒng)中起著重要的作用。在研究止血與凝血障礙、出血性疾病的診斷與治療時(shí)血小板的檢測(cè)結(jié)果是重要指標(biāo)之一，也是其它血小板參數(shù)可靠性的基礎(chǔ)，其檢測(cè)結(jié)果的可靠性有著重要的參考依據(jù)。低值血小板對(duì)臨床疾病的診斷和治療也有著極其重要的指導(dǎo)價(jià)值，是臨床診斷與治療各種原因引起血小板減少癥的重要檢查項(xiàng)目。但是在實(shí)際的血小板檢測(cè)工作中，由于血小板自身容易被破壞和易受到外界因素的干擾，全自動(dòng)血液分析儀仍存在無(wú)法排除受干擾因素影響的現(xiàn)象。大多數(shù)全自動(dòng)血液分析儀受限于其功能,未能將血小板與“非血小板顆?！狈珠_(kāi),如小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、白細(xì)胞碎片、細(xì)菌和真菌以及某些免疫復(fù)合物等,若將這些干擾物當(dāng)作血小板加以計(jì)數(shù),會(huì)造成血小板計(jì)數(shù)結(jié)果假性增高；而當(dāng)血液中出現(xiàn)大血小板時(shí)，其被當(dāng)作小紅細(xì)胞計(jì)數(shù),會(huì)造成血小板假性降低[2]。

申巖梅[3]認(rèn)為當(dāng)紅細(xì)胞(MPV<55fl)時(shí)，會(huì)使電阻抗法的計(jì)數(shù)值顯著地偏高。這就表明血液分析儀在紅細(xì)胞體積相對(duì)較小(MPV<55fl)時(shí)對(duì)血小板計(jì)數(shù)會(huì)產(chǎn)生明顯的干擾，若是血小板的直方圖不規(guī)則，則其電阻抗法計(jì)數(shù)結(jié)果同樣會(huì)發(fā)生顯著的升高[4～5]。CD-1700血細(xì)胞分析儀血小板計(jì)數(shù)是采用電子阻抗原理，血小板和紅細(xì)胞是在同一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)中通過(guò)顆粒大小來(lái)加以識(shí)別的，紅細(xì)胞與血小板的測(cè)量常會(huì)出現(xiàn)信號(hào)交叉，將小紅細(xì)胞的脈沖信號(hào)視為血小板信號(hào)從而導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)值的假性增高[6]。所以由于電阻抗法檢測(cè)血小板原理的局限性，結(jié)果易受多種因素影響，所以目前使用的全自動(dòng)血液分析儀，只要是用電阻抗法檢測(cè)血小板，都會(huì)存在血小板假性增高的問(wèn)題。

光學(xué)法(PLT-O)是通過(guò)Plymethine 和 Oxazine對(duì)血小板核酸熒光染色，采用前向散射光和側(cè)向熒光對(duì)血小板內(nèi)部 DNA 和 RNA 成分進(jìn)行鑒別計(jì)數(shù)，因此光學(xué)法在一定程度上改善了電阻抗法原理僅依靠血小板體積測(cè)定所帶來(lái)的局限性，能有效地鑒別小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片和大血小板，從而排除干擾，使得血小板計(jì)數(shù)結(jié)果更可靠[7～9]。

光學(xué)法解決了小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片和大血小板等因素對(duì)血小板計(jì)數(shù)的影響，但是也存在一定的局限性。電阻抗RBC/PLT-I檢測(cè)通道每次檢測(cè)20～25萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,而RET/PLT-O通道內(nèi)光學(xué)法每次卻只能計(jì)數(shù)60 000個(gè)細(xì)胞,其中血小板是3 000個(gè),因此電阻抗法的血小板數(shù)目的準(zhǔn)確性與重復(fù)性比較好，但光學(xué)法對(duì)血小板形態(tài)的鑒別是染色后通過(guò)激光辨認(rèn)的,異常標(biāo)本中的小白細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片或血小板數(shù)目較少時(shí),光學(xué)法能更準(zhǔn)確地將血小板鑒別出來(lái),克服了電阻抗法計(jì)數(shù)血小板的干擾，對(duì)血小板具有較強(qiáng)的鑒別能力。由此說(shuō)明電阻抗法和光學(xué)法各有其優(yōu)點(diǎn),在標(biāo)本血小板計(jì)數(shù)出現(xiàn)異常結(jié)果的時(shí)候，使用兩種方法對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行互相驗(yàn)證，可提高全自動(dòng)血液分析儀對(duì)血小板計(jì)數(shù)的能力。因此，本文經(jīng)過(guò)對(duì)電阻抗法(PLT-I)、光學(xué)法(PLT-O)和手工鏡檢法3種血小板計(jì)數(shù)方法的比較認(rèn)為當(dāng)全自動(dòng)血液分析儀計(jì)數(shù)血小板RDW>15.4%且MCV<70時(shí)，應(yīng)使用光學(xué)法或人工鏡檢法進(jìn)行復(fù)檢以提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 葉應(yīng)嫵,王毓三.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第2版.南京:東南大學(xué)出版社,1997,22～23.

2 陳梅,黃麗云,方偉禎,等.XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀兩種血小板計(jì)數(shù)方法與鏡檢法計(jì)數(shù)血小板的比較.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2008,7(3):99～100.

3 申巖梅.血液分析儀RT-7600血小板準(zhǔn)確性與手工復(fù)檢的比較分析.延安大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版),2012,10(4):4～5.

4 朱忠勇.應(yīng)用血液分析儀后復(fù)查血片的內(nèi)容和方法及程序.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2008,26(12):785～787.

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6 李玉芹,楊明清.小紅細(xì)胞對(duì)不同血細(xì)胞分析儀血小板計(jì)數(shù)結(jié)果的影響.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2005,9(5):790～791.

7 王德春,林寶順,鄭合勇,等.ADVIA-120血細(xì)胞分析儀測(cè)定血小板性能的探討.齊魯醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),2000,11(4):88～89.

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9 王曉賢,劉潔,周永紅.XT-4000i血液分析儀血小板兩種測(cè)定方法與血涂片復(fù)檢的對(duì)比.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2012,7(26):106～107.