宮旭胤，蘇永生，王 斐，劉立山，姚喜喜

（1.甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜草與綠色農(nóng)業(yè)研究所，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070）

綿羊?qū)儆诩竟?jié)性發(fā)情動物，除少數(shù)常年發(fā)情品種如湖羊、小尾寒羊和陶賽特等之外，大多數(shù)的綿羊品種都在短日照的秋冬季發(fā)情，春夏季進入乏情期，繁殖活動較弱[1]。綿羊一般為單胎，1胎產(chǎn)羔1只，即使是如邊區(qū)萊斯特、東弗里生以及布魯拉美利奴等多胎品種，1胎也只產(chǎn)羔2～3只[1]。因此，將同期發(fā)情與胚胎移植技術(shù)配合使用，可以充分發(fā)揮一些優(yōu)良綿羊品種的生產(chǎn)潛能，加快綿羊繁殖的速度，提高綿羊的生產(chǎn)水平，具有明顯的經(jīng)濟效益。

同期發(fā)情是綿羊繁殖技術(shù)的主要方法之一，它可以使母羊在短時間內(nèi)集中發(fā)情，以便有計劃地組織配種或人工輸精，同時也是胚胎移植的基礎(chǔ)和重要環(huán)節(jié)[2]。尤其在優(yōu)良綿羊品種的改良和推廣示范工作中，需要對母羊進行大批同期發(fā)情處理，來提高生產(chǎn)效率，從而達到集中移植和產(chǎn)羔的目的。有研究表明，供體和受體發(fā)情的同期化直接影響到胚胎移植的成功率[3]，母畜生殖狀況、藥品質(zhì)量、處理方案的選擇、季節(jié)等構(gòu)成影響綿羊同期發(fā)情效果的諸多因素[4]。

胚胎移植技術(shù)作為一項新的繁殖技術(shù)，為家畜迅速良種化提供了新的途徑[5]。胚胎移植在擴大良種覆蓋率方面有重要作用[6-7]，已廣泛地應(yīng)用于生產(chǎn)并發(fā)揮了巨大的商業(yè)價值[8]。影響胚胎移植效果的因素很多，目前對影響移植效果的因素研究多集中在胚胎、受體以及胚胎與受體的相互作用這3個方面[9]，其中胚胎質(zhì)量和胚齡是影響胚胎移植成功率的重要因素[10-13]。受體對移植成功率的影響因素較多，包括誘導(dǎo)發(fā)情方法、發(fā)情狀況、外源性激素的處理以及受體年齡和季節(jié)等[14-16]。其中季節(jié)因素對移植的影響較為復(fù)雜，其研究結(jié)果不盡一致。有研究表明，在非繁殖季節(jié)和繁殖季節(jié)時進行綿羊胚胎移植，受體的同期發(fā)情效果有差異，妊娠率卻無顯著差異[17]；母羊在春夏季（尤其是2—5月）繁殖活動較秋冬季弱[18]。因此，研究季節(jié)因素對受體綿羊同期發(fā)情和胚胎移植效果具有重要意義。我們以小尾寒羊為試驗受體，采用放置CIDR結(jié)合注射PG、FSH的方法，對供體和受體綿羊分別在冬季和春季進行同期發(fā)情處理，并在發(fā)情后進行胚胎移植試驗，以期為綿羊冬春季節(jié)誘導(dǎo)同期發(fā)情、胚胎移植等技術(shù)提供應(yīng)用參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供體為年齡2～4歲、膘情良好、無明顯產(chǎn)道損傷、無繁殖障礙和其他傳染性疾病的特科賽爾和黑頭薩福克羊，受體為小尾寒羊。試驗藥品有羊用海綿栓CIDR（EAZI-BREED CIDR Sheep and Goat Device新西蘭生產(chǎn)）、PMSG（內(nèi)蒙古松山獸藥廠生產(chǎn)，1000 IU/瓶）、FSH（寧波市三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）、PG（寧波市三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)0.2 mg×10/盒）。

1.2 試驗設(shè)計

根據(jù)配對試驗設(shè)計原則，選擇年齡在2～4歲，膘情良好無明顯產(chǎn)道損傷、無繁殖障礙和其他傳染性疾病的特科賽爾和黑頭薩?？斯?2只作為供體羊，其中1只薩?？嗽诙緯r有陰道發(fā)炎癥狀，故冬季未使用。選擇204只小尾寒羊作為受體羊，第1批冬季處理94只，第2批春季處理110只，由于實驗動物量過大，為減少操作誤差，將試驗組羊只隨機分為I、II和III 3個處理組，各試驗組采用相同的處理條件。

1.3 時間和地點

試驗選擇在冬季（2016年12月27日至2017年1月18日）和春季（2017年3月2日至4月22日）進行。試驗地點位于嘉峪關(guān)市新景養(yǎng)殖農(nóng)民專業(yè)合作社，該場地處東經(jīng)104°12′48″～105°01′06″、北緯 35°17′54″～36°02′40″，海拔 1 850 m，年平均日照時數(shù)2 500 h，年平均氣溫6.3℃。

1.4 試驗羊只的飼養(yǎng)管理

試驗?zāi)秆蚓鶠樯犸曪曫B(yǎng)，以組單獨組群，專人管理。提供良好的外部環(huán)境，供給全價的日糧和清潔的飲水，保持足夠的運動。公羊在配種前除提供全價日糧和清潔飲水外，補飼以適量的胡蘿卜和雞蛋，并進行訓(xùn)練。所有羊只在處理前均打耳號，采集血樣并做布病檢測。

1.5 同期發(fā)情處理方法

同期發(fā)情方法如表1所示。對供體羊只和受體羊只處理方法不同，供體羊只為PG＋CIDR栓＋FSH處理組，首次注射PG 0.1 mg后第6天放栓，第17天注射FSH 25 IU并同時去栓，處理組在最后一次注射后連續(xù)72 h試情。受體羊只為PG+PMSG處理組，間隔8 d分別注射2次PG 0.1 mg，并在第2次注射同時注射PMSG300 IU。

表1 胚胎移植羊只處理方式

1.6 發(fā)情判斷標(biāo)準

以母羊主動接近公羊鳴叫表現(xiàn)溫順接受爬跨，同時人工觀察母羊陰道口紅腫有黏液流出為母羊發(fā)情的判斷標(biāo)準。

1.7 受體羊黃體觀察及胚胎移植

試驗羊只發(fā)情后第7天（發(fā)情日為0 d），利用腹腔鏡觀察發(fā)情羊卵巢排卵及黃體發(fā)育情況[19]，選擇正常排卵并發(fā)育為功能黃體的受體小尾寒羊進行胚胎移植，移植所用胚胎無角陶賽特和黑頭薩?？搜驈墓w體內(nèi)采集，不同季節(jié)按相同的方法處理。

1.8 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

所有試驗數(shù)據(jù)采用Excel進行初步統(tǒng)計，再用SPSS19.0軟件進行t檢驗，分析季節(jié)對小尾寒羊同期發(fā)情與胚胎移植效果的差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 季節(jié)對母羊同期發(fā)情率的影響

采用激素陰道海綿栓法，對供體羊和受體小尾寒羊進行超數(shù)排卵同期發(fā)情處理。結(jié)果表明（表2），冬季供體羊只的發(fā)情率為90.9%，顯著高于春季的發(fā)情率75.0%（P＜0.05）；冬季受體小尾寒羊的發(fā)情率84.0%，顯著高于春季的發(fā)情率76.4%（P＜0.05）。

表2 冬春兩季受體羊只的同期發(fā)情

2.2 季節(jié)對供體母羊超數(shù)排卵的影響

由表3可知，季節(jié)對供體母羊超數(shù)排卵個數(shù)、可利用卵子個數(shù)及卵子回收率均有不同影響。冬季供體羊只可利用卵子個數(shù)高于春季，冬季的卵子回收率85.3%，顯著高于春季的67.4%（P＜0.05）。

表3 冬春兩季受體羊只的超排

2.3 季節(jié)對母羊胚胎移植的影響

由表4可知，季節(jié)對受體母羊受胎率和繁殖率均有不同的影響。冬季受體小尾寒羊的受胎率為65.0%，與春季的60.0%差異不顯著（P＞0.05）；冬季受體小尾寒羊的繁殖率達到100.0%，顯著高于春季的82.0%（P＜0.05）。

表4 冬春兩季受體羊只的胚胎移植

3 小結(jié)與討論

綿羊是短日照季節(jié)性多次發(fā)情的繁殖家畜，因此，綿羊的繁殖季節(jié)一般為9—11月[19]。本試驗分別于2016年12月和2017年4月對小尾寒羊作為受體進行發(fā)情同期化處理，結(jié)果表明，冬季供體羊只的發(fā)情率為90.9%，顯著高于春季的75.0%；冬季受體羊的發(fā)情率為84.0%，顯著高于春季的76.4%。說明胚胎移植供體同期發(fā)情處理在冬春兩季均可進行，無論供體和受體，均表現(xiàn)出冬季發(fā)情率顯著高于春季，其中小尾寒羊在冬季的同期發(fā)情率顯著高于春季的結(jié)果與李煥玲等[20]和 Mitchell等[21]等報道的一致。

研究表明，綿羊的季節(jié)性生殖特性會影響到在不同季節(jié)進行的同期發(fā)情和超排效果[21]。在冬季發(fā)情季節(jié)，卵巢上卵泡在內(nèi)環(huán)境各種激素協(xié)調(diào)作用下呈現(xiàn)周期性發(fā)育，因此超排效果較好，可以得到較高的排卵數(shù)。本研究表明，冬季供體羊只可利用卵子個數(shù)多于春季，冬季卵子回收率85.3%，顯著高于春季的67.4%，這與文獻報道一致。

目前有關(guān)胚胎移植季節(jié)和受胎率之間的關(guān)系文獻報道較多，如昭通綿羊在秋冬季移植的妊娠率顯著高于春季[21-22]，秋季移植的妊娠率（68.6%）顯著高于春季（58.5%）[22]，秋冬季移植的羊羔率比在春季的要高[23]，與本研究冬季受體小尾寒羊的受胎率65.0%和春季受體小尾寒羊的受胎率60.0%差異不顯著；冬季受體小尾寒羊的繁殖率達到100.0%，顯著高于春季的82.0%的結(jié)果一致。

綜上所述，季節(jié)對供體、受體（小尾寒羊）同期發(fā)情率均有顯著影響，且冬季發(fā)情率高于春季；冬季供體羊只可利用卵子個數(shù)高于春季可利用卵子個數(shù)，冬季卵子回收率85.3%顯著高于春季的卵子回收率67.4%。季節(jié)對冬春季小尾寒羊的受胎率沒有顯著影響，冬季受體小尾寒羊的繁殖率100.0%顯著高于春季受體小尾寒羊的發(fā)情率82.0%。

參考文獻：

[1]易金云.季節(jié)與品種對綿羊超數(shù)排卵的影響[D].蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[2] 李秋艷，閻鳳祥，侯 健，等.不同因素對綿羊同期發(fā)情的影響[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2008（12）：48-50.

[3]ROWSON L E A，MOORE R M.Embryo transfer in sheep：the significance of synchronizing oestrus in the sonor and recipient animal[J].J.Reprod.Fertil.，1986，11（7）：207-212.

[4]桑潤滋.動物繁殖生物技術(shù)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006.

[5]徐 君.在繁殖季節(jié)與非繁殖季節(jié)以小尾寒羊為受體進行冷凍胚胎移植的對比試驗[J].中國畜牧獸醫(yī)，2007（34）：139-140.

[6]THIBIER M，NIBART M.Clinical aspects of embryo transfer in some demestic farm animals[J].Anim.Rep.Sci.，1992（28）：139-148.

[7] SMITH C.Use of embryo transfer in genetic improvement of sheep[J].Anim.Reprod.，1986（42）：81-88.

[8]COGNIE Y.State of the art in sheep-goat embryo transfer[J].Theriogenology，1999（51）：105-116.

[9]SPELL A R， BEAL W E， CORAH L R，et al.Evaluation recipient and embryo factors that affect pregnancy rates of embryo transfer in beef cattle[J].Theriogenology，2001（56）：287-297.

[10]QI M Y，LI W.Study on the embryo transfer in nonbreeding season with imported sheep embryos[J].China Herbiv，2003，23（6）：17-18.

[11]BARI F， KHALID M， HARESIGN W，et al.Factors affecting the survival of sheep embryos after transfer within a MOET program[J].Theriogenology，2003（59）：1265-1275.

[12]王永軍，田秀娥，陳玉林，等.胚齡對Dorper羊冷凍胚胎移植效果的影響研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)通報，2003，19（5）：10-11.

[13]SLAVIK T，F(xiàn)ULKA J，GOLL I.Pregnancy rate after the transfer of sheep embryos originated from randomly chosed oocytes matured and fertilized in vitro[J].Theriogenology，1992（38）：749-756.

[14]趙 霞，達 來，阿拉坦沙.不同誘導(dǎo)發(fā)情對胚胎移植產(chǎn)羔率的影響[J]. 中國草食動物，2003，23（2）：6-7.

[15]和力新，曹 冶，李 紅，等.不同品種受體羊?qū)ε咛ヒ浦埠蟠L發(fā)育的影響[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2004，17（3）：386-389.

[16]WEI ZHANG，JIANHUA SUN，LIXIA PEI，et al.Systematic review of acupuncture for functional constipation[J].Journal of Acupuncture and Tuina Science，2014（12）：89-95.

[17]丁 威，李 武.繁殖與非繁殖季節(jié)綿羊冷凍胚胎移植結(jié)果的比較[J].湖北畜牧獸醫(yī)，2004（3）：23-24.

[18]LASSOUED N，REKIK M，KHENISSI S，et al.Seasonality of oestrus，ovulation and ovulation rate of Sicilo Sarde sheep[J].Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition，2014，98（4）：686-692.

[19]王家貴.不同條件綿羊同期發(fā)情效果研究[D].蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[20]李煥玲，王立銘，王金文，等.季節(jié)對綿羊冷凍胚胎移植效果的影響[J].當(dāng)代畜牧，2004（5）：37-38.

[21]MITCHELL L M， DINGWALL W S， MYLNE M J A，et al.Season affects character istics of preovulatory LHsurge and embryo viability in superovulated ewes[J].Anim.Rep.Sci.，2002（74）：163-174.

[22]吳曉東，蘇 雷，和協(xié)超，等.受體品種、體重及移植季節(jié)對杜泊羊胚胎妊娠率和新生羔羊體重的影響[J]. 動物學(xué)研究，2005，26（6）：627-631.

[23]CHAGAS E SILVA J，LOPES DA COSTA L，CIDADAO R，et al.Plasma progesterone profiles，ovulation rate，donor embryo yield and recipient embryo survival in native Saloia sheep in the fall and spring breeding seasons[J].Therigenology，2003（60）：521-532.